朱衛(wèi)偉

安陽市腫瘤醫(yī)院 河南 安陽 455000)

PD-1和PD-L1在胃癌組織中的表達(dá)及臨床意義

朱衛(wèi)偉

安陽市腫瘤醫(yī)院 河南 安陽 455000)

目的檢測(cè)PD-L1和PD-1在胃癌組織中的表達(dá)情況，探討其與患者臨床病理特征和疾病進(jìn)展的關(guān)系。方法回顧性分析2015年2月至2016年11月在安陽市腫瘤醫(yī)院行根治性手術(shù)的64例胃癌患者的臨床資料，選取手術(shù)區(qū)標(biāo)本作為觀察組，隨機(jī)選取癌旁組織標(biāo)本作為對(duì)照組。觀察對(duì)比兩組PD-1和PD-L1的檢測(cè)結(jié)果，分析其與患者臨床病理特征和疾病進(jìn)展的關(guān)系。結(jié)果觀察組標(biāo)本PD-L1陽性率高于對(duì)照組(65.6%比0.0%)，PD-1陽性率高于對(duì)照組(39.1%比0.0%)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；浸潤(rùn)到漿膜層，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，Ⅲ、Ⅳ期者PD-L1陽性率高于其他患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；PD-1表達(dá)水平和癌灶浸潤(rùn)情況、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、分期無關(guān)。結(jié)論P(yáng)D-1和PD-L1在胃癌組織中表達(dá)水平明顯升高，且PD-L1的表達(dá)和患者病理特征關(guān)系密切，可能成為預(yù)測(cè)胃癌進(jìn)展的新型分子標(biāo)志物，阻斷PD-L1/PD-1信號(hào)通路可能是對(duì)腫瘤患者展開免疫治療的重要途徑，為胃癌患者免疫治療提供新思路?！?/p>

】 胃癌；PD-L1；PD-1

胃癌是一種常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，早期多無明顯癥狀，少數(shù)人有惡心、嘔吐或類似潰瘍病的上消化道癥狀，在中國(guó)其發(fā)病率居首位，嚴(yán)重威脅患者的生命健康[1-3]。針對(duì)胃癌患者，臨床提倡早診斷、早治療，及時(shí)有效的治療是良好預(yù)后的前提[4]。程序性死亡受體1(programmed death 1，PD-1)是一種重要的免疫抑制分子，以其為靶點(diǎn)的免疫調(diào)節(jié)對(duì)抗腫瘤、抗感染、抗自身免疫性疾病及移植器官存活等均有重要意義，其配體PD-L1也可作為靶點(diǎn)，相應(yīng)的抗體也可以起到相同的作用[5]。本研究選取64例胃癌患者，旨在檢測(cè)PD-L1和PD-1在胃癌組織中的表達(dá)情況，探討其與患者臨床病理特征和疾病進(jìn)展的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1一般資料回顧性分析2015年2月至2016年11月在安陽市腫瘤醫(yī)院行根治性手術(shù)治療的64例胃癌患者的臨床資料，選取手術(shù)區(qū)標(biāo)本作為觀察組，隨機(jī)選取癌旁組織標(biāo)本作為對(duì)照組。所有患者均經(jīng)手術(shù)病理確診為胃癌。其中男40例，女24例，年齡32～75歲，平均(56.3±4.2)歲。所有患者術(shù)前均未接受化療或放療，無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，臨床資料完整。

1.2檢測(cè)方法應(yīng)用免疫組織化學(xué)PV-6000兩步法進(jìn)行指標(biāo)檢測(cè)。所采集的標(biāo)本均制為蠟塊，連續(xù)切片，厚度為4 μm，經(jīng)脫蠟、水化處理，滴入3%過氧化氫溶液，在室溫中反應(yīng)10 min，以PBS緩沖液沖洗3次，5 min/次，放入檸檬酸鹽緩沖液(pH=6.0)，于微波爐內(nèi)加熱20 min，實(shí)施抗原修復(fù)；取出后自然冷卻，恢復(fù)室溫后再用PBS進(jìn)行3次沖洗，5 min/次，滴入1∶200稀釋的鼠抗人PD-1單克隆抗體和1∶200稀釋的兔抗人PD-L1多克隆抗體，在4 ℃條件下過夜，孵育后以PBS沖洗液沖洗3次，5 min/次；以PV-6000二抗試劑盒向每張切片加入50 μl二抗，室溫中孵育20 min，以PBS沖洗液再?zèng)_洗3次，5 min/次；每張切片滴加新配置的DAB顯色劑100 μl，室溫條件下避光顯色，光學(xué)顯微鏡下控制顯色時(shí)間，3～5 min后以蒸餾水沖洗，顯色終止；以蘇木精行1 min復(fù)染，采用自來水沖洗，返藍(lán)，用梯度酒精脫水并干燥，并用二甲苯行透明處理，采用中性樹膠封片。所有的免疫組化切片均由固定的2位病理科醫(yī)師進(jìn)行獨(dú)立評(píng)估。

1.3觀察指標(biāo)觀察對(duì)比兩組PD-1和PD-L1的檢測(cè)結(jié)果，分析其與患者臨床病理特征和疾病進(jìn)展的關(guān)系。PD-1和PD-L1陽性判定標(biāo)準(zhǔn)：以細(xì)胞膜或細(xì)胞漿中可見黃色至棕褐色顆粒為陽性顯色。

2 結(jié)果

2.1PD-1和PD-L1檢測(cè)結(jié)果觀察組標(biāo)本PD-L1陽性率高于對(duì)照組(65.6%比0.0%)，PD-1陽性率高于對(duì)照組(39.1%比0.0%)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=62.51、31.07，P<0.05)。

2.2觀察組PD-1和PD-L1表達(dá)情況與患者臨床特征及疾病進(jìn)展的關(guān)系浸潤(rùn)到漿膜層、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Ⅲ、Ⅳ期者PD-L1陽性率高于其他患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；PD-1表達(dá)水平和癌灶浸潤(rùn)情況、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、分期無關(guān)。見表1。

表1 觀察組PD-1和PD-L1表達(dá)情況與患者臨床特征及疾病進(jìn)展的關(guān)系[n(%)]

3 討論

PD-L1是氨基酸跨膜蛋白，含有胞外區(qū)域與中間疏水結(jié)構(gòu)，有蛋白磷酸化活化位點(diǎn)，在諸多惡性腫瘤如胃癌、乳腺癌、食管癌、肺癌中均有過度表達(dá)。PD-1為具有單一胞外IgV樣功能區(qū)域的Ⅰ型穿膜蛋白，包含氨基酸殘基288個(gè)，是一種負(fù)性共刺激信號(hào)分子。在諸多腫瘤組織淋巴細(xì)胞內(nèi)，特別是T淋巴細(xì)胞中，均可見PD-1的過度表達(dá)。

本研究結(jié)果顯示，觀察組標(biāo)本PD-L1陽性率高于對(duì)照組(65.6%比0.0%)，PD-1陽性率高于對(duì)照組(39.1%比0.0%)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示PD-1和PD-L1在胃癌組織中均高度表達(dá)，呈正相關(guān)。分期為Ⅲ、Ⅳ期患者PD-L1陽性率明顯高于Ⅰ、Ⅱ期，提示PD-L1表達(dá)水平高的胃癌患者其病理分期較晚，這可能是缺少正常的免疫監(jiān)視所引起的。浸潤(rùn)到漿膜層、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者PD-L1表達(dá)水平高于浸潤(rùn)到肌層或黏膜或黏膜下、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，可能是因?yàn)镻D-L1可通過調(diào)節(jié)免疫功影響腫瘤微環(huán)境，促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移機(jī)浸潤(rùn)。PD-L1結(jié)合其受體后，可誘導(dǎo)T細(xì)胞凋亡，促使效應(yīng)T細(xì)胞失活，抑制抗腫瘤免疫。腫瘤細(xì)胞內(nèi)PD-L1升高和其在腫瘤微環(huán)境中的免疫反應(yīng)負(fù)向調(diào)節(jié)功能說明，通過阻斷PD-L1/PD-1信號(hào)通路可能是對(duì)腫瘤患者展開免疫治療的可靠途徑，有待進(jìn)一步深入研究。

綜上所述，PD-1和PD-L1在胃癌組織中表達(dá)水平明顯升高，且PD-L1的表達(dá)和患者病理特征關(guān)系密切，可能成為預(yù)測(cè)胃癌進(jìn)展的新型分子標(biāo)志物，阻斷PD-L1/PD-1信號(hào)通路可能是對(duì)腫瘤患者展開免疫治療的重要途徑，為胃癌患者免疫治療提供新思路。

[1] 張鋒,韋海濤,王作培,等.食管鱗癌組織中程序性死亡分子1表達(dá)變化及意義[J].山東醫(yī)藥,2016,56(26):41-43.

[2] 雷澤民,余宗陽.非小細(xì)胞肺癌T細(xì)胞PD-1免疫靶向治療研究現(xiàn)狀與展望[J].中國(guó)腫瘤,2015,24(5):398-402.

[3] 宗云輝,何宋兵,游鳳濤,等.PD-1和TIM-3在胃癌病人免疫組織CD3+T細(xì)胞中的表達(dá)分析[J].免疫學(xué)雜志,2014,5(10):902-905.

[4] 駱飛,孫昭,白春梅.PD-1/PD-L1在胃癌中的研究進(jìn)展[J].癌癥進(jìn)展,2016,14(6):503-506.

[5] 祁玲,黃鏡.PD-1/PD-L1抑制劑在晚期胃癌治療中的臨床研究進(jìn)展[J].中國(guó)生化藥物雜志,2016,36(7):4-7.

R 735.2doi: 10.3969/j.issn.1004-437X.2017.18.016

2017-01-25)