杜旭召，楊豪，鄧素玲，史棟梁，孟慶良

（河南省中醫(yī)院 骨傷科，河南 鄭州 450002）

髓鋅指基因1對骨肉瘤細胞增殖和凋亡的影響

杜旭召，楊豪，鄧素玲，史棟梁，孟慶良

（河南省中醫(yī)院 骨傷科，河南 鄭州 450002）

目的研究葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（G6PD）和髓鋅指基因1（MZF-1）在骨肉瘤中的作用及其可能的作用機制。方法實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（qRT-PCR）檢測MZF-1和G6PD在骨肉瘤細胞中的表達；MTT法檢測過表達MZF-1對骨肉瘤細胞增殖的影響；流式細胞儀檢測過表達MZF-1對骨肉瘤細胞凋亡及細胞周期的影響；熒光素酶報告基因分析法驗證MZF-1與G6PD啟動子區(qū)的相互作用關(guān)系。結(jié)果在骨肉瘤細胞中，MZF-1的表達下降，G6PD表達上升。過表達MZF-1可抑制骨肉瘤細胞增殖，促進細胞凋亡，并且將細胞周期阻滯于G0/G1期。熒光素酶報告基因分析結(jié)果表明，MZF-1可靶向結(jié)合到G6PD的啟動子區(qū)域并負向調(diào)控G6PD的表達。結(jié)論MZF-1可通過負向調(diào)節(jié)G6PD的表達，在骨肉瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮抑癌的作用，為骨肉瘤治療提供新的思路。

髓鋅指基因1；葡萄糖-6-磷酸脫氫酶；骨肉瘤；增殖；凋亡；細胞周期

Abstract:ObjectiveTo investigate the effect of myeloid zinc finger gene 1 (MZF-1)and glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PD)on progression of osteosarcoma and the underlying mechanisms.MethodsThe expression levels ofMZF-1and G6PD were determined by real-time PCR.MTT was utilized to examine the cellular proliferation.Apoptosis rate and cell cycle were measured by flow cytometry.The molecular interaction betweenMZF-1and G6PD was manifested by dual-luciferase reporter assay.ResultsMZF-1was down-regulated and G6PD was up-regulated in osteosarcoma cells.Over-expression ofMZF-1inhibited osteosarcoma cell proliferation,increased cellular apoptosis,and induced cell cycle arrest on G0/G1phase.Dual-luciferase reporter assay showed thatMZF-1bonded to the promoter region of G6PD and negatively regulated the transcription of G6PD.ConclusionsMZF-1exerts as a tumor suppressor by negatively regulating the expression of G6PD during the progression of osteosarcoma.

Keywords:myeloid zinc fingergene 1;glucose-6-phosphate dehydrogenase;osteosarcoma;cell proliferation;apoptosis;cell cycle

骨肉瘤是最常見的原發(fā)性惡性骨腫瘤之一，起源于間葉組織，常發(fā)生于兒童及青少年[1-2]，以高惡性、早轉(zhuǎn)移、預(yù)后差及生存率低等為特點[3-4]。骨肉瘤最主要的治療方式為外科切除結(jié)合放化療，但其預(yù)后很差，轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)的患者長期生存率＜20%[5-6]。因此，研究新型的、高效低毒的抗人骨肉瘤藥成為骨肉瘤治療研究的重點。

髓鋅指基因 1（myeloid zinc finger gene 1，MZF-1）屬于鋅指蛋白Kruppel轉(zhuǎn)錄因子家族成員之一，含有13個C2H2鋅指結(jié)構(gòu)，該鋅指結(jié)構(gòu)可與相應(yīng)靶基因啟動子區(qū)域相結(jié)合，從而調(diào)節(jié)基因的表達[7]。研究報道，MZF-1是一個雙功能的轉(zhuǎn)錄因子，其可以通過激活或者抑制靶基因的表達來調(diào)控細胞的分化、遷移和增殖。近年來，MZF-1在多種腫瘤中的作用已被闡明，如MZF-1通過與p55PIK啟動子上的“TGGGGA”元件結(jié)合，轉(zhuǎn)錄激活p55PIK，促進結(jié)直腸癌細胞的增殖[8]；抑制MZF-1表達可抑制肝癌細胞的生長[9]；而也有研究報道，MZF-1通過促使鐵轉(zhuǎn)運蛋白誘導(dǎo)的鐵外排抑制前列腺腫瘤的生長[10]。然而，MZF-1在骨肉瘤中的作用及其作用機制尚未見報道。

葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（glucose-6-phosphate dehydrogenase，G6PD）是1個典型的管家基因，是磷酸戊糖途徑的關(guān)鍵酶，廣泛存在于生物體的組織和細胞中。近年來研究發(fā)現(xiàn)，G6PD與癌癥的發(fā)生有密切的關(guān)系，如黑色素瘤[11-12]、膀胱癌[13]、食管鱗癌等[14]，廣泛參與細胞增殖、凋亡、侵襲及遷移等過程，但其在骨肉瘤發(fā)生發(fā)展中的作用尚不清楚。盧玲琳等利用生物信息學(xué)法方法研究發(fā)現(xiàn)，人G6PD基因啟動子區(qū)域存在MZF-1的結(jié)合位點[15]，因此，本文旨在研究MZF-1是否可以通過調(diào)節(jié)G6PD的表達進而抑制骨肉瘤的發(fā)生、發(fā)展及其具體作用機制的探討。

1 材料與方法

1.1 主要材料及試劑

正常人成骨細胞系hFOB1.19和骨肉瘤細胞系MF-63、Saos2、HOS（購自美國 ATCC 公司），dulbecco's modified eagle media:nutrient mixture F-12（DMEM-F12）、洛斯維公園紀念研究所1640（roswell park memorial institute 1640，RPMI 1640）培養(yǎng)液、胎牛血清、青霉素及鏈霉素等（購自美國Sigma公司），Trizol、放射免疫沉淀（Radio Immunoprecipitation assay，RIPA）裂解液（購自美國 Invitrogen公司），Prime ScriptTMRT-PCR Kit及 SYBR Premix EX Taq（購自日本TaKaRa株式會社），Annexin V-FITC/PI細胞凋亡檢測試劑盒（購自北京索萊寶科技有限公司），細胞核蛋白提取試劑盒（購自上海生工生物工程股份有限公司），MZF-1、G6PD、天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶3（Caspase-3）、B淋巴細胞瘤2基因（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）和 Bcl-2 相關(guān) X 蛋白（Bax）等一抗（購自英國Abcam公司）。

1.2 細胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染

正常人成骨細胞系hFOB1.19培養(yǎng)于DMEM-F12培養(yǎng)基（含10%胎牛血清，1%的青霉素及鏈霉素）；骨肉瘤細胞MF-63、Saos2及HOS均培養(yǎng)在10%胎牛血清、100 u/ml青霉素和 100 μg/ml鏈霉素的RPMI 1640培養(yǎng)基中；所有細胞均培養(yǎng)在37℃，5%二氧化碳CO2培養(yǎng)箱中。

pcDNA3.1-MZF-1過表達載體（由廣州俊輝生物科技有限公司構(gòu)建合成）。具體方法為：首先在正常人成骨細胞系hFOB1.19中擴增MZF-1基因，連接至pMD18-T載體測序鑒定，然后將測序正確的含有MZF-1目的片段的pMD-18T重組載體進行EcoRⅠ及HindⅢ雙酶切并克隆到pcDNA3.1真核表達載體，挑選測序正確的過表達質(zhì)粒進行后續(xù)實驗。分組：未轉(zhuǎn)染的骨肉瘤細胞HOS對照組（CK）、轉(zhuǎn)染空載組（pcDNA3.1-vector）、轉(zhuǎn)染 pcDNA 3.1-MZF-1的骨肉瘤細胞組（pcDNA3.1-MZF-1）。每孔以1×103個細胞濃度接種在96孔細胞培養(yǎng)板或5×105個細胞接種至6孔板中，待細胞長至80%時，按照LipofectamineTM2000說明書將0.7 μg質(zhì)粒DNA和2 μl脂質(zhì)體各用RPMI 1640培養(yǎng)基稀釋于1.5 ml的離心管中，室溫靜置10 min后，將稀釋好的質(zhì)粒和脂質(zhì)體混合，靜置20 min后加入到不含血清的細胞培養(yǎng)板中，37℃培養(yǎng)5 h后，將培養(yǎng)液更換為含10%胎牛血清的培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)24、48及72 h。在熒光顯微鏡下觀察檢測轉(zhuǎn)染效率。

1.3 實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測

利用 Trizol提取 hFOB1.19、MF-63、Saos2、HOS及轉(zhuǎn)染HOS后各組細胞總RNA，利用Prime ScriptTM實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR）Kit反轉(zhuǎn)錄成cDNA，最后用SYBR Premix EX Taq進行qRT-PCR，目的基因表達量按照2-△△ct法計算。見表1。

1.4 蛋白質(zhì)印跡法

收集細胞，加入RIPA裂解液，于冰上放置30 min后，15000 r/min離心10min。將30μg蛋白于10%十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰氨凝膠電泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gelelectrophoresis，SDSPAGE）凝膠中進行電泳，然后轉(zhuǎn)移至聚偏氟乙烯（polyvinylidene fluoride，PVDF）膜上，加入 5%脫脂奶粉進行封閉。再加入相應(yīng)的一抗于4℃孵育過夜。最后加入二抗室溫孵育1 h后，利用ECL液顯影，掃描儀中成像。

表1 引物序列

1.5 MTT法檢測細胞增殖

按照1.2中所述的96孔板中轉(zhuǎn)染后，繼續(xù)培養(yǎng)24、48及72 h，分別向每孔加入 20 μl MTT 溶液，繼續(xù)培養(yǎng)4 h后，加入100 μl DMSO溶液，混勻后與酶標儀490 nm處檢測吸光度值。

1.6 流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡及細胞周期

按照1.2中所述的6孔板中轉(zhuǎn)染后，繼續(xù)培養(yǎng)48 h，收集細胞，用PBS清洗3次，棄掉上清液，用100 μl結(jié)合緩沖液重懸細胞，加入10μl Annexin V-FITC和5 μl的PI，混勻后室溫避光反應(yīng)15 min，最后于流式細胞儀上檢測。

按照1.2中所述的6孔板中轉(zhuǎn)染后，繼續(xù)培養(yǎng)48 h，收集細胞，用PBS清洗3次，加入0.6 ml PI溶液（含 10mg/L RNase、0.1%Triton-100、50 mg/L PI），4℃避光反應(yīng)15 min后，于流式細胞儀檢測分析脫氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid，DNA）含量。

1.7 熒光素酶實驗

G6PD轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)熒光素酶報告基因載體pGL3-G6PD-wt及相應(yīng)的突變載體pGL-G6PD-mut（由江蘇省南京科佰生物科技有限公司構(gòu)建），人骨肉瘤細胞以1.6×104濃度接種于48孔細胞培養(yǎng)板，24 h后按照LipofectamineTM2000試劑說明書將200 ng的重組熒光素酶報告基因質(zhì)粒pGL3-G6PD-wt、pGLG6PD-mut與2ng的海腎熒光素酶報告載體pRL-TK共轉(zhuǎn)染到每孔細胞中，4 h后更換新鮮培養(yǎng)基，每組各重復(fù)3個孔。24 h后檢測螢火蟲和海腎熒光素酶活性，兩者的比值視為相對熒光素酶活性。分組：①空白對照組；②空載體PGL3-Basic，內(nèi)參質(zhì)粒pRL-TK共轉(zhuǎn)染組；③PGL3-G6PD、內(nèi)參質(zhì)粒pRL-TK共轉(zhuǎn)染組；④MZF-1組成型激活型表達質(zhì)粒、PGL3-G6PD、PRL-TK共轉(zhuǎn)染組；⑤MZF-1組成型活化型表達質(zhì)粒、PGL3-G6PD-mutant、PRL-TK 共轉(zhuǎn)染組。

1.8 統(tǒng)計學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件，計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，比較做單因素方差分析或重復(fù)測量設(shè)計的方差分析，兩兩比較用LSD-t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 骨肉瘤細胞中MZF-1及G6PD表達

經(jīng)單因素方差分析結(jié)果顯示：①不同組細胞中MZF-1、G6PD的表達水平比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=68.91和78.05，均P=0.000）。②與正常人成骨細胞hFOB1.19比較，MZF-1在3種骨肉瘤細胞中的表達下降，G6PD的表達上升（見表2）。Western blot結(jié)果同樣表明，MZF-1在3種骨肉瘤細胞中的表達下降，G6PD的表達上升。見圖1。

表2 各組MZF-1和G6PD的表達 （±s）

表2 各組MZF-1和G6PD的表達 （±s）

組別 MZF-1 mRNA相對表達量 G6PD mRNA相對表達量hFOB1.19 1±0.08 1±0.12 MF-63 0.45±0.04 2.47±0.13 Saos2 0.52±0.03 2.19±0.13 HOS 0.61±0.04 2.35±0.15

圖1 各組MZF-1和G6PD的表達

2.2 過表達MZF-1對HOS細胞增殖影響

轉(zhuǎn)染48 h后，轉(zhuǎn)染效率可達48%（見圖2）。采用重復(fù)測量設(shè)計的方差分析結(jié)果顯示：同組細胞不同轉(zhuǎn)染時間后的細胞增殖情況比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=362.7，P=0.000）；pcDNA3.1-MZF-1 轉(zhuǎn)染組細胞與CK組細胞增殖比較，在48及72 h差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=79.94和119.1，均P=0.000）；與CK組比較，pcDNA3.1-MZF-1轉(zhuǎn)染組細胞增殖下降。見表3。

圖2 pcDNA3.1-MZF-1轉(zhuǎn)染HOS 48 h的轉(zhuǎn)染效率（×100）

表3 過表達MZF-1對HOS細胞增殖的影響 （±s）

表3 過表達MZF-1對HOS細胞增殖的影響 （±s）

組別 24 h 48 h 72 h CK 組 0.35±0.04 0.65±0.03 0.85±0.04 pcDNA3.1-vector組 0.32±0.02 0.61±0.03 0.88±0.04 pcDNA3.1-MZF-1組 0.30±0.02 0.42±0.02 0.51±0.03

2.3 過表達MZF-1對HOS細胞凋亡的影響

與CK組比較，過表達MZF-1可促進HOS細胞凋亡，凋亡率達到58.92%，為CK組的2.97倍（見圖3A）。其次，單因素方差分析結(jié)果顯示：①各組間Bax、Caspase-3及Bcl-2的表達水平比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=285.4、145.1 及 59.39，均 P=0.000）；②與CK組比較，pcDNA3.1-MZF-1轉(zhuǎn)染組中的 Bax、Caspase-3的表達上升，Bcl-2的表達下降。見表4和圖3B。

圖3 過表達MZF-1對HOS細胞凋亡的影響

2.4 過表達MZF-1對HOS細胞周期的影響

單因素方差分析結(jié)果顯示：①不同組中的G0/G1、S及G2期DNA含量比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=201.5、48.42 及 19.44；P=0.000、0.000 及 0002）；②與CK組比較，MZF-1轉(zhuǎn)染組中G0/G1期DNA含量上升，S和G2期DNA含量下降。見圖4。

圖4 過表達MZF-1阻滯細胞周期于G0/G1期

表4 過表達MZF-1對Bax、Caspase-3及Bcl-2 mRNA相對表達量的影響 （±s）

表4 過表達MZF-1對Bax、Caspase-3及Bcl-2 mRNA相對表達量的影響 （±s）

組別 Bax Caspase-3 Bcl-2 CK組 1±0.08 1±0.08 1±0.08 pcDNA3.1-vector組 1.05±0.07 1.12±0.09 1.04±0.08 pcDNA3.1-MZF-1組 2.35±0.08 2.68±0.20 0.51±0.02

2.5 MZF-1對G6PD轉(zhuǎn)錄活性的調(diào)節(jié)作用

單因素方差分析結(jié)果顯示：①各組間的熒光素酶活性比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=77.99，P=0.000）；②與其他組比較，MZF-1與PGL3-G6PD共轉(zhuǎn)染后，熒光素酶活性下降（見圖5），表明MZF-1可負向調(diào)節(jié)G6PD的轉(zhuǎn)錄活性。

2.6 過表達MZF-1對G6PD表達的影響

Real-time PCR及Western blot法檢測過表達MZF-1對G6PD表達的影響，單因素方差分析結(jié)果顯示：①各組間MZF-1及G6PD的mRNA表達水平比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=259.3和93.97，均P=0.000）；②與CK組比較，pcDNA3.1-MZF-1轉(zhuǎn)染組可促進MZF-1的表達，抑制G6PD的表達。見表5和圖6。

圖5 MZF-1可靶向調(diào)節(jié)G6PD的轉(zhuǎn)錄活性

圖6 過表達MZF-1對G6PD表達的影響

表5 過表達MZF-1對MZF-1及G6PD mRNA表達的影響 （±s）

表5 過表達MZF-1對MZF-1及G6PD mRNA表達的影響 （±s）

組別 MZF-1 G6PD CK組 1±0.088 1±0.091 pcDNA3.1-vector組PcDNA3.1-MZF-1組1.06±0.094 4.23±0.330 1.15±0.073 0.42±0.025

3 討論

MZF-1廣泛參與腫瘤細胞的增殖、凋亡及轉(zhuǎn)錄調(diào)控等過程。如MZF-1在一些造血性惡性腫瘤和實體瘤中具有抑制腫瘤發(fā)展的作用[16]；MZF-1通過促使鐵轉(zhuǎn)運蛋白誘導(dǎo)的鐵外排抑制前列腺腫瘤細胞的生長[10]；過表達MZF-1可抑制人宮頸癌細胞的侵襲和遷移[17]。本研究結(jié)果表明，MZF-1在骨肉瘤細胞中的表達下降，且過表達MZF-1可抑制骨肉瘤細胞的增殖，促進骨肉瘤細胞的凋亡，且將細胞周期阻滯于G0/G1期，表明MZF-1在骨肉瘤的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮抑癌的作用。

G6PD可催化葡萄糖-6-磷酸進入戊糖磷酸途徑，一方面對葡萄糖-6-磷酸進行分流促進糖酵解的進行，另一方面提供核糖5-磷酸和NADPH，作為核酸、脂肪酸和膽固醇等物質(zhì)合成的源來，為腫瘤細胞的生長和增殖提供必要的條件[11]。研究報道，腫瘤細胞中的磷酸戊糖途徑活性高于正常細胞，其主要機制則為腫瘤細胞內(nèi)G6PD基因表達的增加。如在人黑色素瘤腫瘤模型小鼠中，G6PD可以促進腫瘤細胞的增殖[18]；G6PD還可以通過調(diào)節(jié)細胞周期蛋白D1/D2參與到人皮膚黑色素瘤A375細胞G1期向S期轉(zhuǎn)換的進程[19]。此外，有研究報道，人G6PD基因啟動子區(qū)域存在MZF1的結(jié)合位點[20]，但是MZF-1對G6PD具體調(diào)控機制尚未明確。本研究結(jié)果證明，G6PD在骨肉瘤細胞中的表達上升，且熒光素酶活性驗證MZF-1可靶向結(jié)合到G6PD啟動子區(qū)域，并且過表達MZF-1可抑制G6PD的表達。MZF-1的轉(zhuǎn)錄抑制作用已在多種生物學(xué)過程中被證實，如過表達MZF-1可通過靶向抑制MMP-2表達來抑制宮頸癌細胞的侵襲和遷移[21]；MZF-1可通過抑制CD34和cmyB的表達抑制胚胎干細胞的血發(fā)生[22]；因此，MZF-1通過轉(zhuǎn)錄抑制G6PD的表達，進而在骨肉瘤的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮抑癌的作用。

綜上所述，本研究表明MZF-1可通過抑制G6PD的表達，抑制骨肉瘤細胞的增殖，促進骨肉瘤細胞凋亡的發(fā)生，并且還可以將細胞周期阻滯于G0/G1期，為骨肉瘤的治療提供新的思路。

[1]TSUKAHARA T,WADA T.Immunotherapy for osteosarcoma[M].Springer Japan,2016:31-41.

[2]XU N,LI Z,YU Z,et al.MicroRNA-33b suppresses migration and invasion by targeting c-Myc in osteosarcoma cells[J].PloS One,2014,9(12):e115300-e115300.

[3]劉躍亮,羅進勇,張彥,等.雙氫青蒿素對人骨肉瘤細胞株143B增殖和凋亡的作用[J].中國藥理學(xué)通報,2012,28(12):1719-1723.

[4]PAN W,WANG H,JIANWEI R,et al.MicroRNA-27a promotes proliferation,migration and invasion by targeting MAP2K4 in human osteosarcoma cells[J].Cellular Physiology& Biochemistry,2014,33(2):402-412.

[5]胡涂,楊慶誠,程冬冬.骨肉瘤轉(zhuǎn)移侵襲機制研究進展[J].中國骨與關(guān)節(jié)雜志,2015(1):41-44.

[6]NIU G,LI B,SUN L,et al.MicroRNA-153 inhibits osteosarcoma cells proliferation and invasion by targeting TGF-β2[J].PloS One,2015,10(3):e0119225.

[7]MENG Y A,WANG,LIANG,et al.Myeloid zinc finger I(MZF1)is the most important transcriptional factor for porcine follistatin promoter[J].農(nóng)業(yè)科學(xué)學(xué)報:英文版,2015(7):1383-1389.

[8]DENG Y,WANG J,WANG G,et al.p55PIK transcriptionally activated by MZF1 promotes colorectal cancer cell proliferation[J].Biomed Research International,2013,2013(1):868131.

[9]HUANG R Y,SU S G,WU D C,et al.BLZF1 expression is of prognostic significance in hepatocellular carcinoma[J].Biochemical&Biophysical Research Communications,2015,467(3):602-609.

[10]CHEN Y,ZHANG Z,YANG K,et al.Myeloid zinc-finger 1(MZF-1)suppressesprostatetumorgrowth through enforcing ferroportin-conducted iron egress[J].Oncogene,2015,34(29):3839-3847.

[11]張正,蔡天池,王艷玲,等.G6PD缺陷誘發(fā)人黑色素瘤A375細胞凋亡機制研究[J].中華腫瘤防治雜志,2014,21(14):1054-1058.

[12]李丹怡,朱月春.沉默G6PD表達對人皮膚黑色素瘤細胞生長及抗氧化應(yīng)激的影響（摘要）[J].昆明醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2010,31(5):148.

[13]STAMOVA B S,APPERSON M,WALKER W L,et al.Identification and validation of suitable endogenous reference genes for gene expression studies in human peripheral blood[J].Bmc Medical Genomics,2009,2(8):49.

[14]XIN W,LIU H,ZHANG X,et al.G6PD downregulation triggered growth inhibition and induced apoptosis by regulating STAT3 signaling pathway in esophageal squamous cell carcinoma[J].Tumor Biology,2016,37(1):781-789.

[15]盧玲琳,梁海萍,顏冬菁.人G6PD基因啟動子區(qū)結(jié)合蛋白的生物信息學(xué)分析[J].生物技術(shù)世界,2015(4):13-14.

[16]GABOLI M,KOTSI P A,GURRIERI C,et al.Mzf1 controls cell proliferation and tumorigenesis[J].Genes& Development,2001,15(13):1625-1630.

[17]TSAI S J,HWANG J M,HSIEH S C,et al.Overexpression of myeloid zinc finger 1 suppresses matrix metalloproteinase-2 expression and reduces invasiveness of SiHa human cervical cancer cells[J].Biochemical&Biophysical Research Communications,2012,425(2):462.

[18]TAO H,ZHANG C,TANG Q,et al.Variant G6PD levels promotetumorcellproliferation orapoptosisvia the STAT3/5 pathway in the human melanoma xenograft mouse model[J].Bmc Cancer,2013,13(1):251-251.

[19]唐瓊玲,張春華,胡滔,等.G6PD通過細胞周期蛋白D1/D2調(diào)控人黑色素瘤細胞周期的進程[J].中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報,2011,27(10):933-941.

[20]LU L,LIANG H,YAN D.Bioinformatics analysis of transcription factor binding site in the promoter of human G6PD gene[J].Biotech World,2015(4):1-3.

[21]TSAI S J,HWANG J M,HSIEH S C,et al.Overexpression of myeloid zinc finger 1 suppresses matrix metalloproteinase-2 expression and reduces invasiveness of SiHa human cervical cancer cells[J].Biochemical&Biophysical Research Communications,2012,425(2):462-467.

[22]PERROTTI D,MELOTTI P,SKORSKI T,et al.Overexpression of the zinc finger protein MZF1 inhibits hematopoietic development from embryonic stem cells:correlation with negative regulation of CD34 and c-myb promoter activity[J].Molecular&Cellular Biology,1995,15(11):6075-6087.

Effect ofMZF-1on proliferation and apoptosis osteosarcoma cells

Xu-zhao Du,Hao Yang,Su-ling Deng,Dong-liang Shi,Qing-liang Meng
(Department of Orthopedics and Traumatology,Henan Provincial Hospital of TCM,Zhengzhou,Henan 450002,China)

R730.5

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2017.21.008

1005-8982（2017）21-0043-06

2017-01-11

孟慶良，E-mail：haoyanghn@163.com