屈琳，劉鳳霞

(中南大學(xué)湘雅三醫(yī)院a.檢驗(yàn)科，b.輸血科，長(zhǎng)沙 410013)

·臨床實(shí)驗(yàn)研究·

3 463例O型血孕婦產(chǎn)前IgG抗A(B)抗體效價(jià)分析*

屈琳a，劉鳳霞b

(中南大學(xué)湘雅三醫(yī)院a.檢驗(yàn)科，b.輸血科，長(zhǎng)沙 410013)

目的探討微柱凝膠法檢測(cè)IgG抗A(B)抗體效價(jià)的臨界值，分析抗體效價(jià)水平變化和孕婦年齡與新生兒溶血病發(fā)生率的關(guān)系。方法根據(jù)圍產(chǎn)期3 463例孕婦及其丈夫血型，分別用微柱凝膠法和試管法檢測(cè)IgG抗A、抗B抗體效價(jià)。根據(jù)不同妊娠次數(shù)(1次、2次、≥3次)，將1 620例O型孕婦分3組，從22周開(kāi)始每隔 4 周檢測(cè)血清中IgG抗 A(B)的效價(jià)，分別用微柱凝膠法檢測(cè)IgG抗A、抗B抗體效價(jià)，檢測(cè)新生兒溶血病相關(guān)指標(biāo)。結(jié)果微柱凝膠法抗體效價(jià)256作為參考值；3 463例圍產(chǎn)期孕婦檢測(cè)IgG抗A(B)，IgG抗A檢測(cè)共2 257人次，其幾何平均效價(jià)為169，IgG抗B檢測(cè)共1 711人次，其幾何平均效價(jià)為143。連續(xù)監(jiān)測(cè)1 620例不同孕次數(shù)O型血孕婦，首次妊娠896例中IgG抗A(B)抗體效價(jià)≥256的共260例(29.02%)，2次妊娠248例IgG抗A(B)抗體效價(jià)≥256的共107例(43.15%)，≥3次妊娠共476例IgG抗A(B)抗體效價(jià)≥256的共220例(46.70%)；抗體效價(jià)滴度分別升高1、2、3個(gè)及以上孕婦的平均年齡分別為26.4、27.8、29.9歲，新生兒溶血病的發(fā)生率分別為21.66%、40.94%、84.90%。結(jié)論檢測(cè)O型孕婦產(chǎn)前血清中IgG抗體時(shí)，微柱凝膠法的敏感性高于傳統(tǒng)試管法，微柱凝膠法檢測(cè)抗體效價(jià)的參考值高于試管法；多次妊娠者IgG抗A(B)抗體效價(jià)陽(yáng)性率高于首次妊娠者；且當(dāng)抗體效價(jià)升高2個(gè)及以上滴度時(shí)，年齡越高，HDN發(fā)病率越高。

IgG抗A(B)抗體；抗體效價(jià)；連續(xù)監(jiān)測(cè)；新生兒溶血病

Abstract:ObjectiveTo investigate the threshold of IgG anti-A (B)antibody with microcolumn gel method and analyze the correlations between the incidence of neonatal hemolytic disease and IgG antibody titer in pregnant women as well as their age for the guidance of prenatal early prevention.MethodsBased on blood type of 3 463 perinatal pregnant women and their husbands, the titers of prenatal antibody IgG against A and B were determined by both microcolumn gel and test tube method. The 1 620 pregnant women with blood type O were divided into three groups according to different pregnancy times (1, 2, 3 or more than 3 times). The titers of serum IgG anti A and B were determined every 4 weeks from the 22th week using micro column gel method. The newborn hemolytic disease-related indicators were detected simultaneously.ResultsIn this laboratory, 256 of the antibody titer by microcolumn gel method was used as the indoor reference value. The geometric average titer of IgG anti-A was 169 in 2 257 person-times of perinatal women, and the titer of IgG anti-B was 143 in 1 711 person-times of perinatal women. The 1 620 women with blood type O were continuous monitored at different pregnant times. In 896 women with first pregnancy, 260 cases (29.02%)showed 256 or more than 256 of IgG anti A (B)antibody titer, 107 cases (43.15%)in 248 women with the second pregnancy showed 256 or more of IgG anti A (B)antibody titer, and 220 cases (46.70%)in 476 women with the third pregnancy or more showed 256 or more of IgG anti A (B)antibody titer. The average ages of the pregnant women with increased 1, 2 and 3 antibody titers were 26.4, 27.8 and 29.9 respectively, and the incidences of hemolytic disease of newborn (HDN)were 21.66%, 40.94% and 84.90% respectively.ConclusionIn detecting IgG antibody in prenatal serum of pregnant women with O type, the sensitivity of microcolumn gel method for IgG antibody should be obviously higher than that of the traditional test tube method. The reference value of microcolumn gel method or IgG antibody titer was obviously higher than that of test tube method. The positive rate of IgG anti-A antibody in multiple pregnancies was significantly higher than that in the first pregnancy. The incidence of HDN may increase with the age of pregnant women when the titer of IgG antibody increased by 2 or more titers.

Keywords: IgG-A (B)antibody; antibody titer; dynamic monitoring；hemolytic disease of newborn

新生兒溶血病(hemolytic disease of the newborn，HDN)是指母胎血型不合所致的胎兒或新生兒免疫性溶血性疾病。我國(guó)以ABO血型不合者占多數(shù)[1]。鑒于微柱凝膠法的普及，傳統(tǒng)采用IgG 抗 A(B)效價(jià)>64 作為臨界值的標(biāo)準(zhǔn)是否適用于微柱凝膠法值得商榷。本研究通過(guò)用微柱凝膠法連續(xù)檢測(cè)我院門診和住院孕婦及其出生48 h內(nèi)新生兒血液中的IgG抗A(B)抗體，分析孕婦血清IgG血型抗體與HDN的關(guān)系。

1 對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象 納入標(biāo)準(zhǔn)：孕周為38至40周的血型為O型的孕婦，其丈夫血型為A、B或AB型。排除標(biāo)準(zhǔn)：排除患肝病、腎病、腫瘤、自身免疫病、血液系統(tǒng)疾病及有輸血史者，排除不規(guī)則抗體檢測(cè)陽(yáng)性者。選擇2010年5月至2013年5月中南大學(xué)湘雅三醫(yī)院符合納入、排除標(biāo)準(zhǔn)的門診及住院孕婦及其新生兒各3 463例，孕婦年齡22～38歲，中位年齡32歲，其丈夫血型為A型1 752例，B型1 206例，AB型505例，其中1 620例孕婦自22周始每隔4周檢測(cè)1次血清中 IgG抗A(B)效價(jià)。

1.2標(biāo)本采集 采集孕婦血液2 mL(EDTA-K2抗凝)、4 mL(分離血清)，采集嬰兒血液1 mL(EDTA-K2抗凝)、3 mL(分離血清)(如新生兒抽血困難，應(yīng)盡量保證抗凝血標(biāo)本的量)。

1.3試劑 0.2 mol/L巰基乙醇(2-Me)應(yīng)用液、抗人球蛋白微柱卡均購(gòu)自長(zhǎng)春博迅公司。

1.4方法 孕婦血清標(biāo)本0.4 mL加入0.4 mL 2-Me應(yīng)用液并混合，37 ℃溫育1 h[2]，處理后的血清用生理鹽水倍比稀釋，試管法以凝集1+為終點(diǎn)，微柱凝膠法以紅細(xì)胞完全或大部分停留在凝膠柱的上部或上半部判讀為陽(yáng)性。陽(yáng)性者以最高稀釋度作為效價(jià)。每份標(biāo)本均同時(shí)用試管法和微柱凝膠法檢測(cè)。對(duì)出生48 h內(nèi)新生兒血液標(biāo)本進(jìn)行3項(xiàng)HDN試驗(yàn)，即直抗試驗(yàn)(抗凝血)、游離試驗(yàn)(血清)和釋放試驗(yàn)(抗凝血)，同時(shí)檢測(cè)新生兒膽紅素、血紅蛋白。診斷HDN參照文獻(xiàn)[3]。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 用 SPSS 19.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行。平均效價(jià)以加權(quán)法計(jì)算，等級(jí)資料的比較用秩和檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料的比較用卡方檢驗(yàn)；P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1微柱凝膠法抗體效價(jià)的臨界值 微柱凝膠法與試管法檢測(cè)3 463例孕婦IgG抗A(B)抗體效價(jià)結(jié)果見(jiàn)表1。

微柱凝膠法IgG抗A效價(jià)為64、128、512、1 024和2 048時(shí)，與試管法效價(jià)臨界值64比較，兩法IgG抗A陽(yáng)性檢出率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2分別為682.47、173.641、429.494、699.84、825.037，P均<0.01)；微柱凝膠法IgG抗A效價(jià)為256時(shí)，兩法抗A陽(yáng)性檢出率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=2.294，P=0.138)。

微柱凝膠法IgG抗B效價(jià)為64、128、512、1 024和2 048時(shí)，與試管法效價(jià)臨界值 64 比較，兩法IgG抗B陽(yáng)性檢出率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2分別為282.742、26.077、343.450、526.149、610.738，P均<0.01)；IgG抗B效價(jià)微柱凝膠法為256時(shí)，兩法IgG抗B陽(yáng)性檢出率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=2.447，P=0.127)。

綜合對(duì)比結(jié)果，微柱凝膠法血清抗體效價(jià)≥256判為陽(yáng)性。

表1 試管法與微柱凝膠法檢測(cè)IgG抗A(B)抗體效價(jià)結(jié)果

注：-，無(wú)數(shù)據(jù)。

2.2孕婦血清IgG抗A(B)效價(jià)分布 IgG抗A檢測(cè)共2 257人次，其幾何平均效價(jià)為169；IgG抗B檢測(cè)共1 711人次，其幾何平均效價(jià)為143；IgG抗A效價(jià)水平明顯高于IgG抗B效價(jià)水平。

2.3不同孕次孕婦IgG抗A(B)效價(jià) 連續(xù)監(jiān)測(cè)1 620例不同孕次O血型孕婦，896例首次妊娠者中IgG抗A(B)抗體效價(jià)≥256者260例(29.02%)，248例2次妊娠者中IgG抗A(B)抗體效價(jià)≥256者107例(43.15%)，476例≥3次妊娠者中IgG抗A(B)抗體效價(jià)≥256者220例(46.70%)，多次妊娠者IgG抗A(B)抗體效價(jià)陽(yáng)性率高于首次妊娠者(P<0.05)。孕22、26、30、34、38周IgG抗A(B)效價(jià)變化見(jiàn)圖1。

圖1 不同孕次O血型孕婦IgG抗A(B)抗體效價(jià)與孕周的關(guān)系

2.4孕婦抗體效價(jià)變化與HDN的關(guān)系 1 620例孕婦，抗體效價(jià)升高2個(gè)及以上滴度，年齡越高，HDN發(fā)病率越高，見(jiàn)表2。

表2 抗體效價(jià)變化與HDN發(fā)病率的關(guān)系

3 討論

微柱凝膠技術(shù)具有高敏感性、高特異性、操作簡(jiǎn)單及重復(fù)性良好等優(yōu)點(diǎn)[4]。目前很多醫(yī)院用微柱凝膠檢測(cè)卡法取代傳統(tǒng)的試管法測(cè)定抗體效價(jià)。若以效價(jià) 64作為陽(yáng)性臨界值，微柱凝膠檢測(cè)卡法陽(yáng)性率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于試管抗球蛋白法[5]。周金安等[6]研究也證實(shí)，微柱凝膠卡檢測(cè)IgG 抗 A(B)效價(jià)比試管抗球蛋白法高。DiaMed微柱凝膠法檢測(cè)IgG抗A(B)的決定值為≥216[7]，與本文的≥256接近。

孕婦血清抗A 效價(jià)異常率高于抗B效價(jià)異常率，除與本地區(qū)人口血型所占比例有關(guān)外，還可能與紅細(xì)胞上 A 抗原性較強(qiáng)相關(guān)[8]。連續(xù)監(jiān)測(cè)1 620例不同孕次O血型孕婦，多次妊娠者抗A(B)抗體陽(yáng)性率高于首次妊娠者，與王林奎[9]、李東暉等[10]報(bào)道一致。首次懷孕孕婦IgG抗體效價(jià)陽(yáng)性的原因可能是在懷孕前就已從其他途徑接觸過(guò)A、B血型物質(zhì)，如花粉、植物或注射某些免疫疫苗等，因此首次懷孕仍然有可能娩出 HDN 嬰兒[11]。由于每一次妊

娠結(jié)束，胎盤(pán)絨毛膜受損，胎兒紅細(xì)胞進(jìn)入母體，刺激母體產(chǎn)生抗體，妊娠次數(shù)越多，抗體的堆積也越多，從而產(chǎn)生高價(jià)的抗體。隨妊娠次數(shù)的增加，發(fā)病率會(huì)相應(yīng)增高[12]。隨著年齡的增加，日常生活中母體接觸血型物質(zhì)的幾率也增加，機(jī)體處于一個(gè)低免疫應(yīng)答狀態(tài)，當(dāng)妊娠過(guò)程中接觸到血型抗原時(shí)，產(chǎn)生的IgG抗體效價(jià)就呈上升狀態(tài)。

我們觀察發(fā)現(xiàn)復(fù)檢效價(jià)持續(xù)增高者較效價(jià)水平維持不變或降低者HDN發(fā)生率高，1 620例產(chǎn)婦中，孕期IgG抗體效價(jià)與 ABO-HDN 發(fā)病率成正相關(guān)。這是因?yàn)镮gG抗體效價(jià)過(guò)高，通過(guò)胎盤(pán)的幾率增加所致。連續(xù)監(jiān)測(cè)，及早發(fā)現(xiàn)，及時(shí)干預(yù)治療，可減少由于母嬰血型不合引起的溶血病。

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Analysisofanti-A(B)IgGantibodytiterin3463pregnantwomenwithbloodtypeO

QULina,LIUFeng-xiab

(a.DepartmentofLaboratoryMedicine,b.DepartmentofBloodTransfusion,TheThirdXiangyaHospitalofCentralSouthUniversity,Changsha410013,Hunan,China)

R446

A

2017-02-11)

(本文編輯王海燕)

湖南省自然科學(xué)基金(14JJ7015)。

屈琳，1979年生，男，主管技師，碩士，主要從事醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)工作。

劉鳳霞， E-mail:632089417@qq.com。

10.13602/j.cnki.jcls.2017.09.08