陳 穎,龍啟芳

(蘇州大學(xué)附屬第二醫(yī)院婦產(chǎn)科 215004)

ER、HNF-1β及COX-2在子宮內(nèi)膜異位相關(guān)性卵巢癌中的表達(dá)及臨床意義*

陳 穎,龍啟芳

(蘇州大學(xué)附屬第二醫(yī)院婦產(chǎn)科 215004)

目的探究雌激素受體(ER)、肝細(xì)胞核因子-1β(HNF-1β)以及環(huán)氧化酶-2(COX-2)在不同類型子宮內(nèi)膜異位相關(guān)性卵巢癌(EAOC)中的表達(dá)差異。方法選取2011年7月至2016年4月蘇州大學(xué)附屬第二醫(yī)院收治的EAOC患者44例，其中子宮內(nèi)膜樣癌17例，透明細(xì)胞癌21例，卵巢漿液性癌6例。采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)ER、HNF-1β及COX-2在不同類型EAOC中的表達(dá)差異，并采用Spearman秩相關(guān)分析探討三者表達(dá)水平的相關(guān)性。結(jié)果ER在子宮內(nèi)膜樣癌患者中的陽(yáng)性率為100.0%，顯著高于透明細(xì)胞癌患者的9.5%和卵巢漿液性癌患者的0%(χ2=4.305，P<0.01)，而HNF-1β在透明細(xì)胞癌和卵巢漿液性癌患者中的陽(yáng)性率分別為85.7%和100.0%，顯著高于子宮內(nèi)膜樣癌患者的11.8%(χ2=3.585，P<0.01)，COX-2在子宮內(nèi)膜樣癌、透明細(xì)胞癌和卵巢漿液性癌患者中的陽(yáng)性率分別76.5%、81.0%、83.3%，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.744，P=0.104)。ER和HNF-1β的表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.428，P<0.01)，與COX-2的表達(dá)水平呈正相關(guān)(r=0.204，P=0.013)。結(jié)論ER主要在子宮內(nèi)膜樣癌中表達(dá)，HNF-1β主要在透明細(xì)胞癌和卵巢漿液性癌中表達(dá)，ER的表達(dá)水平與HNF-1β及COX-2的表達(dá)水平具有一定的相關(guān)性。

卵巢腫瘤；雌激素受體；肝細(xì)胞核因子-1β；環(huán)氧化酶-2

子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis，EM)是以月經(jīng)異常、痛經(jīng)、不孕等為主要癥狀的婦科疾病，在臨床上較為常見。有研究顯示EM在婦女中的發(fā)病率為5%～20%[1]。雖然EM為良性疾病，但也具有一些與腫瘤類似的生物學(xué)特性，如侵襲性和對(duì)正常組織的損傷性，且已有研究表明，EM與卵巢癌發(fā)生、發(fā)展具有密切的關(guān)系[2-3]。腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中伴隨著多種生物學(xué)標(biāo)志的變化，近年的研究表明EM作為卵巢癌發(fā)生的誘因，通過影響并改變腫瘤微環(huán)境如雌激素受體(ER)的上調(diào)、P53的突變、肝細(xì)胞核因子-1β(HNF-1β)的激活以及環(huán)氧化酶-2(COX-2)的過表達(dá)等來促進(jìn)卵巢癌的發(fā)展。但是目前國(guó)內(nèi)外鮮有研究報(bào)道這些因子在不同類型EAOC的表達(dá)，本研究旨在分析ER、HNF-1β及COX-2在不同類型子宮內(nèi)膜異位相關(guān)性卵巢癌(EAOC)中的表達(dá)差異，以及三者的表達(dá)水平是否存在相關(guān)性，為EAOC的發(fā)病機(jī)制提供新的見解。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2011年7月至2016年4月蘇州大學(xué)附屬第二醫(yī)院婦產(chǎn)科收治的EAOC患者共44例，其中子宮內(nèi)膜樣癌17例，患者年齡(46.3±6.7)歲；卵巢透明細(xì)胞癌21例，患者年齡(44.7±7.2)歲；卵巢漿液性癌6例，患者年齡(45.2±6.1)歲，3組患者年齡、子宮內(nèi)膜病理分期等一般臨床資料的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究排除了有嚴(yán)重并發(fā)癥如心臟病、糖尿病、精神病等患者以及對(duì)本研究所用藥物或試劑過敏的患者，且本研究通過了蘇州大學(xué)附屬第二醫(yī)院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)，所有入選患者均簽署了知情同意書。

1.2免疫組織化學(xué)檢測(cè) 將手術(shù)切除的新鮮腫瘤組織以10%甲醛固定，石蠟包埋后進(jìn)行連續(xù)切片，再進(jìn)行脫蠟，微波爐熱抗原修復(fù)，經(jīng)漂洗、封閉、孵育后分別滴加1∶100比例稀釋的ER、HNF-1β、COX-2單克隆抗體(購(gòu)自上海翊圣生物科技有限公司)，4 ℃孵育過夜;加二抗(購(gòu)自上海翊圣生物科技有限公司)37 ℃孵育30 min;滴加辣根酶標(biāo)記工作液，37 ℃孵育30 min后DAB顯色，蘇木素復(fù)染、脫水、封片。免疫組織化學(xué)染色采用S-P法，具體操作步驟嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3結(jié)果判定 在顯微鏡下觀察免疫組織化學(xué)染色切片并采集圖像，采用Image-Pro Plus 6.0對(duì)ER、HNF-1β及COX-2的免疫組織化學(xué)切片進(jìn)行圖像分析。在高倍鏡(×400)下選擇5個(gè)視野，記錄陽(yáng)性染色細(xì)胞百分比，根據(jù)染色范圍和染色強(qiáng)度記分并判斷免疫組織化學(xué)結(jié)果。染色范圍：<5%計(jì)0分，5%～20%計(jì)1分，20%～50%計(jì)2分，>50%計(jì)3分；染色強(qiáng)度：無色計(jì)0分，淡黃色計(jì)1分，棕黃色計(jì)2分，棕褐色計(jì)3分；累計(jì)0～1分為陰性，2～3分為弱陽(yáng)性，4～5分為陽(yáng)性，6分為強(qiáng)陽(yáng)性。

2 結(jié) 果

2.1ER、HNF-1β及COX-2在不同類型EAOC中的表達(dá)差異 子宮內(nèi)膜樣癌患者中ER陽(yáng)性17例，陽(yáng)性率為100.0%，透明細(xì)胞癌患者中ER陽(yáng)性3例，陽(yáng)性率為9.5%，卵巢漿液性癌患者中無ER陽(yáng)性，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.305，P<0.01)；子宮內(nèi)膜樣癌患者中HNF-1β陽(yáng)性2例，陽(yáng)性率為11.8%，透明細(xì)胞癌患者中HNF-1β陽(yáng)性18例，陽(yáng)性率為85.7%，卵巢漿液性癌患者中HNF-1β陽(yáng)性6例，陽(yáng)性率為100.0%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=3.585，P<0.01)；COX-2在子宮內(nèi)膜樣癌患者、透明細(xì)胞癌患者和卵巢漿液性癌患者中的陽(yáng)性率分別76.5%(13例)、81.0%(17例)、83.3%(5例)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.744，P=0.104)，具體見圖1～3及表1。

A：子宮內(nèi)膜樣癌；B：透明細(xì)胞癌；C：卵巢漿液性癌。

圖1 ER在不同類型EAOC中的表達(dá)(×400)

A：子宮內(nèi)膜樣癌；B：透明細(xì)胞癌；C：卵巢漿液性癌

圖2 HNF-1β在不同類型EAOC中的表達(dá)(×400)

A:子宮內(nèi)膜樣癌；B:透明細(xì)胞癌;C:卵巢漿液性癌

圖3 COX-2在不同類型EAOC中的表達(dá)(×400)

表1 ER、HNF-1β及COX-2在不同類型EAOC中陽(yáng)性率比較

2.2ER、HNF-1β及COX-2表達(dá)水平的相關(guān)性分析 Spearman秩相關(guān)分析表明，ER和HNF-1β的表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.428，P<0.01)，ER與COX-2的表達(dá)水平呈正相關(guān)(r=0.204，P=0.013)。HNF-1β與COX-2的表達(dá)水平無明顯相關(guān)性。

3 討 論

EM最常異位于卵巢,為育齡期婦女的常見良性疾病,但具有類似惡性腫瘤的生物學(xué)特性，并且可以發(fā)生惡變，其惡變的種類包括子宮內(nèi)膜樣癌、透明細(xì)胞癌、卵巢漿液性癌、鱗狀腺癌、卵巢腺肉瘤等,其中以子宮內(nèi)膜樣癌和透明細(xì)胞癌最為常見。有研究表明EM通過影響并改變腫瘤微環(huán)境中的一系列生物標(biāo)志物如PTCH2、真核翻譯延長(zhǎng)因子1A2(eEF1A2)、ER、HNF-1β、p53、PTEN、COX-2等來誘導(dǎo)EAOC的發(fā)生[4-5]，并且近來Worley等[6]的研究顯示大量生物標(biāo)志物不僅與EAOC相關(guān)，并且在EAOC發(fā)生、發(fā)展的過程中不斷變化，對(duì)EAOC發(fā)生發(fā)展起到重要的影響，但是目前國(guó)內(nèi)外很少有研究分析不同類型EAOC中這些生物標(biāo)志物的表達(dá)差異，本研究旨在探究ER、HNF-1β、COX-2 3種經(jīng)典的生物標(biāo)志物在子宮內(nèi)膜樣癌、透明細(xì)胞癌及卵巢漿液性癌中的表達(dá)差異及表達(dá)水平的相關(guān)性，為EAOC的致癌機(jī)制提供新的依據(jù)。

ER激素受體是固醇類激素受體蛋白超家族成員之一,于1977年首次在子宮內(nèi)膜細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn)，其分布廣泛，可與激素發(fā)生特異性結(jié)合而形成激素-受體復(fù)合物，使激素發(fā)揮其生物學(xué)效應(yīng)。最近研究表明ER在啟動(dòng)惡性卵巢癌的發(fā)生以及促進(jìn)其發(fā)展的過程中具有重要的作用[7]。本研究結(jié)果顯示ER在子宮內(nèi)膜樣癌中呈高表達(dá)，陽(yáng)性率為100%，且表達(dá)水平較高，在透明細(xì)胞癌中表達(dá)較少，僅占9.5%，在卵巢漿液性癌中不表達(dá)，均為陰性，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.305，P<0.01)。Lai等[8]的研究也表明ER主要表達(dá)于子宮內(nèi)膜樣癌患者，與本研究具有一定的相似性。這一研究結(jié)果表明雌激素對(duì)子宮內(nèi)膜樣癌具有非常重要的影響，而對(duì)透明細(xì)胞癌患者及卵巢漿液性癌患者的影響較小，同時(shí)這一研究結(jié)果也暗示，臨床上常用的雌激素受體調(diào)節(jié)劑他莫昔芬(TAM)可能對(duì)子宮內(nèi)膜樣癌患者療效更好，而對(duì)于ER陰性的透明細(xì)胞癌患者及卵巢漿液性癌患者治療效果會(huì)相對(duì)較差。本研究對(duì)HNF-1β免疫染色的結(jié)果顯示HNF-1β在透明細(xì)胞癌患者和卵巢漿液性癌患者中的表達(dá)較高，陽(yáng)性率分別為為85.7%和100.0%，而在子宮內(nèi)膜樣癌中HNF-1β陽(yáng)性患者僅為11.7%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=3.585，P<0.01)。早前DeLair等[9]對(duì)155例透明細(xì)胞癌患者的腫瘤組織進(jìn)行了形態(tài)學(xué)及免疫組織化學(xué)的研究表明，HNF-1β為透明細(xì)胞癌患者特異的腫瘤標(biāo)志物，而Tsuchiya等[10]更是將HNF-1β作為透明細(xì)胞癌臨床診斷的特有腫瘤標(biāo)志物，而本研究發(fā)現(xiàn)HNF-1β不僅在透明細(xì)胞癌中呈高表達(dá)，在卵巢漿液性癌中的表達(dá)也較高，這為不同類型子宮內(nèi)膜異位相關(guān)性乳腺癌的診斷提供了新的生物學(xué)標(biāo)志物。COX-2在腫瘤發(fā)生早期起著重要作用，有研究表明COX-2在正常卵巢表面上皮細(xì)胞上幾乎不表達(dá),但是在子宮內(nèi)膜異位癥及卵巢囊腫癌變前的上皮細(xì)胞中呈高表達(dá)[11]。本研究結(jié)果顯示，COX-2在3種不同類型的EAOC的表達(dá)不存在顯著性差異，均具有較高的表達(dá)，陽(yáng)性率在80%左右。 Sivula等[12]研究發(fā)現(xiàn)浸潤(rùn)性乳腺癌組織中COX-2的陽(yáng)性表達(dá)率為66%，且COX-2陽(yáng)性患者較COX-2陰性患者預(yù)后更差，這提示COX-2可能是治療乳腺癌的有效靶點(diǎn)，維持COX-2的低表達(dá)或合理應(yīng)用特異性COX-2抑制劑將成為乳腺疾病預(yù)防的新途徑。此外本研究采用Spearman秩相關(guān)性分析探討了三者表達(dá)水平的相關(guān)性，結(jié)果表明，ER和HNF-1β的表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.428，P<0.01)，ER與COX-2的表達(dá)水平呈正相關(guān)(r=0.204，P=0.013)。HNF-1β與COX-2的表達(dá)水平無相關(guān)性(P>0.05)。

綜上所述，本研究結(jié)果表明ER主要表達(dá)于子宮內(nèi)膜樣癌患者中，HNF-1β主要表達(dá)于透明細(xì)胞癌和卵巢漿液性癌患者中，而COX-2在子宮內(nèi)膜樣癌,透明細(xì)胞癌及卵巢漿液性癌中均呈高表達(dá)，且ER和HNF-1β的表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)與COX-2的表達(dá)水平呈正相關(guān)。本研究結(jié)果為不同類型EAOC 的臨床診斷以及治療提供了新的合理依據(jù)，EAOC發(fā)病機(jī)制錯(cuò)綜復(fù)雜，近年來就有研究表明miRNA也是影響子宮內(nèi)膜異位癥及EAOC的重要因子[13]，因此筆者認(rèn)為應(yīng)全面分析EAOC相關(guān)的新的生物標(biāo)志物以及這些生物標(biāo)志物在致病過程中的變化，為EAOC的發(fā)病機(jī)制提供新的見解。

[1]Bulun SE.Endometriosis[J].N Engl J Med,2009,360(3):268-279.

[2]Aris A.Endometriosis-associated ovarian cancer:a ten-year cohort study of women living in the Estrie Region of Quebec,Canada[J].J Ovarian Res,2010,3(1):89-92.

[3]Mogensen JB,Kjer SK,Mellemkjr L,et al.Endometriosis and risks for ovarian,endometrial and breast cancers:a nationwide cohort study[J].Gynecol Oncol,2016,7(16):95-101.

[4]Borgfeldt C,Andolf E.Cancer risk after hospital discharge diagnosis of benign ovarian cysts and endometriosis[J].Acta Obstet Gynecol Scand,2004,83(83):395-400.

[5]MelinA,SparenP,PerssonI,etal.Endometriosisandtheriskofcancerwithspecialemphasisonovariancancer[J].HumReprod,2006,21(5):1237-1242.

eosinophilic esophagitis[J].Curr Opin Gastroenterol,2015,31(4):321-327.

[4]Wu D,Zhou J,Bi H,et al.CCL11 as a potential diagnostic marker for asthma?[J].J Asthma,2014,51(8):847-854.

[5]Berkman N,Ohnona S,Chung FK,et al.Eotaxin-3 but not eotaxin gene expression is upregulated in asthmatics 24 hours after allergen challenge[J].Am J Respir Cell Mol Biol,2001,24(6):682-687.

[6]Lee JH,Moore JH,Park SW,et al.Genetic interactions model among Eotaxin gene polymorphisms in asthma[J].J Hum Genet,2008,53(10):867-875.

[7]Komiya A,Nagase H,Yamada H,et al.Concerted expression of eotaxin-1,eotaxin-2,and eotaxin-3 in human bronchial epithelial cells[J].Cell Immunol,2003,225(2):91-100.

[8]高貴民，吳健民，崔天盆，等．eotaxin-3基因多態(tài)性與變應(yīng)性哮喘的相關(guān)性[J]．中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志，2006，23(2)：169-172．

[9]Chae SC,Lee YC,Park YR,et al.Analysis of the polymorphisms in eotaxin gene family and their association with asthma,IgE,and eosinophil[J].Biochem Biophys Res Commun,2004,320(1):131-137.

ExpressionofER,HNF-1βandCOX-2inendometriosis-associatedovariancanceranditsclinicalsignificance*

ChenYing,LongQifang

(DepartmentofGynecologyandObstetrics,SecondAffiliatedHospital,SuzhouUniversity,Suzhou,Jiangsu215004,China)

ObjectiveTo investigate the expression difference of estrogen receptor(ER),hepatocyte nuclear factor 1β(HNF-1β) and epoxy-2(COX-2) in different types of endometriosis-associated ovarian cancer (EAOC).MethodsForty-four patients with EAOC treated in our hospital from July 2011 to April 2016 were selected,including 17 cases of endometrioid carcinoma,21 cases of clear cell carcinoma and 6 cases of ovarian serous carcinoma.The expression of ER,HNF-1β and COX-2 in different types of EAOC were detected by immunohistochemistry.The correlation among expression levels of ER,HNF-1β and COX-2 was investigated by adopting Spearman rank correlation analysis.ResultsThe positive rate of ER in endometrioid carcinoma was 100.0%,which was significantly higher than 9.5% in the patients with clear cell carcinoma and 0% in the patients with ovarian serous carcinoma(χ2=4.305,P<0.01),and the positive rate of HNF-1β in the patients with clear cell carcinoma and ovarian serous carcinoma were 85.7% and 100.0% respectively,which was significantly higher than 11.8% in the patients with endometrioid carcinoma(χ2=3.585，P<0.01),the positive rates of COX-2 in the patients with endometrioid carcinoma,clear cell carcinoma and ovarian serous carcinoma were 76.5%,81.0% and 83.3%,respectively,and the difference was not statistically significant (χ2= 0.744,P=0.104).The correlation analysis showed that ER was negatively correlated with HNF-1β expression level(r=-0.428,P<0.01) and positively correlated with COX-2 expression level (r=0.204,P=0.013).ConclusionER is mainly expressed in endometrioid carcinoma.HNF-1β is mainly expressed in clear cell carcinoma and ovarian serous carcinoma.The expression level of ER had a certain correlation to the expression of HNF-1β and COX-2,which may be closely related to EAOC progression.

ovarian neoplasms;estrogen receptor;hepatocyte nuclear factor-1β;cyclooxygenase

10.3969/j.issn.1671-8348.2017.27.018

R737.31

A

1671-8348(2017)27-3801-03

2016-11-27

2017-04-25)

江蘇省科技計(jì)劃項(xiàng)目(BK2012599)。

陳穎(1983-)，碩士，主治醫(yī)師，主要從事婦科腫瘤方面的研究。