張 晴,高長俊

(河北省唐山市婦幼保健院 小兒血液科,河北 唐山,063000)

原發(fā)免疫性血小板減少癥患兒中T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞及B細(xì)胞在外周血中的表達(dá)情況分析

張 晴,高長俊

(河北省唐山市婦幼保健院 小兒血液科,河北 唐山,063000)

目的研究原發(fā)免疫性血小板減少癥患兒中T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞及B細(xì)胞在外周血中的表達(dá)情況。方法選擇ITP患兒241例作為研究組，另選擇252例健康兒童作為對照組，檢測并比較2組患兒T淋巴細(xì)胞亞群(CD3、CD4、CD8細(xì)胞)、B細(xì)胞和NK細(xì)胞水平。結(jié)果研究組外周靜脈血中CD3水平、CD4水平和CD4/CD8顯著低于對照組,CD8水平顯著高于對照組(P<0.05);研究組血清中B細(xì)胞水平低于對照組。研究組的PAIgG、PAIgA、PAIgM水平顯著高于對照組(P<0.05),IFN-γ水平高于對照組,IL-4水平低于對照組;研究組CD(16+56)水平高于對照組。結(jié)論ITP患兒機(jī)體存在T淋巴細(xì)胞水平失衡,NK細(xì)胞以及B細(xì)胞表達(dá)未見異常發(fā)生。

原發(fā)免疫性血小板減少癥;T淋巴細(xì)胞亞群;NK細(xì)胞;B細(xì)胞;表達(dá)

ABSTRACT:ObjectiveTo explore expression of T lymphocyte subsets,NK cells and B cells in peripheral blood of children with primary immunologic thrombocytopenia(ITP).MethodsA total of 241 ITP children admitted to our hospital were selected as study group,and 252 healthy children were selected as control group.The levels of T lymphocyte subsets(CD3,CD4,CD8cells) and B cells and NK cells in the two groups were detected and compared.ResultsThe levels of CD3,CD4and CD4/CD8in the peripheral blood of the study group were significantly lower,CD8level was significantly higher,and B cells level was significantly lower than that of the control group (P<0.05).The levels of PAIgG,PAIgA and PAIgM in the study group were significantly higher,the level of IFN-γ was higher,IL-4 level was lower,the level of CD(16+56) was higher than that in the control group (P<0.05).ConclusionThere is an imbalance of T lymphocyte level in the children with ITP,and there was no abnormality in the expression of NK cells and B cells.

KEYWORDS:primary immunologic thrombocytopenia;T lymphocyte subsets;NK cells;B cells;expression

免疫性血小板減少癥(ITP)是兒童時(shí)期最常見出血性免疫性疾病之一[1],主要癥狀有凝血功能障礙、顱內(nèi)出血、皮膚黏膜出血以及血小板減少等，而顱內(nèi)出血是ITP致死的高危因素之一。相關(guān)研究[2-3]表明,ITP發(fā)病機(jī)制為患者體內(nèi)產(chǎn)生抗血小板抗體，導(dǎo)致網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)破壞血小板，血小板數(shù)量減少。臨床治療方法主要為藥物治療，即采取激素或者丙種球蛋白，抑制自身抗體產(chǎn)生，封閉網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)受體，從而減少血小板的被破壞。臨床研究[4-5]顯示，部分患兒治療無效，病程遷徙，預(yù)后不良，最終進(jìn)展為慢性/難治性ITP。最新研究[6]發(fā)現(xiàn)，免疫性血小板減少癥的主要發(fā)病機(jī)制是機(jī)體的細(xì)胞免疫和體液免疫異常導(dǎo)致的血小板破壞增加和生成不足，而骨髓穿刺具有創(chuàng)傷性，是否需要常規(guī)骨穿仍存在爭議，而通過檢測血小板參數(shù)對ITP的早期診斷，治療過程中療效判斷及預(yù)后極其重要。本研究對本院小兒血液科病房收治的ITP患兒的T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞及B細(xì)胞在外周血中的表達(dá)情況進(jìn)行研究，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2013年6月—2015年6月本院小兒血液科病房收治的ITP患兒241例作為研究組，其中男169例，女72例，年齡3～12歲，平均(7.6±1.3)歲，病程7～25 d,平均病程為(8.72±1.26) d。納入標(biāo)準(zhǔn):患兒入院后均進(jìn)行血常規(guī)檢查、抗血小板檢查以及化驗(yàn)T淋巴細(xì)胞亞群后確診為原發(fā)ITP,排除繼發(fā)性血小板減少癥、淋巴細(xì)胞增殖、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、假性血小板減少癥和各種自身免疫性病導(dǎo)致的血小板減少癥狀[7]。另選擇本院同期來體檢的252例健康兒童作為對照組，其中男165例，女87例，年齡3～12歲，平均(8.2±1.4)歲。2組的性別、年齡等一般資料比較無顯著差異(P>0.05),具有可比性。2組受檢者在進(jìn)行檢查前4周均無進(jìn)行輸血以及使用糖皮激素或者相關(guān)疫苗接種。所有患者為自愿參加，簽署知情同意書。

1.2 方法

本研究所選儀器和試劑為美國生產(chǎn)的生化分析儀(規(guī)格:貝克曼DXC800),流式細(xì)胞儀(規(guī)格:貝克曼Gallios)，血液分析儀(規(guī)格:貝克曼LH750)。

2組受檢者晨起空腹?fàn)顟B(tài)下抽取外周靜脈血2 mL,血清進(jìn)行乙二胺四乙酸抗凝處理后，取100 μL新鮮乙二胺四乙酸抗凝血標(biāo)本加入樣品測定管內(nèi)，同時(shí)加入20 μL四色免洗淋巴細(xì)胞亞群分析試劑，進(jìn)行充分混合，后加入2 mL血溶素，再次進(jìn)行充分混合操作，于10 min后采用流式細(xì)胞儀(規(guī)格:貝克曼Gallios)檢驗(yàn)T淋巴細(xì)胞亞群(即CD3、CD4、CD8細(xì)胞)、B細(xì)胞和NK細(xì)胞水平。對2組受檢者的T淋巴細(xì)胞亞群和B細(xì)胞水平進(jìn)行記錄、計(jì)算并比較分析，同時(shí)對2組受檢者血小板相關(guān)抗體、血清細(xì)胞和NK細(xì)胞水平進(jìn)行記錄、計(jì)算并比較分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)處理軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料采用方差分析，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 2組受檢者T淋巴細(xì)胞亞群和B細(xì)胞水平比較

研究組外周靜脈血中CD3水平、CD4水平和CD4/CD8顯著低于對照組,CD8水平顯著高于對照組(P<0.05);研究組血清中B細(xì)胞水平低于對照組，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

2.2 2組受檢者血小板相關(guān)抗體、血清細(xì)胞和NK細(xì)胞水平比較

研究組的血小板相關(guān)免疫球蛋白G(PAIgG)、血小板相關(guān)免疫球蛋白A(PAIgA)、血小板相關(guān)免疫球蛋白M(PAIgM)水平顯著高于對照組(P<0.05);研究組γ-干擾素(IFN-γ)水平高于對照組，白介素-4(IL-4)水平低于對照組;研究組CD(16+56)水平高于對照組。見表2。

表1 2組受檢者T淋巴細(xì)胞亞群和B細(xì)胞水平比較

與對照組比較,*P<0.05。

表2 2組受檢者NK細(xì)胞水平比較

與對照組比較,*P<0.05。

3 討 論

ITP作為兒童時(shí)期易發(fā)的自身免疫性出血性疾病，臨床表現(xiàn)以血小板減少、凝血功能障礙和皮膚黏膜出血為主要特點(diǎn)，顱內(nèi)出血是本病死亡的主要原因。目前對本病的認(rèn)識(shí)多集中在血小板相關(guān)抗體致血小板被破壞，但臨床上相當(dāng)一部分患兒血小板相關(guān)抗體呈陰性，且應(yīng)用常規(guī)的糖皮質(zhì)激素、丙種球蛋白等治療后仍有復(fù)發(fā)[8-11]。

T淋巴細(xì)胞在抗原刺激活化作用，產(chǎn)生淋巴因子，調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能，而絕大多數(shù)血小板，其自身抗體的產(chǎn)生是由輔助性T淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞以及B淋巴細(xì)胞生成，而ITP患兒的免疫功能紊亂則是引起ITP患兒發(fā)病的重要原因[12]。使T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞以及B淋巴細(xì)胞水平恢復(fù)正常，是保證機(jī)體進(jìn)行正常免疫應(yīng)答的核心[13]。NK細(xì)胞作為人體重要的免疫細(xì)胞，不僅起到抗病毒感染的作用，還與免疫調(diào)節(jié)息息相關(guān)，同時(shí)參與機(jī)體內(nèi)參與自身免疫性疾病。本研究通過對初診ITP患兒的T細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞和血小板相關(guān)參數(shù)的對比，以及對部分患兒生活質(zhì)量的調(diào)查，較為深入的探討ITP的免疫學(xué)發(fā)病機(jī)制，以期對臨床治療提供一定指導(dǎo)，從而更好地讓ITP患兒參與社會(huì)生活[14-16]。本研究結(jié)果顯示，ITP患兒與正常體檢兒童相比,CD3、CD4T淋巴細(xì)胞、CD4/CD8比值均明顯低于正常體檢兒童,CD8T淋巴細(xì)胞明顯高于正常體檢兒童,ITP患兒存在明顯的免疫功能紊亂，這可能是由于T淋巴細(xì)胞比例失常，患兒血清內(nèi)輔助性T淋巴細(xì)胞水平降低，使得抑制性T淋巴細(xì)胞含量上升，從而抑制B淋巴細(xì)胞功能發(fā)揮充分，導(dǎo)致B細(xì)胞功能性亢進(jìn)。CD4T細(xì)胞水平降低，導(dǎo)致B細(xì)胞水平上升，生成大量漿細(xì)胞，生成的抗血小板抗體可以縮短血小板的存活時(shí)間，使骨髓巨核細(xì)胞引起成熟性障礙，導(dǎo)致血小板功能障礙。通過研究發(fā)現(xiàn)，ITP患兒的NK細(xì)胞和B細(xì)胞，雖與正常體檢兒童相比，有輕微差異，但其NK細(xì)胞和B細(xì)胞表達(dá)未見異常，

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ExpressionofTlymphocytesubsets,NKcellsandBcellsinperipheralbloodofchildrenwithprimaryimmunologicthrombocytopenia

ZHANGQing,GAOChangjun

(DepartmentofPediatricHematology,TangshanMaternalandChildHealthCareHospitalofHebeiProvince,Tangshan,Hebei,063000)

R 558

A

1672-2353(2017)17-045-03

10.7619/jcmp.201717013

2017-04-11

河北省衛(wèi)生廳(Z2011236)