周雙，梁文衛(wèi)，王明潔，孫蘭英，崔玉志

(黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院漿果研究所，黑龍江 綏棱 152204)

藍(lán)莓組培苗耐高pH值培養(yǎng)基鑒定

周雙，梁文衛(wèi)，王明潔，孫蘭英，崔玉志

(黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院漿果研究所，黑龍江 綏棱 152204)

以“美登”、“北陸”、“野生型”為試材，采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)，在不同pH值的繼代培養(yǎng)基中，研究藍(lán)莓對高pH值培養(yǎng)基的適應(yīng)性。結(jié)果表明：pH值為5.8條件下的增殖系數(shù)可以作為藍(lán)莓繼代培養(yǎng)期耐高pH培養(yǎng)基的鑒定的參考指標(biāo)。最終鑒定出，“美登”的耐高pH值培養(yǎng)基能力較強(qiáng),“北陸”次之，“野生型”最弱。

藍(lán)莓；耐高pH培養(yǎng)基；鑒定

Abstract： In ‘Mei Deng’ ‘Bei Lu’ ‘Wile Type’ as experimental materials to study, used plant tissue culture technology, the adaptability ofVacciniumuliginosumto high pH resistant medium was studied in different pH of subculture medium. The resulte showed that the proliferation factor at pH 5.8 can be used as a reference for the identification of high-pH culture medium for blueberry subculture. Eventually identified ‘Mei Deng’ strong resistance, high pH medium, ‘Bei Lu’ middle , ‘Wile Type’ weak.

Keywords：Vacciniumuliginosum; High pH Culture Medium Tolerance; Identification

藍(lán)莓(VacciniumuliginosumLinn.)系杜鵑花科(Ericaceae)越橘屬(Vacciniumspp．)，多年生落葉或常綠灌木或小灌木。因其在鮮食、加工、醫(yī)療和觀賞等方面的應(yīng)用，已被譽(yù)為21世紀(jì)范圍內(nèi)最具有發(fā)展前景的優(yōu)良果樹[1-2]。藍(lán)莓對土壤條件要求嚴(yán)格，喜濕潤、疏松、有機(jī)質(zhì)含量高(8%～12%)的土壤，并且一般適宜栽培在pH值為4.0～5.0的土壤。我國只有少部分地區(qū)能夠達(dá)到藍(lán)莓正常生長需要的土壤要求，絕大部分地區(qū)需要改善土壤理化性狀后才能進(jìn)行藍(lán)莓栽培。生產(chǎn)中常用施加硫磺粉調(diào)節(jié)土壤pH值[3]。但在施用硫磺粉過程中要控制用量，因其容易對藍(lán)莓植株和生態(tài)造成迫害，同時增加生產(chǎn)成本，降低藍(lán)莓收益[4]。

目前我國多位學(xué)者對玉米[5]等作物品種本身的耐酸堿性等逆境脅迫能力進(jìn)行了廣泛研究,并篩選和培育出許多耐逆境脅迫品種。我國對植物耐逆境脅迫研究具有良好的實(shí)踐基礎(chǔ)。梁文衛(wèi)等[6]通過pH梯度馴化培養(yǎng)明顯提高“美登”藍(lán)莓對高pH值的適應(yīng)性。徐呈祥[7]等通過嫁接的方法提高藍(lán)莓對高pH土壤適應(yīng)性的能力。但是這些方法，既增加了勞動成本，又降低了勞動效率。所以挖掘藍(lán)莓品種本身的耐高pH值土壤能力,篩選和培育耐高pH值土壤品種,是現(xiàn)階段開發(fā)利用藍(lán)莓資源最為經(jīng)濟(jì)有效的途徑。

本文采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)，以“美登”“北陸”“野生型”為試材進(jìn)行耐高pH值培養(yǎng)基的適應(yīng)性分析，旨在篩選出藍(lán)莓耐高pH培養(yǎng)基的評價指標(biāo)以及耐高pH培養(yǎng)基的藍(lán)莓品種，以期為耐高pH藍(lán)莓品種的選育提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 材料

供試材料分別為東北地區(qū)代表品種矮叢藍(lán)莓品種‘美登’無根組培苗、‘野生型’、半高叢藍(lán)莓品種‘北陸’，均由黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院漿果研究所綜合實(shí)驗(yàn)室提供。

1.2 方法

將上述藍(lán)莓材料的無根組培苗剪成1cm大小帶單芽的莖段接種在改良的WPM +ZT 0.5mg/L+IBA 0.1mg/L+蔗糖25g/L+瓊脂10g/L的培養(yǎng)基中，用pH計進(jìn)行測定，用1 mol/L HCl或1mol/L NaOH調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH，pH分別調(diào)節(jié)為5.0、5.3、5.6、5.8、6.0、6.2、6.4和6.6共8個處理，每個pH處理接種10瓶，每瓶接種3個莖段。培養(yǎng)條件為溫度25℃，空氣相對濕度60%，光照強(qiáng)度3000 lx，光照周期16h/d。40d天后，調(diào)查其增殖系數(shù)、株高、葉色、去莖端愈傷組織的藍(lán)莓鮮重和干重。用Excel應(yīng)用軟件制圖做表，用SPSS 20.0統(tǒng)計分析軟件進(jìn)行方差分析，并用Duncan進(jìn)行多重比較，顯著水平P=0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同pH對藍(lán)莓增殖系數(shù)的影響

圖1 不同pH值對三種藍(lán)莓增殖系數(shù)的影響

增殖系數(shù)是藍(lán)莓繼代培養(yǎng)增殖效果的重要評定指標(biāo)。由圖1可知，隨著pH值的增加，“美登”、“北陸”的增殖系數(shù)呈現(xiàn)波動性增加在pH值為6.2達(dá)到最高后緩慢降低，而“野生型”的增殖系數(shù)在pH5.6時達(dá)到最高后急劇下降。說明隨著pH升高，3種藍(lán)莓的增殖能力存在差異。從單因素分析可以看出，在pH值為5.8時“美登”、“北陸” 、“野生型”的增殖系數(shù)達(dá)到差異顯著水平，隨著pH值的增加，“美登”、“北陸”與“野生型” 的增殖系數(shù)達(dá)到差異顯著水平，但“美登”與“北陸”之間差異不顯著。所以可以把pH值為5.8條件下的增殖系數(shù)作為藍(lán)莓繼代培養(yǎng)期耐高pH培養(yǎng)基的鑒定參考指標(biāo)?！懊赖恰?、“北陸”與“野生型”的平均增殖系數(shù)分別為5.71、5.37、2.95，“美登”、“北陸”與“野生型”的增殖系數(shù)與pH值為5.0時的增殖系數(shù)相比，在pH值為5.8時分別增加了135.81%、42.32%、-21.53%；在pH值為6.0時分別增加了160.93%、65.54%、-23.01%；在pH值為6.2時分別增加了177.91%、95.36%、-36.64%；在pH值為6.4時分別增加了132.44%、76.5%、-41.04%；在pH值為6.6時分別增加了103.83%、27.5%、-47.00%。說明3種藍(lán)莓對高pH值培養(yǎng)基的耐受力存在差異，其中“美登”的耐受力最高，“北陸”次之，“野生型”的耐受力最低。

2.2 不同pH對藍(lán)莓葉色的影響藍(lán)莓葉色的影響

葉色是植物生長狀態(tài)的直觀表現(xiàn)。3種藍(lán)莓單芽莖段在不同pH值的繼代培養(yǎng)基中的葉色(如表1所示)不同。“美登”在pH值為5.0、5.3、5.6、5.8、6.0時，葉色為綠色或濃綠，pH值在6.2后葉色開始變淡，變黃；“北陸”在pH值為5.0、5.3是葉色為淡綠，在pH值為5.6、5.8、6.0、6.2時，葉色為綠色或濃綠，當(dāng)pH值為6.4、6.6時，葉色變淡，變黃；“野生型”在pH值為5.6、5.8時葉色開始變淡，在pH值為6.4時，葉色發(fā)紅嚴(yán)重。說明“美登”、“北陸”與“野生型”葉色受高pH值培養(yǎng)基的影響存在差異，其中，“美登”的影響較小，“北陸”次之，“野生型”的影響最大。

表1 不同pH對三種藍(lán)莓葉色的影響

3 討論

增殖系數(shù)是藍(lán)莓繼代培養(yǎng)增殖效果的重要評定指標(biāo)。增殖系數(shù)越大，藍(lán)莓繁殖速度越快，短時間內(nèi)就可增加苗木數(shù)量，從而形成規(guī)模化生產(chǎn)[5]。但是藍(lán)莓喜疏松、有機(jī)質(zhì)含量高的酸性土壤，一般適宜的土壤pH值為4.5～5.5，土壤pH值過低或過高都會對其生長造成影響。選育耐高pH值的藍(lán)莓品種是解決藍(lán)莓實(shí)際生產(chǎn)中不耐高pH土壤的重要手段。本研究在不同高pH值的繼代培養(yǎng)基中，對3種藍(lán)莓品種進(jìn)行評價，結(jié)果表明當(dāng)pH值為5.8時，更適合對藍(lán)莓組培苗進(jìn)行耐高pH值培養(yǎng)基判定。本研究發(fā)現(xiàn)，適當(dāng)?shù)奶岣吲囵B(yǎng)基的pH值可以提高部分藍(lán)莓組培苗的增殖系數(shù)，這與曹增強(qiáng)等[9]的研究相似。同時研究發(fā)現(xiàn)，不同品種的藍(lán)莓組培苗耐高pH值培養(yǎng)基的能力存在差異，這與藍(lán)莓進(jìn)行露地栽培時呈現(xiàn)相似的結(jié)論[10-11]。

有研究表明，不同pH的培養(yǎng)基會影響藍(lán)莓組培苗對元素的吸收[9]。植物缺素或多素都會直接影響葉色的變化。所以對葉色的觀察是對藍(lán)莓組培苗耐高pH值培養(yǎng)基差異的一項(xiàng)重要參考依據(jù)。本研究表明：隨著培養(yǎng)基pH的升高，3種藍(lán)莓的葉色均受到影響?！耙吧汀笔苡绊懽畲?，“北陸”次之，“美登”最小。但葉色的變化是由元素失調(diào)引起，是一種元素失調(diào)還是多種元素失調(diào)相互作用，未見報道。但由于葉色受人為因素較大，只能作為藍(lán)莓耐高pH值培養(yǎng)基的輔助指標(biāo)。

通過對3份藍(lán)莓品種接種于不同高pH值培養(yǎng)基的方法進(jìn)行耐高pH值培養(yǎng)基指標(biāo)的鑒定及品種篩選，綜合上述結(jié)果我們可以用pH值為5.8條件下的增殖系數(shù)可以作為藍(lán)莓繼代培養(yǎng)期耐高pH值培養(yǎng)基的鑒定的參考指標(biāo)，方法簡單易行，適宜于大量材料的耐高pH培養(yǎng)基的鑒定和篩選。試驗(yàn)最終鑒定出，“美登”的耐高pH值培養(yǎng)基能力較強(qiáng),“北陸”次之，“野生型”最弱。

[1]黃春輝,夏思進(jìn),曲雪艷,等．藍(lán)莓的栽培利用現(xiàn)狀與發(fā)展前景[J].現(xiàn)代園藝，2011(6):41-43.

[2]修英濤，常鳳英，姜河，等.我國藍(lán)莓(越桔)栽培研究現(xiàn)狀及發(fā)張措施[J].遼寧農(nóng)業(yè)科學(xué)，2003(3)：21-23.

[3]唐雪東，李亞東，丁紹文，等．不同基質(zhì)和硫磺粉對越橘土壤和葉片礦質(zhì)營養(yǎng)的的影響[J]．吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2007，29(3):279-283．

[4]唐雪東，李亞東，吳林，等．土壤改良對越橘(Vaccimium)某些生理指標(biāo)的影響[J]．沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2005，34(6)：419-422

[5]張春宵.玉米耐鹽堿鑒定技術(shù)體系構(gòu)建與耐鹽堿種質(zhì)資源篩選[D].哈爾濱：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)，2010.

[6]梁文衛(wèi)，關(guān)瑩，周雙，等．‘美登’藍(lán)莓對高pH值適應(yīng)性的馴化提高試驗(yàn)[J].中國林副特產(chǎn)，2017(1):13-14

[7]徐呈祥，郭峰，馬艷萍，等.一種提高藍(lán)莓對高pH土壤適應(yīng)性的嫁接育苗方法：中國，CN104396559A[P].2015-03-11.

[8]姜冬， 張利萍．藍(lán)莓組織培養(yǎng)及快繁技術(shù)[J] ．中國林福特產(chǎn)，2012(4):12-14

[9]曹增強(qiáng)，徐瑩瑩，張寧，等.不同pH對藍(lán)莓組培苗生長和對藍(lán)莓組培苗生長和元素吸收的影響[J].中國農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2016,21(2)：50-57

[10]NORMANFC, PAULML. Blueberries for growers, gardeners and promoters[M].Painter Printing Company,2006:60-74.

[11]唐雪東，李亞東，臧俊華，等.土壤施硫?qū)υ浇凵L發(fā)育的影響[J].東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2004,35(5):553-560.

IdentificationofHighpHCultureMediumToleranceforVacciniumuliginosumTissueCulture

Zhou Shuang,Liang Wenwei,Wang Mingjie,Sun Langying,Cui Yuzhi

(Heilongjiang Academy of Agricultural Sciences Berries Institute,Suiling, Heilongjiang 152204)

2017-07-04

中央引導(dǎo)地方科技發(fā)展專項(xiàng)(ZY16C05-11)

周雙(1989-)，女，碩士，研究實(shí)習(xí)員，從事小漿果生物技術(shù)研究，E-mail：fengzhongxu@163.com。

S663.9

A

DOI.∶10.13268/j.cnki.fbsic.2017.05.006