侯 爽，商學(xué)君，王 沛*

（1.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院， 長(zhǎng)春 130117；2.吉林工商學(xué)院外國(guó)語(yǔ)學(xué)院，長(zhǎng)春 130507）

·方藥研究·

中藥燙傷膏組方醇提工藝的優(yōu)化及體外抑菌活性

侯 爽1，商學(xué)君2，王 沛1*

（1.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院， 長(zhǎng)春 130117；2.吉林工商學(xué)院外國(guó)語(yǔ)學(xué)院，長(zhǎng)春 130507）

目的 優(yōu)選中藥燙傷膏組方的醇提工藝條件并進(jìn)行抑菌效果考察。方法 采用L9（34）正交試驗(yàn)法優(yōu)選組方的醇提工藝，采用試管2倍稀釋法測(cè)定MIC。結(jié)果 最佳工藝的影響因素：提取次數(shù)＞乙醇濃度＞料液比＞提取時(shí)間，提取液對(duì)細(xì)菌的抑制效果較好。結(jié)論 最佳工藝用為8倍藥材量的60%乙醇溶液對(duì)藥材提取，提取3次，每次提取90 min，且所得提取液抑菌效果明顯。

中藥燙傷膏；醇提工藝；抑菌濃度

Abstract:?Objective To optimize the conditions of alcohol extraction of traditional Chinese medicine scald cream and study the antibacterial effect.Methods The L9(34) orthogonal experiment was used to optimize the alcohol extraction process, and the MIC was determined by 2-fold dilution.Results The optimum extraction conditions were as follows： extraction times＞ ethanol concentration＞ solid - liquid ratio＞ extraction time, and the extract had better inhibitory effect on bacteria.Conclusion The optimum process was extraction of 60% ethanol solution with 8 times the amount of herbs, extraction 3 times, 90 minutes extraction, and the antibacterial effect of the extract was obvious,it can be further studied.

Keywords:?traditional Chinese medicine scald cream; alcohol extraction process; MIC

燙傷膏處方主要包括黃連、黃柏、黃芩、沒(méi)藥等藥材。黃連、黃柏、黃芩均具有清熱燥濕、祛火解毒之功效，沒(méi)藥可活血祛瘀、消腫止痛[1]，配伍使用可殺菌消炎、去腐生肌、促進(jìn)肉芽組織及皮膚緣的快速生長(zhǎng)。本文是在之前所做單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，以提取所得小檗堿含量和揮發(fā)油含量之和為考察指標(biāo)，進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)以?xún)?yōu)化提取條件，小檗堿的含量通過(guò)紫外分光光度法測(cè)定，同時(shí)以最小抑菌濃度（MIC）為指標(biāo)進(jìn)行體外抑菌試驗(yàn)考察提取液抑菌活性[2-3]。

1 材料

1.1 儀器 粉碎機(jī)（北京中新），98-1-A型加熱套（天津泰思特），TU-1810紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（北京普忻），旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海遠(yuǎn)淮），蒸汽滅菌鍋（濟(jì)南來(lái)寶），電熱恒溫培養(yǎng)箱（金壇萬(wàn)華）。

1.2 藥材 黃連、黃柏、黃芩、沒(méi)藥均購(gòu)于中東城市萬(wàn)家醫(yī)藥超市，經(jīng)鑒定符合《中華人民共和國(guó)藥典》[1]中的各項(xiàng)規(guī)定；標(biāo)準(zhǔn)品鹽酸小檗堿（3UGA-HEKE）購(gòu)于國(guó)家藥物和生物制品控制研究所。

1.3 菌株 金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌及大腸桿菌均由我校微生物實(shí)驗(yàn)室提供。

2 方法

2.1 組方醇提工藝的優(yōu)化

2.1.1 浸膏的制備 黃連、黃柏、黃芩、沒(méi)藥適當(dāng)破碎到1 000 mL 燒瓶中，加入一定量和一定濃度的乙醇溶液浸泡回流提取后，用揮發(fā)油提取器收集沒(méi)藥揮發(fā)油。加熱回流結(jié)束后過(guò)濾，合并所有濾液。用濃鹽酸將pH調(diào)節(jié)為1～2，濃縮[4]。

2.1.2 鹽酸小檗堿含量測(cè)定 準(zhǔn)確稱(chēng)取10 mg標(biāo)準(zhǔn)品放入500 mL容量瓶，無(wú)水乙醇溶解后定容，震蕩均勻后濃度為 0.02 mg/mL。精確量取對(duì)照品溶液 1 、2 、3 、4 、5 、6 mL于10 mL容量瓶中，用乙醇稀釋至刻度搖勻，濃度分別為 2、4、6、8、10、12 μg/mL，于 350 nm處測(cè)定吸光度。結(jié)果作線(xiàn)性回歸，得鹽酸小檗堿濃度C（mg/mL）與吸光度A的關(guān)系A(chǔ)=0.050 4C－0.052 3，r2=0.999 1，用這個(gè)方程計(jì)算小檗堿濃度和含量。

2.1.3 正交試驗(yàn)因素水平的確定 以早期單因素檢驗(yàn)結(jié)果為前提，選擇乙醇濃度（%）、料液比、提取時(shí)間（min）和提取次數(shù)4個(gè)因素，各因素選擇3個(gè)水平進(jìn)行正交設(shè)計(jì)[5-9]，見(jiàn)表1。

表1 提取工藝因素水平表L9（34）

2.2 體外抑菌實(shí)驗(yàn)

2.2.1 細(xì)菌懸浮液的制備 將試驗(yàn)菌種接種于瓊脂培養(yǎng)基，37 ℃培養(yǎng)24 h，用生理鹽水稀釋細(xì)菌懸浮液0.5個(gè)麥?zhǔn)蠞岫葐挝?，冷藏備用[10-11]。

2.2.2 MIC的測(cè)定 采用試管2倍稀釋方法測(cè)定MIC[12]。將提取液濃縮至100 mg/mL作為原液，取12個(gè)無(wú)菌試管，加入2 mL液體培養(yǎng)基，移取2 mL原液到1號(hào)試管并混合均勻，再?gòu)?號(hào)試管中移取2 mL加入2號(hào)試管并混合均勻，同樣方法稀釋至10號(hào)試管，10號(hào)試管需棄去2 mL，如此各管中藥液濃度依次稀釋為原液 的 1/2、1/4、1/8、1/16、1/32、1/64、1/128、1/256、1/512、1/102 4。各試管中藥液濃度分別為50 、25 、12.5 、6.25、3.125 、1.562 5 、0.781 25 mg/mL。11 號(hào)和12號(hào)試管分別作為陽(yáng)性和陰性對(duì)照。將適量且等量的細(xì)菌懸浮液加到各試管中，37 ℃培養(yǎng)24 h后目視觀察并記錄MIC[13-14]。

3 結(jié)果

3.1 正交試驗(yàn)結(jié)果 根據(jù)表1進(jìn)行試驗(yàn)，紫外分光光度法測(cè)定小檗堿含量，計(jì)算揮發(fā)油含量，以2種含量總和作為最終考察指標(biāo)[15]，結(jié)果見(jiàn)表2和表3。

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果

表3 方差分析表

3.2 最低抑菌濃度（MIC）測(cè)定結(jié)果 藥液對(duì)以下幾種細(xì)菌的MIC結(jié)果 見(jiàn)表4。

表4 組方提取液對(duì)細(xì)菌的最低抑菌濃度（MIC） mg/mL

4 小結(jié)

根據(jù)正交試驗(yàn)和方差分析結(jié)果可以看出，4個(gè)因素對(duì)提取結(jié)果的影響順序?yàn)椋篋（提取次數(shù)）＞A（乙醇濃度）＞C（提取時(shí)間）＞B（料液比）。最佳的提取條件為A1B2C2D3，即選擇濃度為60%的乙醇溶液，藥材量與溶液量比例為1：8，回流90 min，提取3次時(shí)，所得到的浸膏中有效成分總含量最高。

由體外抑菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，該組方對(duì)由燒燙傷所產(chǎn)生的幾種主要細(xì)菌種類(lèi)具有良好的抑菌活性，其中對(duì)銅綠假單胞菌的抑制作用相對(duì)較強(qiáng)。但因?qū)嶒?yàn)條件和所需儀器設(shè)備過(guò)于簡(jiǎn)單，可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)過(guò)程中對(duì)細(xì)節(jié)的控制不到位，難以精確計(jì)算最低抑菌濃度，尚需深入研究，實(shí)驗(yàn)結(jié)果有待進(jìn)一步驗(yàn)證。

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Optimization of alcohol extraction technology of traditional Chinese medicine scald cream and study on its antibacterial activity

HOU Shuang1, SHANG Xuejun2, WANG Pei1*
（1.School of Medicine, Changchun University of Chinese Medicine, Changchun 130117, China;2.School of Foreign Languages, Jilin Business and Technology College, Changchun 130507, China）

R283.6

A

2095-6258(2017)05-0714-03

2016-11-29）

10.13463/j.cnki.cczyy.2017.05.009

吉林省科技廳科技支撐項(xiàng)目(20120446)。

侯 爽（1994 -），女，碩士研究生，主要從事中藥制藥工藝優(yōu)化方面的研究。

*通信作者：王 沛，男，教授，電話(huà)-13578701293，電子信箱-1103463098@qq.com