魏盟智++郝晨光++趙子晨

一氧化氮是一種廣泛分布在生物體內(nèi)各處的信息分子。生物體內(nèi)的每種信號(hào)分子，都有著自己明確的分工與任務(wù)，以此保證生物生命活動(dòng)有序進(jìn)行。一氧化氮就充當(dāng)了生物的信使、效應(yīng)分子和免疫調(diào)節(jié)分子，發(fā)別在生物的信息處理、應(yīng)對(duì)與免疫系統(tǒng)上發(fā)揮著作用，其中最重要，也最顯著的方面就是免疫調(diào)節(jié)功能。一氧化氮是一種化學(xué)物質(zhì)，能通過(guò)其非特異性殺死細(xì)菌、病毒等對(duì)生物健康有害的物質(zhì)，促進(jìn)生物機(jī)體的非特異性免疫功能；同時(shí)，一氧化氮也因它信號(hào)分子的身份控制生物機(jī)體的特異性免疫。經(jīng)研究表明，一氧化氮在許多病理狀態(tài)下，可以充當(dāng)調(diào)節(jié)許多免疫活性的介質(zhì)，影響機(jī)體免疫功能。

一氧化氮的合成是由一氧化氮合酶催化。一氧化氮合酶催化L-精氨酸，在生物體內(nèi)合成一氧化氮，可以改變機(jī)體的免疫能力。本文為研究副溶血弧菌感染常見(jiàn)養(yǎng)殖魚(yú)類石斑魚(yú)后體內(nèi)一氧化氮合酶的變化情況，為今后人類合理使用副溶血弧菌提供數(shù)據(jù)。

材料與方法

材料。

（1）藥品

副溶血弧菌，一氧化氮合酶測(cè)定試劑。

（2）實(shí)驗(yàn)魚(yú)

取自同一水域，相同體長(zhǎng)，相同體重，且無(wú)疾病的石斑魚(yú)。

實(shí)驗(yàn)方法。

（1）設(shè)計(jì)方案

將石斑魚(yú)都放在相同水位的培養(yǎng)桶里，分別注射濃度為6×10∧6cfu/ml、6×10∧7cfu/ml、6×10∧8cfu/ml的副溶血弧菌懸液，向?qū)φ战M注射相同量的生理鹽水，每組設(shè)置三個(gè)平行對(duì)照組。注射方法為腹腔注射，在注射后24h、48h、72h、120h用0.1ml一次性注射器采血，所取血液放于4℃恒溫冰箱里一夜后，利用轉(zhuǎn)速離心法以4000r/min離心5分鐘，后儲(chǔ)存于-20℃恒溫冰箱里待測(cè)。

（2）檢驗(yàn)方法

化學(xué)比濁法。利用試劑根據(jù)吸光值計(jì)算一氧化氮合酶活性。

（3）分析數(shù)據(jù)

利用方差比較各組之間的數(shù)據(jù)差異，找出規(guī)律，得出結(jié)論。

結(jié)果分析

注射副溶血弧菌后石斑魚(yú)血清中，一氧化氮合酶的活性顯著升高，而且隨副溶血弧菌的濃度升高，一氧化氮合酶活性也越高，在注射副溶血弧菌24h后達(dá)到峰值，后來(lái)，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，一氧化氮合酶的活性逐漸減小。同時(shí)注射生理鹽水也會(huì)引起一氧化氮合酶的活性變化，也是24h、48h的值大于72h和120h，統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明，只有24h的結(jié)果與其他時(shí)間有差異。

討論

一氧化氮合酶能催化L-精氨酸，在生物體內(nèi)生成一氧化氮。一氧化氮合酶有三種同工酶亞型：神經(jīng)元型一氧化氮合酶；內(nèi)皮細(xì)胞型一氧化氮合酶和誘導(dǎo)形一氧化氮合酶，它們廣泛分布在生物神經(jīng)和內(nèi)皮上，活性依賴鈣離子，當(dāng)鈣離子濃度升高時(shí)，誘導(dǎo)型一氧化氮合酶被活化催化合成少量一氧化氮。誘導(dǎo)型一氧化氮合酶在炎癥和免疫刺激下可以表達(dá)。）研究表明，一氧化氮可以抑制和殺傷病毒、細(xì)菌，在生物免疫中起著重要的作用。某些研究表明，誘導(dǎo)型一氧化氮合酶在虹鱒細(xì)菌攻毒后可進(jìn)行表達(dá)。本次試驗(yàn)結(jié)果表明，注射副溶血弧菌后，石斑魚(yú)體內(nèi)一氧化氮合酶的活性顯著升高，并且，濃度越高的活性越強(qiáng)。說(shuō)明，副溶血弧菌刺激了石斑魚(yú)體內(nèi)的免疫系統(tǒng)，也刺激了一氧化氮合酶，產(chǎn)生了一氧化氮，提高了機(jī)體免疫力，是生物機(jī)體對(duì)于外來(lái)異物的一種免疫應(yīng)答反應(yīng)。

通過(guò)對(duì)常見(jiàn)養(yǎng)殖魚(yú)類一氧化氮合酶免疫功能的研究，我們知道一定濃度、配上一定時(shí)間的副溶血弧菌會(huì)提高生物體一氧化氮合酶的活性，從而提高機(jī)體免疫力。利用這一特性人類可以進(jìn)行人為調(diào)節(jié)一氧化氮在常見(jiàn)養(yǎng)殖魚(yú)類體內(nèi)的含量，可以增強(qiáng)魚(yú)類的免疫力，保證魚(yú)類的健康，減少養(yǎng)殖魚(yú)類對(duì)抗菌藥物的使用，提高魚(yú)類的質(zhì)量與數(shù)量，為今后的魚(yú)類養(yǎng)殖提供了新技術(shù)。如今許多水產(chǎn)品的質(zhì)量低下，使用了過(guò)量的化學(xué)藥物和抗生素，對(duì)人類健康、生態(tài)系統(tǒng)的穩(wěn)定都產(chǎn)生了極大的影響，利用副溶血弧菌提高魚(yú)類免疫力，增強(qiáng)魚(yú)類的抗病能力，對(duì)魚(yú)類養(yǎng)殖很有益處。

作者簡(jiǎn)介：

魏盟智（1994-），男，河北辛集人，河北農(nóng)業(yè)大學(xué)渤海校區(qū)，學(xué)生，水產(chǎn)養(yǎng)殖學(xué)；郝晨光（1995-），男，河北唐山人，河北農(nóng)業(yè)大學(xué)渤海校區(qū)，學(xué)生，水產(chǎn)養(yǎng)殖學(xué)；趙子晨（1996-），男，河北石家莊人，河北農(nóng)業(yè)大學(xué)渤海校區(qū)，學(xué)生，水產(chǎn)養(yǎng)殖學(xué)。