陳傳紅　周亞平　余志堅(jiān)

摘要：以金邊虎尾蘭（Sansevieria trifasciata var. laurenttii）肉質(zhì)葉片作為外植體材料，進(jìn)行組織培養(yǎng)研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，金邊虎尾蘭葉齡與葉片部位對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)有影響，其中采用一年生葉片中部的組織誘導(dǎo)率最高；誘導(dǎo)葉片愈傷組織最適培養(yǎng)基為MS+2.0 mg/L 2，4-D+0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+0.7%瓊脂+4%蔗糖；誘導(dǎo)芽分化最適培養(yǎng)基為MS+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+0.7%瓊脂+4%蔗糖；誘導(dǎo)試管苗生根最適培養(yǎng)基為1/2MS+1.0 mg/L NAA+0.7%瓊脂+4%蔗糖。

關(guān)鍵詞：金邊虎尾蘭；愈傷組織；芽分化，誘導(dǎo)生根

中圖分類號(hào)： S682.360.4+3文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號(hào)：1002-1302（2017）14-0034-02

金邊虎尾蘭（Sansevieria trifasciata var. laurenttii），別稱金邊虎皮蘭，屬龍舌蘭科、虎尾蘭屬植物，原產(chǎn)非洲熱帶和印度。金邊虎尾蘭是一種可凈化室內(nèi)空氣的觀葉草本植物，能清除甲醛、三氯乙烯、硫化氫、苯、苯酚、氟化氫、重金屬微粒，還能吸收鈾等放射性元素等[1-3]，因此在當(dāng)今花卉市場(chǎng)中占據(jù)著重要的一席，深受人們的喜愛。

傳統(tǒng)的虎尾蘭繁殖方式為分株繁殖，其繁殖速度不快[4-5]。目前，對(duì)虎尾蘭愈傷組織的誘導(dǎo)有少量報(bào)道[6-7]，但對(duì)虎尾蘭“器官發(fā)生型”誘導(dǎo)方式獲得試管苗的系統(tǒng)研究報(bào)道較少。本試驗(yàn)以金邊虎尾蘭葉片為外植體，比較研究葉齡、葉片部位、激素組合對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)率的影響，并進(jìn)一步對(duì)愈傷組織芽分化以及根誘導(dǎo)成苗的培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化。

1材料與方法

1.1材料

本試驗(yàn)外植體材料取自金邊虎尾蘭葉片，金邊虎尾蘭購(gòu)自花店，為多年生盆栽苗。

1.2外植體表面的消毒

用小刀從金邊虎尾蘭植株上取下葉片，在自來(lái)水下擦洗掉葉片表面的污垢，將葉片切成2.5 cm×2.5 cm大小的片段，放置到裝有洗衣粉溶液的廣口瓶中，蓋好廣口瓶塞，反復(fù)振蕩浸泡12 min后，倒掉洗衣粉水，用流動(dòng)自來(lái)水沖洗 15 min 洗去洗衣粉殘留。沖洗完后把水瀝干并蓋上蓋子，移至超凈工作臺(tái)中，用適量70%乙醇消毒30 s，之后無(wú)菌水沖洗2次，加入適量0.1%濃度的HgCl2和1滴吐溫，不停搖動(dòng)，10 min 后，用無(wú)菌水沖洗3～4遍，接種時(shí)外植體切成 2.0 cm×2.0 cm大小的片段。

1.3外植體的選取

本試驗(yàn)采用了一年生、二年生、多年生葉片作為外植體進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn)，另外對(duì)當(dāng)年生葉片進(jìn)行不同部位（葉基部、中部和頂部）對(duì)比試驗(yàn)。

1.4培養(yǎng)基的配制

本試驗(yàn)所用基本培養(yǎng)基均為MS培養(yǎng)基，附加0.7%瓊脂、4%蔗糖。愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基共5組，其中培養(yǎng)基1～4分別附加0.5、1.0、1.5、2.0 mg/L 2，4-D，附加濃度均為 0.5 mg/L 的6-BA、NAA的組合；培養(yǎng)基5為附加2.5 mg/L 2，4-D、1.0 mg/L 6-BA、0.5 mg/L NAA的組合。愈傷組織芽分化培養(yǎng)基共6組，其中a～d分別附加0.5、1.0、1.5、2.0 mg/L 6-BA與0.5 mg/L NAA組合，e、f分別附加0.5、2.0 mg/L 6-BA與0.5 mg/L NAA組合。試管苗生根培養(yǎng)基以1/2MS為基本培養(yǎng)基，附加0、0.5、1.0、1.5、2.5 mg/L NAA，共6組（Ⅰ～Ⅴ）。以上試驗(yàn)每處理均接種10瓶，每瓶接種1個(gè)外植體。于光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：溫度（25±1） ℃，光照度為2 000 Lx，光照時(shí)間為12 h/d。

2結(jié)果與分析

2.1不同外植體對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)的影響

將多年生、二年生和一年生葉片中部所取的片段作為外植體，各接種10瓶在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)40 d（表1）。另將當(dāng)年生葉片的葉鞘部、中部和頂部所取的片段作為外植體，各接種10瓶在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，放在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)40 d（表2）研究發(fā)現(xiàn)，一年生葉片中部外植體所產(chǎn)生愈傷組織的能力要大于二年生和多年生葉片；嫩葉中部產(chǎn)生愈傷組織的效果最好，愈傷組織誘導(dǎo)倍數(shù)達(dá)到1.88。綜合考慮，選擇一年生葉片的中部作為愈傷組織誘導(dǎo)的外植體，可達(dá)到較好的誘導(dǎo)效果（圖1-a、圖1-b）。

2.22，4-D 對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)的影響

2，4-D 對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)有著重要影響，適當(dāng)濃度的 2，4-D有利于愈傷組織的誘導(dǎo)，其中2.0 mg/L 2，4-D與0.5 mg/L 6-BA、NAA時(shí)的組合誘導(dǎo)效果最好，且誘導(dǎo)出來(lái)的愈傷組織顏色淡黃、結(jié)構(gòu)疏松（圖1-b、表3）。

2.4試管苗生根培養(yǎng)基的篩選

由以上試驗(yàn)愈傷組織誘導(dǎo)出來(lái)的芽生長(zhǎng)至3～4 cm長(zhǎng)后，接種到Ⅰ～Ⅴ 5種生根培養(yǎng)基進(jìn)行根誘導(dǎo)培養(yǎng)30 d后發(fā)現(xiàn)，沒有添加NAA的Ⅰ號(hào)生長(zhǎng)出的根數(shù)少，而且根的長(zhǎng)度也相對(duì)較短，生根率也低，Ⅲ～Ⅴ號(hào)的生根率都是100%，根的長(zhǎng)度上也相差不大，但Ⅲ號(hào)的根數(shù)明顯比其他3種要多，另外Ⅲ號(hào)和Ⅳ號(hào)所長(zhǎng)出的根均比較飽滿粗壯?？傮w來(lái)看，Ⅲ號(hào)生根培養(yǎng)基對(duì)試管苗根誘導(dǎo)效果最好（圖1-e、圖1-f、表5）。

3討論

本研究表明，在植物組織培養(yǎng)中不同器官及部位作為外植體，其芽或愈傷組織的誘導(dǎo)率差異較大，因此必須依據(jù)材料的特點(diǎn)，選取較易表達(dá)全能性的器官及部位，這樣不但能降低植物組織培養(yǎng)的難度，而且能達(dá)到最佳效果。例如在金邊虎尾蘭組織培養(yǎng)中，最好的外植體是金邊虎尾蘭嫩葉片的中部葉片，培養(yǎng)過程中的基部葉片細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，葉頂部細(xì)胞容易死[CM（25]亡。本試驗(yàn)揭示了2，4-D、6-BA、NAA等激素在誘導(dǎo)葉片愈傷組織形成的影響，其中2，4-D 對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)有著關(guān)鍵性作用，以2.0 mg/L 2，4-D再附加0.5 mg/L 6-BA、05 mg/L NAA的激素組合誘導(dǎo)效果最好；1.0 mg/L NAA促進(jìn)試管苗生根的效果最好。

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