王晨星， 郭 佳， 楊剛龍， 劉昌梅， 關(guān) 鋒

(江南大學(xué) 生物工程學(xué)院 糖化學(xué)與生物技術(shù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 無錫 214122)

低氧誘導(dǎo)引發(fā)乳腺腫瘤細(xì)胞MDA-MB-231 N-糖鏈表達(dá)差異研究

王晨星， 郭 佳， 楊剛龍， 劉昌梅， 關(guān) 鋒

(江南大學(xué) 生物工程學(xué)院 糖化學(xué)與生物技術(shù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 無錫 214122)

低氧是腫瘤組織中常見的病理現(xiàn)象之一，低氧微環(huán)境能改變細(xì)胞內(nèi)葡萄糖代謝途徑，增加胞內(nèi)葡萄糖攝取，提高核苷酸糖含量。以人源惡性乳腺腫瘤細(xì)胞MDA-MB-231為研究對(duì)象，發(fā)現(xiàn)低氧培養(yǎng)較常氧培養(yǎng)的細(xì)胞形態(tài)呈纖維化，細(xì)胞遷移能力提高，上皮細(xì)胞標(biāo)志物β-catenin表達(dá)下調(diào)，間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物fibronectin表達(dá)上調(diào)，說明低氧促進(jìn)了細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化。利用基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)比較低氧前后細(xì)胞內(nèi)N-糖鏈表達(dá)差異，發(fā)現(xiàn)常氧和低氧培養(yǎng)MDA-MB-231細(xì)胞中均鑒定到17種N-糖鏈結(jié)構(gòu)，但糖鏈豐度存在差異；且在低氧培養(yǎng)細(xì)胞中高甘露糖型、復(fù)合型中四天線型N-糖鏈表達(dá)升高，而雜合型、平分型、復(fù)合型(包括二天線型和三天線型)、巖藻糖化和唾液酸化N-糖鏈的表達(dá)降低。凝集素Con A和LCA細(xì)胞熒光染色結(jié)果與質(zhì)譜分析一致。表明低氧可改變?nèi)橄倌[瘤細(xì)胞中N-糖鏈的表達(dá)，為進(jìn)一步尋找腫瘤特征性糖鏈、探索低氧誘導(dǎo)N-糖鏈表達(dá)差異的分子機(jī)理提供前期基礎(chǔ)。

低氧；上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化；MALDI-TOF/TOF-MS；N-糖鏈

AbstractTumor hypoxia is a common pathological feature in many cancers. Hypoxic microenvironments dramatically shift the pattern of intracellular glucose metabolism, which increase glucose uptake and nucleotide sugar levels. In this study, hypoxia-induced malignant breast tumor (MDA-MB-231) cell model was established. Under hypoxia conditions, MDA-MB-231 cells showed the fibrosis morphology. Expression level of β-catenin in hypoxia-treated cells was reduced, fibronectin was increased, and cell motility was enhanced, which indicated that hypoxia induces the epithelial-mesenchymal transition. The structures of N-glycans from normoxia and hypoxia-treated cells were further analyzed by matrix-assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry (MALDI-TOF-MS). Seventeen N-glycans were differentially expressed in normoxia and hypoxia-treated MDA-MB-231 cells. The high-mannose and tetra-antennary type of N-glycans were increased, while the hybrid type, bisecting type, biantennary type, triantennary type, fucosylation and sialylation of N-glycans were decreased in hypoxia-treated MDA-MB-231 cells. The study of lectin Con A and LCA fluorescence staining consistented with MS analysis. The present research indicates that hypoxia alters the expression of N-glycans in malignant breast tumor cells, which may provide the fundamental observations for further understanding functional roles of differential expression of N-glycans in hypoxia-treated cells．

Keywordshypoxia； epithelial-mesenchymal transition； MALDI-TOF/TOF-MS； N-glycan

病理性低氧是實(shí)體腫瘤發(fā)展過程中普遍存在的現(xiàn)象，也是腫瘤微環(huán)境的特征之一[1]。低氧能誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞代謝異常、血管生成、侵襲及遷移能力的改變。在臨床上，低氧對(duì)常規(guī)療法如化療和放療有抵抗作用，也與不同類型癌癥治療中表現(xiàn)出的預(yù)后差、易轉(zhuǎn)移相關(guān)[2]。研究發(fā)現(xiàn)，低氧也是誘導(dǎo)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-mesenchymal transition，EMT)過程的因素之一[3-4]。EMT是指上皮細(xì)胞在特定生理病理情況下獲得顯著的遷移和侵襲能力，轉(zhuǎn)化為具有間質(zhì)細(xì)胞表型和特性的細(xì)胞。有研究指出EMT過程中，糖聚合物及糖基轉(zhuǎn)移酶均有異常表達(dá)[5-6]。

糖基化修飾是蛋白質(zhì)一種重要的翻譯后修飾，真核生物中大部分蛋白質(zhì)發(fā)生了糖基化[7]。細(xì)胞中的糖蛋白質(zhì)參與了多種生物學(xué)過程，包括細(xì)胞黏附、受體激活、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和內(nèi)吞作用[9]。在許多疾病，如感染、炎癥反應(yīng)、癌細(xì)胞增殖及轉(zhuǎn)移中均發(fā)現(xiàn)異常的糖基化現(xiàn)象[9]。研究表明，低氧能改變細(xì)胞內(nèi)葡萄糖代謝，使其從有氧呼吸轉(zhuǎn)變?yōu)闊o氧糖酵解，增加胞內(nèi)葡萄糖攝取，同時(shí)提高胞內(nèi)核苷酸糖含量，特別是UDP-N-乙酰葡糖胺的含量，導(dǎo)致糖鏈結(jié)構(gòu)及細(xì)胞功能的改變[10]。Koike等[11]研究發(fā)現(xiàn)低氧增加了細(xì)胞表面唾液酸化Lewis x(E-選擇素的特殊配體)的含量，并提高整合素α5和黏結(jié)蛋白聚糖4的表達(dá)。而低氧對(duì)細(xì)胞整體糖鏈表達(dá)譜的影響并無相關(guān)報(bào)道。

本文以人惡性乳腺腫瘤細(xì)胞MDA-MB-231為模型，研究低氧對(duì)細(xì)胞表型、細(xì)胞行為及糖鏈表達(dá)的影響，利用MALDI-TOF/TOF-MS技術(shù)和凝集素細(xì)胞熒光染色比較分析N-糖鏈的變化差異，以期從糖組學(xué)水平上尋找到腫瘤特征性糖鏈，并為深入研究低氧誘導(dǎo)腫瘤發(fā)展的分子機(jī)制提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 材料

人惡性乳腺腫瘤細(xì)胞MDA-MB-231購于ATCC。DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基、胎牛血清、青霉素和鏈霉素均購于Life technologies公司，低氧培養(yǎng)室購于Stemcell technologies公司。

抑肽酶，苯甲基磺酰氟(PMSF)，T-PER裂解液和Hoechst染色液購自Thermo Scientific公司；BCA蛋白檢測試劑盒和辣根過氧化酶標(biāo)記山羊抗小鼠IgG抗體購自碧云天生物技術(shù)研究所；Glut1抗體購于英國Abcam公司；β-catenin抗體購于美國BD公司；HIF-1a抗體購自Cell signaling公司；β-tubulin、fibronectin抗體購于美國Sigma公司；Pro-Light HRP化學(xué)發(fā)光檢測試劑購于天根生化科技有限公司。PNGase F酶購自美國New England Biolabs公司；Amicon Ultra-0.5 10 ku超濾管購于美國Millipore公司；Sepharose CL-4B瓊脂糖凝膠、尿素(Urea)、正丁醇(1-Butanol)、甲醇(Methanol)、碳酸氫銨(NH4HCO3)、二硫蘇糖醇(DTT)、碘乙酰胺(IAM)和2,5-二羥基苯酸乙酯(DHB)購于美國Sigma-Aldrich公司；伴刀豆凝集素(Conconvalin A, Con A)，小扁豆凝集素(Lens culinaris agglutinin, LCA)購自Vector公司。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)

使用含10%胎牛血清(FBS)、100 mg/L青霉素和100 mg/L鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基，于37℃含5% CO2及飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)MDA-MB-231細(xì)胞。待MDA-MB-231融合度至70%后，將細(xì)胞置于含1% O2、5% CO2和94% N2混合氣體的低氧培養(yǎng)室中37℃培養(yǎng)24 h。常氧對(duì)照組細(xì)胞置于5% CO2普通細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)。

1.2.2 蛋白質(zhì)印跡

收集細(xì)胞，預(yù)冷PBS潤洗3次，加入適量含1% PMSF和0.1%抑肽酶的T-PER裂解液，冰浴30 min，離心收集上清。使用BCA試劑盒測定蛋白濃度后進(jìn)行7.5%聚丙烯酰胺凝膠電泳。電泳結(jié)束后，將蛋白轉(zhuǎn)移至0.45 μm PVDF膜，用5%脫脂奶粉37℃封閉2 h，加入抗HIF-1a、fibronectin、β-catenin、Glut1或β-tubulin一抗4℃孵育過夜，TBST漂洗5次；加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗室溫孵育1 h，TBST漂洗5次，使用Pro-Light HRP化學(xué)發(fā)光檢測試劑顯色，用Bio-Rad ChemiDocTMXRS+成像系統(tǒng)進(jìn)行圖像采集。

1.2.3 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)

將適量MDA-MB-231細(xì)胞接入6孔板，在完全培養(yǎng)基中培養(yǎng)過夜，分別低氧常氧培養(yǎng)24 h，吸去培養(yǎng)基，用加樣器槍頭在每個(gè)孔中劃線，PBS潤洗3次，加入不含血清的培養(yǎng)基，分別在培養(yǎng)0、24 h時(shí)進(jìn)行拍照。

1.2.4 N-糖鏈的釋放

取2 mg蛋白樣品于10 ku超濾管中離心濃縮。加入8 mol/L尿素，10 mmol/L DTT溶液和20 mmol/L IAM溶液使蛋白變性溶解。加入40 mmol/L NH4HCO3溶液潤洗3次，將超濾管轉(zhuǎn)移至潔凈的收集管中，加入300 μL 40 mmol/L NH4HCO3溶液溶解的1 μL PNGase F酶溶液37℃靜置反應(yīng)12 h，離心收集流出液，冷凍干燥。

1.2.5 N-糖鏈的除鹽處理

將100 μL Sepharose 4B加入離心管中，用1∶1的甲醇∶水(V/V) 和5∶1∶1的正丁醇∶甲醇∶水(V/V/V)離心清洗，獲得預(yù)處理的Sepharose 4B凝膠。用500 μL的5∶1∶1正丁醇∶甲醇∶水(V/V/V)溶解N-糖鏈樣品，上樣至預(yù)處理好的Sepharose 4B凝膠中，室溫80 r/min振蕩反應(yīng)1 h，離心棄上清。用1 mL的5∶1∶1的正丁醇∶甲醇∶水(V/V/V)溶液重復(fù)清洗3次。加入500 μL的1∶1的甲醇∶水(V/V)溶液室溫140 r/min振蕩20 min洗脫N-糖鏈，離心收集上清，冷凍干燥后用MALDI-TOF/TOF-MS進(jìn)行檢測。

1.2.6 凝集素細(xì)胞染色

取適量細(xì)胞接種于24孔板中制作細(xì)胞爬片，待細(xì)胞融合度達(dá)到60%時(shí)，分別常氧低氧培養(yǎng)24 h。吸棄培養(yǎng)基，PBS潤洗3次，4%多聚甲醛固定細(xì)胞，PBS潤洗3次。加入0.1% TritonX-100溶液通透細(xì)胞，PBS潤洗3次，3%牛血清蛋白(BSA)溶液4℃封閉過夜。然后加入Cy3標(biāo)記的凝集素Con A和凝集素LCA室溫下避光孵育3 h，PBS潤洗3次，5 mg/L Hoechst染色10 min，PBS潤洗3次，最后將爬片倒扣在滴有Glycergel固封劑的載玻片上。用Nikon Eclipse E600激光共聚焦顯微鏡在10×60倍下觀察。

2 結(jié)果與分析

2.1 低氧對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞形態(tài)及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響

MDA-MB-231是一株人惡性乳腺腫瘤細(xì)胞株，常氧培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)為細(xì)長梭狀，排列整齊，間隙均勻。低氧培養(yǎng)24 h后，觀察到細(xì)胞形態(tài)更瘦長，分布更松散(圖1-A)。通過劃痕實(shí)驗(yàn)(圖1-B)發(fā)現(xiàn)，低氧培養(yǎng)后MDA-MB-231細(xì)胞遷移能力較常氧培養(yǎng)提高。

圖1 MDA-MB-231細(xì)胞低氧培養(yǎng)前后的特征比較

A：細(xì)胞形態(tài)(×100)；B：細(xì)胞遷移能力(×100)；C：蛋白標(biāo)志物表達(dá)

上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程中伴隨著β-catenin (上皮細(xì)胞標(biāo)志物)等連接分子表達(dá)下調(diào)，fibronectin(間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物)表達(dá)上調(diào)。利用蛋白質(zhì)印跡法檢測，發(fā)現(xiàn)低氧處理后，低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)表達(dá)上調(diào)，β-catenin表達(dá)下調(diào)，fibronectin表達(dá)上調(diào)，同時(shí)發(fā)現(xiàn)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(Glut1)的表達(dá)顯著上調(diào)(圖1-C)。以上結(jié)果表明，低氧促進(jìn)細(xì)胞發(fā)生EMT，是引發(fā)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的重要誘導(dǎo)因素。

2.2 MDA-MB-231細(xì)胞低氧前后N-糖鏈的質(zhì)譜分析

N-糖鏈參與多種生物學(xué)過程，包括細(xì)胞間識(shí)別，細(xì)胞黏附，細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)等。本實(shí)驗(yàn)借助MALDI-TOF/TOF-MS比較MDA-MB-231細(xì)胞低氧前后N-糖鏈的變化。利用糖鏈結(jié)構(gòu)分析軟件GlycoWorkbench參考GlycomeDB糖鏈數(shù)據(jù)庫篩選糖鏈質(zhì)譜峰并進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定和標(biāo)注(圖2)。從圖2中可以看出N-糖鏈主要分布在質(zhì)荷比(m/z) 1200～2700之間。在常氧培養(yǎng)和低氧培養(yǎng)的MDA-MB-231細(xì)胞中各檢測到17種N-糖鏈，其中16種糖鏈在兩種培養(yǎng)條件下都可檢測到，但m/z1499.240的N-糖鏈在常氧培養(yǎng)下特異性表達(dá)，而m/z1890.780的N-糖鏈在低氧培養(yǎng)下特異性表達(dá)。為了精確測定糖鏈結(jié)構(gòu)，本實(shí)驗(yàn)又對(duì)不同分子量的糖鏈進(jìn)行了二級(jí)質(zhì)譜解析。圖3為2個(gè)隨機(jī)挑選的N-糖鏈二級(jí)質(zhì)譜峰圖，分別為m/z1743.626和m/z1905.801的高甘露糖型N-糖鏈，通過質(zhì)譜二級(jí)碎裂信息結(jié)合GlycoWorkbench軟件確定其糖鏈結(jié)構(gòu)。之后借助質(zhì)譜檢測到的質(zhì)譜峰強(qiáng)度比值(Intensity ratio)進(jìn)行相對(duì)定量分析，以確定該糖鏈在常氧培養(yǎng)及低氧培養(yǎng)下的表達(dá)水平，結(jié)合二級(jí)質(zhì)譜分析推定的糖鏈結(jié)構(gòu)，各N-糖鏈質(zhì)荷比理論值、質(zhì)荷比實(shí)驗(yàn)值、推定結(jié)構(gòu)以及相對(duì)表達(dá)強(qiáng)度如表1所示。結(jié)果表明，N-糖鏈在低氧培養(yǎng)和常氧培養(yǎng)后表達(dá)水平差異明顯，如m/z為1403.480、1565.265、1727.082、1759.678和1809.743等N-糖鏈在低氧培養(yǎng)后低表達(dá)，而m/z為1419.657、1905.722和2067.783的N-糖鏈在低氧培養(yǎng)后高表達(dá)。

為了分析MDA-MB-231細(xì)胞在常氧培養(yǎng)和低氧培養(yǎng)下不同類型糖鏈結(jié)構(gòu)的表達(dá)差異，將其分類成高甘露糖型、雜合型、復(fù)合型(包括二天線型、三天線型和四天線型)、平分型、巖藻糖化和唾液酸化N-糖鏈，如表2所示，分別累加不同類型糖鏈的相對(duì)強(qiáng)度并計(jì)算其在對(duì)應(yīng)實(shí)驗(yàn)組中的比重。結(jié)果表明，與常氧培養(yǎng)細(xì)胞相比，低氧培養(yǎng)細(xì)胞高甘露糖型(High-mannose type)及復(fù)合型中四天線型(Tetra-antennary type)糖鏈的含量升高，而雜合型(Hybrid type)、復(fù)合型(Biantennary and triantennary type，包括二天線型和三天線型)、平分型(Bisecting type)、巖藻糖化(Fucosylated)和唾液酸化(Sialylated)糖鏈的含量降低。

圖 2 常氧培養(yǎng)MDA-MB-231細(xì)胞與低氧培養(yǎng)MDA-MB-231細(xì)胞N-糖鏈一級(jí)質(zhì)譜圖

2.3 MDA-MB-231細(xì)胞低氧前后凝集素?zé)晒馊旧?/h3>

為了進(jìn)一步驗(yàn)證MDA-MB-231細(xì)胞低氧前后N-糖鏈質(zhì)譜分析結(jié)果的準(zhǔn)確性，選取凝集素Con A、LCA進(jìn)行凝集素細(xì)胞熒光染色驗(yàn)證。伴刀豆凝集素Con A與甘露糖有較強(qiáng)的親和力，可用于檢測細(xì)胞糖鏈中高甘露糖型的表達(dá)，而小扁豆凝集素LCA能特異性親和核心巖藻糖結(jié)構(gòu)的糖鏈。結(jié)果如圖4所示，相比常氧培養(yǎng)細(xì)胞，低氧培養(yǎng)細(xì)胞凝集素Con A染色后熒光強(qiáng)度增強(qiáng)，表明低氧培養(yǎng)后胞內(nèi)高甘露糖型糖鏈表達(dá)上升；而凝集素LCA染色后，低氧培養(yǎng)細(xì)胞熒光強(qiáng)度降低，表明低氧培養(yǎng)后胞內(nèi)核心巖藻糖化的糖鏈表達(dá)下降。以上2種凝集素低氧前后細(xì)胞熒光染色結(jié)果與糖鏈質(zhì)譜分析結(jié)果相一致。

圖 3 m/z 1743.626和1905.801的糖鏈二級(jí)質(zhì)譜圖

編號(hào)No.理論m/zCalculatedm/z實(shí)驗(yàn)m/zExperimentalm/z推定結(jié)構(gòu)Proposedstructures相對(duì)強(qiáng)度Relativeintensity[Average(CV%)]ControlHypoxia11241.4281241.7220.009(18%)0.004(54%)21257.4231257.5660.012(10%)0.007(16%)31403.4811403.4800.021(15%)0.006(12%)41419.4761419.6570.106(6%)0.115(2%)51501.5291499.2400.025(11%)ND61565.5331565.2650.040(15%)0.016(34%)71581.5281581.6030.130(8%)0.087(9%)

續(xù)表1(Continued table 1)

編號(hào)No.理論m/zCalculatedm/z實(shí)驗(yàn)m/zExperimentalm/z推定結(jié)構(gòu)Proposedstructures相對(duì)強(qiáng)度Relativeintensity[Average(CV%)]ControlHypoxia81727.5861727.0820.036(8%)0.019(42%)91743.5811743.6610.260(4%)0.260(5%)101758.6031759.6780.021(18%)0.005(24%)111809.6391809.7430.024(21%)0.013(43%)121891.8801890.780ND0.006(19%)131905.6341905.7220.261(3%)0.407(3%)141955.6971955.8440.008(6%)0.008(21%)152067.6872067.7830.021(18%)0.028(12%)162101.7562101.8960.007(27%)0.006(3%)172174.7722174.9060.014(31%)0.007(27%)182539.9042540.0500.008(30%)0.005(25%)

ND：not detected in the samples

表2 不同類型N-糖鏈的相對(duì)變化

3 討論

乳腺癌是常見的女性惡性腫瘤，近年來發(fā)病率一直呈上升趨勢。而在浸潤型乳腺癌中約有25%～40%含有低氧區(qū)域[12]。低氧是腫瘤微環(huán)境的基本特征之一[2]。腫瘤細(xì)胞對(duì)低氧的應(yīng)激一方面表現(xiàn)為低氧誘導(dǎo)因子介導(dǎo)的信號(hào)通路改變，影響腫瘤細(xì)胞的血管生成、侵襲和遷移能力;另一方面低氧促進(jìn)腫瘤細(xì)胞高糖酵解能量代謝表型的改變，促使腫瘤細(xì)胞攝入更多葡萄糖，積累UDP-GlcNAc，引發(fā)腫瘤細(xì)胞糖基化修飾的改變。當(dāng)前很多研究多從基因水平及蛋白質(zhì)水平探究低氧對(duì)細(xì)胞生物學(xué)行為的影響，而低氧過程誘導(dǎo)的細(xì)胞糖譜變化還沒有系統(tǒng)的研究。因此本文主要研究低氧對(duì)間質(zhì)轉(zhuǎn)化及糖組學(xué)的影響。

圖 4 低氧前后MDA-MB-231細(xì)胞凝集素?zé)晒馊旧珗D

A：細(xì)胞凝集素?zé)晒馊旧?×400)；B：Con A凝集素染色相對(duì)熒光強(qiáng)度分析(***P<0.001)；C：LCA凝集素染色相對(duì)熒光強(qiáng)度分析(***P<0.001)

通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，低氧誘導(dǎo)惡性乳腺癌細(xì)胞后EMT上皮細(xì)胞標(biāo)志物β-catenin下調(diào)，間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物fibronectin上調(diào)，細(xì)胞形態(tài)細(xì)長，松散更具間質(zhì)細(xì)胞表型，細(xì)胞遷移能力增強(qiáng)，說明低氧是引發(fā)間質(zhì)轉(zhuǎn)化的重要誘導(dǎo)因素。另外，細(xì)胞在低氧條件下Glut1表達(dá)顯著上調(diào)，與低氧促進(jìn)細(xì)胞代謝表型及糖基化修飾變化密切相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)借助質(zhì)譜技術(shù)對(duì)低氧培養(yǎng)及常氧培養(yǎng)惡性乳腺腫瘤細(xì)胞MDA-MB-231進(jìn)行N-糖鏈圖譜鑒定，分別鑒定和注釋了17種N-糖鏈及其結(jié)構(gòu)。通過對(duì)N-糖鏈的量化分析對(duì)比，確定了其在低氧培養(yǎng)前后惡性乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá)差異。糖鏈結(jié)構(gòu)的表達(dá)差異源于合成該糖鏈的相應(yīng)糖基轉(zhuǎn)移酶表達(dá)的改變，有報(bào)道表明，低氧影響多種糖基轉(zhuǎn)移酶的表達(dá)。Belo等[13]研究發(fā)現(xiàn)HIF-1α的高表達(dá)抑制了α 1,2-巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶fut1和fut2的表達(dá)，同時(shí)下調(diào)胰腺腫瘤細(xì)胞表面α 1,2-巖藻糖基化糖鏈的含量。Yin等[14]報(bào)道低氧誘導(dǎo)人結(jié)腸腫瘤細(xì)胞LS174T后β-1,4-半乳糖轉(zhuǎn)移酶V基因水平表達(dá)上調(diào)。此外，近年的研究還表明低氧誘導(dǎo)細(xì)胞糖基化水平的改變促進(jìn)腫瘤的發(fā)展。Ren等[15]研究發(fā)現(xiàn)低氧培養(yǎng)表皮鱗癌細(xì)胞A431后，細(xì)胞表面整合素α3糖基化發(fā)生改變同時(shí)促進(jìn)細(xì)胞的侵襲能力。

總之，本研究為低氧誘導(dǎo)乳腺腫瘤細(xì)胞相關(guān)的糖組學(xué)研究提供了前期基礎(chǔ)。將來的工作將根據(jù)特異性改變的糖鏈結(jié)構(gòu)，通過對(duì)相關(guān)糖基轉(zhuǎn)移酶基因的過表達(dá)或干擾表達(dá)，增強(qiáng)或減弱對(duì)應(yīng)糖鏈結(jié)構(gòu)的表達(dá)，進(jìn)一步探索N-糖鏈與低氧誘導(dǎo)乳腺癌發(fā)展之間的分子機(jī)制。

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Differential expression of N-glycans in hypoxia-induced human malignant breast tumor cells MDA-MB-231

WANG Chen-xing, GUO Jia, YANG Gang-long, LIU Chang-mei, GUAN Feng

(Key Laboratory of Carbohydrate Chemistry & Biotechnology， Ministry of Education， School of Biotechnology， Jiangnan University， Wuxi 214122， China)

R737.9

A

2095-1736(2017)05-0001-06

2016-08-30；

2016-09-13

國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(編號(hào)：81672537)

王晨星，碩士研究生，專業(yè)方向?yàn)樯锕こ?，E-mail：wangchenxing1992@163.com

關(guān) 鋒，博士，教授，研究方向?yàn)樘巧飳W(xué)，E-mail：fengguan@jiangnan.edu.cn

doi∶10.3969/j.issn.2095-1736.2017.05.001