黃康東馬亞賓史芳舒劉聚祥

（1.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，河北保定071000；2.河北省畜牧良種工作站，石家莊050061）

DHI測(cè)定專用防腐劑的研制

黃康東1馬亞賓2史芳舒1劉聚祥1

（1.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，河北保定071000；2.河北省畜牧良種工作站，石家莊050061）

研制適于夏季高溫長(zhǎng)途運(yùn)輸條件下使用的DHI奶樣檢測(cè)專用防腐劑。采用安全、高效的溴硝丙二醇及具有優(yōu)良防腐殺菌性能的疊氮鈉作為主要成分，與尼泊金甲酯鈉、青霉素、鏈霉素組成不同配方，通過(guò)分析不同配方對(duì)牛奶中乳脂率、乳蛋白率、乳糖率、體細(xì)胞數(shù)、尿素氮、β-羥丁酸、游離脂肪酸的影響，來(lái)篩選最佳組方。結(jié)果表明，溴硝丙二醇10 mg、疊氮鈉25 mg為最佳組方，能夠保證奶樣在40℃高溫條件下保質(zhì)達(dá)7 d以上，對(duì)奶樣的測(cè)定結(jié)果沒(méi)有影響。

DHI防腐劑；乳脂率；乳蛋白率；體細(xì)胞數(shù)

0 引 言

DHI（Dairy herd improvement）為奶牛改良系統(tǒng)，也稱奶牛生產(chǎn)性能記錄體系，是目前最為科學(xué)、經(jīng)濟(jì)有效的奶牛生產(chǎn)管理工具，DHI已成為奶牛群改良科學(xué)化、規(guī)范化的標(biāo)志[1]，在提高產(chǎn)奶量、預(yù)防乳房炎、指導(dǎo)生產(chǎn)管理都有一定的作用[2]。乳脂率與乳蛋白率的比值是脂蛋比，反映瘤胃功能和日糧配方中蛋白含量[3]，理想脂蛋比在1.12～1.30之間[4]。體細(xì)胞數(shù)是反映乳房健康水平的重要標(biāo)志[4]。尿素氮可反映出瘤胃中氮代謝的效率和蛋白質(zhì)代謝的有效性[5]，測(cè)定尿素氮可反映血液中尿素含量，提示奶牛日糧蛋白質(zhì)水平、能氮比、降解率以及瘤胃能氮平衡等[6-7]。檢測(cè)β-羥丁酸反映奶牛是否患有亞臨床酮病[8]。在運(yùn)輸中為防牛奶腐敗變質(zhì)需加入專用防腐劑，理想防腐劑具以下條件：廣譜；安全高效；水溶性好；室溫條件下穩(wěn)定；合理延長(zhǎng)活性儲(chǔ)存期[9]。

1 實(shí)驗(yàn)

1.1 材料與設(shè)備

牛奶，取自定州鴻發(fā)牛場(chǎng)，現(xiàn)用現(xiàn)取。

儀器：電熱恒溫培養(yǎng)箱，烘箱，艾科浦超純水系統(tǒng)，雷動(dòng)爾高速離心機(jī)，DENBER INSTRUMENT電子天平，BENTLEY INSTRUMENTS NexGen系列儀器FCM-FTS乳成分測(cè)定儀，BENTLEY INSTRU?MENTS NexGen系列儀器ILAS3000乳成分測(cè)定儀，F(xiàn)ossomatic FC乳成分及體細(xì)胞分析儀。

實(shí)驗(yàn)藥品為青霉素,鏈霉素,溴硝丙二醇,尼泊金甲酯鈉,疊氮鈉。

對(duì)照藥品為?？肆_特顆粒。

1.2 方法

（1）組方初篩實(shí)驗(yàn)。根據(jù)食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)[10]及相關(guān)實(shí)驗(yàn)確定防腐劑添加劑量并擬定5個(gè)組方。Ⅰ組為溴硝丙二醇7 mg+尼泊金甲酯鈉3 mg+青鏈霉素200單位；Ⅱ組為疊氮鈉10 mg；Ⅲ組為疊氮鈉25 mg；Ⅳ組為溴硝丙二醇10 mg+疊氮鈉10 mg；Ⅴ組為溴硝丙二醇10 mg+疊氮鈉25 mg；另設(shè)藥物對(duì)照組和空白對(duì)照組。對(duì)5個(gè)組方進(jìn)行試驗(yàn)，采集當(dāng)天同一來(lái)源，同一條件下的新鮮奶樣，經(jīng)過(guò)搖勻，分裝50 mL為一個(gè)樣品，常溫加入試驗(yàn)藥品，每組進(jìn)行3個(gè)平行試驗(yàn)，在40℃恒溫箱中穩(wěn)定保存，并與對(duì)照組進(jìn)行比較，根據(jù)初篩試驗(yàn)判定標(biāo)準(zhǔn)篩選出防腐期達(dá)10 d以上的藥物組方。

（2）組方優(yōu)化實(shí)驗(yàn)。對(duì)初步篩選出來(lái)的藥物組方進(jìn)行試驗(yàn)，采集當(dāng)天同一來(lái)源，同一條件下的新鮮奶樣，經(jīng)過(guò)搖勻，分裝50 mL為一個(gè)樣品，常溫加入試驗(yàn)藥品，每組進(jìn)行3個(gè)平行實(shí)驗(yàn)，在40℃恒溫箱中穩(wěn)定保存，使用乳成分測(cè)定儀測(cè)定相關(guān)生化指標(biāo)在7 d內(nèi)的動(dòng)態(tài)變化，并與對(duì)照組進(jìn)行比較，篩選出最佳組方。

（3）初篩試驗(yàn)判定標(biāo)準(zhǔn)。將樣品置40℃恒溫箱中進(jìn)行試驗(yàn)，肉眼觀察；當(dāng)奶樣中出現(xiàn)凝乳塊，牛奶分層，有腐臭味和強(qiáng)烈的哈喇味道時(shí)，視為變質(zhì)，記錄防腐時(shí)間。

（4）優(yōu)化試驗(yàn)測(cè)定指標(biāo)。乳脂率、乳蛋白率、乳糖率、體細(xì)胞數(shù)、尿素氮、β-羥丁酸、游離脂肪酸及眼觀變化。

（5）統(tǒng)計(jì)分析方法采用SPSS Stastistics17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié) 果

2.1 初篩實(shí)驗(yàn)結(jié)果

對(duì)5個(gè)藥物組方進(jìn)行試驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1所示。

表1 藥物組方初篩實(shí)試驗(yàn)結(jié)果

由表1可以看出，5個(gè)實(shí)驗(yàn)組中，疊氮鈉藥物劑量在10 mg時(shí)防腐時(shí)間只能達(dá)到6 d，其他藥物組和藥物對(duì)照組均能達(dá)到10 d及以上，空白對(duì)照只能保存2 d。因此，將組方Ⅱ疊氮鈉10 mg排除，另外4組繼續(xù)進(jìn)行優(yōu)化試驗(yàn)。

2.2 優(yōu)化實(shí)驗(yàn)結(jié)果

對(duì)初步篩選出來(lái)的藥物組方Ⅰ，Ⅲ，Ⅳ，Ⅴ進(jìn)行生化指標(biāo)測(cè)定，并與藥物對(duì)照組進(jìn)行比較，結(jié)果如表2-表6所示。

由表3可見(jiàn)，藥物組方Ⅰ的乳脂率、乳蛋白率、乳糖率、細(xì)胞數(shù)、β-羥丁酸等指標(biāo)變化差異不顯著（P＞0.05），尿素氮和游離脂肪酸差異顯著（P＜0.05）。

由表4可以看出，藥物組方Ⅲ的乳糖率、β-羥丁酸變化差異顯著（P＞0.05），乳脂率、乳蛋白率、尿素氮、游離脂肪酸和體細(xì)胞數(shù)變化差異顯著（P＜0.05）。

由表5可以看出，藥物組方Ⅳ的乳脂率、乳蛋白率、乳糖率、體細(xì)胞數(shù)、β-羥丁酸等指標(biāo)變化差異不顯著（P＞0.05），尿素氮和游離脂肪酸變化差異顯著（P＜0.05）。

由表6可見(jiàn)，藥物組方Ⅴ的乳脂率、乳蛋白率、乳糖率、體細(xì)胞數(shù)、尿素氮、β-羥丁酸等指標(biāo)變化差異不顯著（P＞0.05），游離脂肪酸變化差異顯著（P＜0.05）。

在標(biāo)示DHI乳樣穩(wěn)定性的指標(biāo)當(dāng)中，乳脂率、乳蛋白率、乳糖率、體細(xì)胞數(shù)、β-羥丁酸、尿素氮為主要指標(biāo)，游離脂肪酸為次要指標(biāo)。由表2-6試驗(yàn)結(jié)果可知，在主要指標(biāo)和次要指標(biāo)上只有藥物組方Ⅴ與藥物對(duì)照組相同；表明組方Ⅴ與對(duì)照藥物具有同等防腐效果，其它組方均不及組方Ⅴ，因此組方Ⅴ為最優(yōu)組方。與對(duì)照藥物比較，研制的組方價(jià)格低廉，具有成本優(yōu)勢(shì)，可以降低檢測(cè)費(fèi)用。

3 討論

牛乳是有乳清、分散的脂肪球和酪蛋白構(gòu)成的更小的固體粒子組成，牛乳中富含的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及其微生物等，是導(dǎo)致牛乳腐敗變質(zhì)及產(chǎn)生異味的主要原因[11]。在夏季運(yùn)輸中，由于路途遙遠(yuǎn)，溫度較高，牛乳更易發(fā)生腐敗，為了防止牛乳腐敗變質(zhì)，故采用添加防腐劑是目前運(yùn)用最廣泛有效的方法，因此需要研制出一種DHI測(cè)定專用防腐劑。DHI報(bào)告的作用：能夠真實(shí)反映牧場(chǎng)的管理水平和需要解決的問(wèn)題，只有認(rèn)真分析數(shù)據(jù)找到問(wèn)題，并最終解決問(wèn)題，DHI的作用才能充分發(fā)揮[12]。

表2 藥物對(duì)照組實(shí)驗(yàn)結(jié)果（n=5）

表3 藥物組方Ⅰ實(shí)驗(yàn)結(jié)果（n=5）

表4 藥物組方Ⅲ實(shí)驗(yàn)結(jié)果（n=5）

表5 藥物組方Ⅳ實(shí)驗(yàn)結(jié)果（n=5）

表6 藥物組方Ⅴ實(shí)驗(yàn)結(jié)果（n=5）

本研究中，選擇溴硝丙二醇及疊氮鈉作為主要成分，溴硝丙二醇具有以下優(yōu)點(diǎn)：（1）廣譜高效，能抑制大部分的細(xì)菌生長(zhǎng)；（2）價(jià)格低廉，用量較低；（3）配伍性能好，能與其他防腐劑混合使用；（4）適宜pH值范圍較寬；（5）水溶性好，使用方便[13]。溴硝丙二醇的抗菌機(jī)理是溴原子氧化細(xì)菌細(xì)胞膜表面的硫醇基，使之成為二硫化合物，導(dǎo)致細(xì)胞壁突起，進(jìn)而細(xì)胞破裂而殺死細(xì)菌[14]。疊氮鈉是一種無(wú)色無(wú)味的六方晶體或白色晶體，在醫(yī)藥、血清防腐、殺菌、殺蟲劑和殺菌劑等方面都有涉及[15]。當(dāng)兩者配合使用時(shí)，發(fā)現(xiàn)能夠顯著提高防腐時(shí)間，并且對(duì)檢測(cè)結(jié)果影響較小，具有安全高效，價(jià)格低，水溶性好，不受其他成分影響等優(yōu)勢(shì)。

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Screening of the best preservative for DHI testing

HUANG Kangdong1,MA Yabin2,SHI Fangshu1,LIU Juxiang1

（1.College of Veterinary Medicine,Agriculture University of Hebei,Baoding 071000，China;2.Livestock breeding ser?vice center of Hebei,Shijiazhuang 050061，China）

To develop the preservative especiallyfor DHI testing keeping the milk samples from going bad under the condition of high tem?perature and long distance transportation in summer.The safe and efficient bronopol and theexcellent anticorrosive antiseptic properties of so?dium azide were used as main ingredient combined with methyl paraben sodium,penicillin and streptomycin.Different compounds were de?signed.By analyzing effects of the compounds on the rates of butterfat,protein,lactose,somatic cell number,urea nitrogen,β-hydroxybuty rate,and nonesterified fatty acid,the best preservative formula was screened.The result indicated 10mg bronopol and 25 mg sodium azide was the best formula and can preserve the milk samples at least for 7 days under 40 degrees Celsius,and has no effect on the determination re?sults of milk samples.

DHI preservative；butterfat rate；protein rate；somatic cell count

TS252.7

A

1001-2230（2017）08-0026-04

2016-12-13

河北省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系奶牛產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)，全國(guó)農(nóng)業(yè)技術(shù)試驗(yàn)示范（奶牛生產(chǎn)性能測(cè)定）項(xiàng)目，奶牛精細(xì)化管理關(guān)鍵技術(shù)試驗(yàn)與示范（冀農(nóng)科15021）。

黃康東（1992-），男，碩士研究生，主要從事新獸藥研發(fā)與殘留控制研究。

劉聚祥