顏文貞，戴 璟，田 猛，戴 東

(1.廣東醫(yī)科大學(xué)護理學(xué)院，廣東 東莞523808;2.廣東醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)院；3.廣東醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院)

乳腺癌淋巴轉(zhuǎn)移與Galectin-3、CA19-9表達的相關(guān)性研究

顏文貞1，戴 璟2，田 猛2，戴 東3*

(1.廣東醫(yī)科大學(xué)護理學(xué)院，廣東 東莞523808;2.廣東醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)院；3.廣東醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院)

目的通過檢測乳腺癌組織中半乳凝素-3(Galectin-3)、CA19-9的表達，探討Galectin-3、CA19-9與乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性研究。方法對85例乳腺癌患者手術(shù)切除的癌組織：① 進行常規(guī)連續(xù)切片 HE 染色病理診斷、分期。② 應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測癌組織中及癌旁組織Galectin-3、CA19-9的表達水平；③ 結(jié)合淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況進行分析對比。結(jié)果① 有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的癌組織Galectin-3和CA19-9表達與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組癌組織中的表達有差異性改變(P<0.05)。② 有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組癌旁組織Galectin-3、CA19-9表達與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的癌旁組織中的表達亦呈差異性改變(P<0.05)。結(jié)論乳腺癌的侵襲及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移可能與Galectin-3與CA19-9的表達呈正相關(guān)性改變。

乳腺癌；Galectin-3；CA199；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；免疫組織化學(xué)

(ChinJLabDiagn,2017,21:1299)

半乳凝素-3(Galectin-3)是具有與β-Gal和 LacNA 殘基結(jié)合的共同一致序列的外凝集素家族成員之一，結(jié)構(gòu)不同的半乳凝素，生物學(xué)特性不同[1]。研究表明，Galectin-3對消化道腫瘤及甲狀腺癌早期診斷預(yù)測有一定的臨床意義[2]。Galectin-3 結(jié)合蛋白(LGALS3BP)參與抑制單核細(xì)胞來源的纖維細(xì)胞分化從而抑制腫瘤包膜的形成[3]。Galectin-3通過多種途徑抑制細(xì)胞凋亡，并能促進細(xì)胞間粘附，這可能與腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān)[4]。CA19-9是MUC1蛋白的一種Lewis A 抗原唾液酸化衍化物，常用于腫瘤的篩查， CA19-9作為腫瘤標(biāo)志物用于協(xié)助乳腺癌早期診斷已經(jīng)得到認(rèn)可[5]。但Galectin-3和CA19-9的高表達與乳腺癌的侵襲及淋巴的轉(zhuǎn)移的相關(guān)研究鮮有報道。本研究探討Galectin-3、CA19-9與乳腺癌轉(zhuǎn)移侵襲的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集廣東醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院甲乳外科2014—2016年間行手術(shù)治療的乳腺癌患者共計85例，年齡31-82歲，其中位年齡為49歲。納入病例為行乳腺癌根治術(shù)或改良根治術(shù)且術(shù)前未行放、化療的患者。其中無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者為39例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者為46例。所有病例均在手術(shù)切除后取癌組織和癌組織周圍3 cm的癌旁組織并用福爾馬林固定再石蠟包埋，保存完好。

1.2 病理切片

取石蠟包埋的癌組織用輪轉(zhuǎn)式切片機進行石蠟切片，厚度約4 μm，將切片移入40℃的恒溫?zé)崴髦校归_后制片。然后行HE染色。根據(jù)WHO乳腺癌腫瘤病理學(xué)分類、TNM分期標(biāo)準(zhǔn)和術(shù)后病理結(jié)果與HE染色切片進行復(fù)核診斷。最終根據(jù)最后復(fù)核診斷將病例標(biāo)本分為無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移乳腺癌組和有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移乳腺癌組。

1.3 免疫組織化學(xué)

通過石蠟切片免疫組化En Vision二步法染色， Galectin-3為艾博抗(上海)貿(mào)易有限公司生產(chǎn)的兔抗人多克隆抗體，CA19-9一抗是圣克魯斯生物技術(shù)公司生產(chǎn)的小鼠單克隆抗體。

1.4 結(jié)果評定

Galectin-3抗原抗體復(fù)合物主要出現(xiàn)在細(xì)胞漿中，胞漿呈棕黃色、核呈淡藍色，堆積成癌巢，其中陽性細(xì)胞為染色強度高于非特異性背景色的黃色顆粒細(xì)胞。CA19-9抗原抗體復(fù)合物主要表現(xiàn)在細(xì)胞膜，被染成棕褐色。通過雙盲法觀察免疫組化結(jié)果，依據(jù)IP(Intersity× Percentages)評分方法，最終記分：0分為陰性，1分為低表達，2分為中表達，4分為高表達(染色記分：無染色或與背景色一致為0分，淡黃色或棕黃色為1分，總棕褐色為2分。細(xì)胞數(shù)記分：無陽性細(xì)胞記0分，60%以下的細(xì)胞為陽性記1分，60%以上的細(xì)胞為陽性為2分。最后兩項分乘積為最終記分。)。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

通過SPSS24.0統(tǒng)計學(xué)軟件包作統(tǒng)計學(xué)分析，對兩獨立樣本單向有序資料行秩和檢驗比較陽性表達率，檢驗水準(zhǔn)為α=0.05。

2 結(jié)果

有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中的癌組織Galectin-3和CA19-9表達情況與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的癌組織中的表達情況差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)(見表1)。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中的癌旁組織Galectin-3和CA19-9表達情況與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的癌旁組織中的表達情況差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)(見表2)。Galectin-3抗原抗體復(fù)合物主要出現(xiàn)在細(xì)胞漿中，胞漿呈棕黃色、核呈淡藍色，堆積成癌巢； CA19-9抗原抗體復(fù)合物主要表現(xiàn)在細(xì)胞膜，被染成棕褐色，見圖1、2。

表1 Galectin-3、CA19-9在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移乳腺癌和有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移乳腺癌兩組的癌組織中的表達情況

表3 Galectin-3、CA19-9在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移乳腺癌和有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移乳腺癌兩組的癌旁組織中的表達情況

圖1Galectin-3陽性細(xì)胞為染色強度高于非特異性背景色的黃色顆粒的細(xì)胞(a),陰性細(xì)胞為無染色或與背景色(b)。

3 討論

圖2CA19-9陽性細(xì)胞為染色強度高于非特異性背景色的棕褐色的細(xì)胞(c)，陰性細(xì)胞為無染色或與背景色(d)。

乳腺癌是女性最常見的腫瘤之一。目前仍然是以手術(shù)為主的治療方式，臨床TNM分期不同，具體治療方式不同，因此早期診斷、預(yù)測是否有淋巴轉(zhuǎn)移有著重要的臨床意義。有研究表明Galectin-3參與多種抗凋亡作用，能夠阻止T細(xì)胞或者B細(xì)胞因抗Fas抗體引起的凋亡[6，7]。Galectin-3與腫瘤細(xì)胞的粘附、新生物血管形成有關(guān)，血管內(nèi)癌細(xì)胞的粘附在癌轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著重要作用， Galectin-3及糖介導(dǎo)的轉(zhuǎn)移細(xì)胞異型性和同型性的粘附，主要通過腫瘤特異性抗體TFAg實現(xiàn)[8]。Galectin-3通過誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞在體外形成毛細(xì)血管，體內(nèi)則誘導(dǎo)血管發(fā)生，這可能是由糖識別介導(dǎo)[9]。本研究的實驗數(shù)據(jù)顯示Galectin-3在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的癌組織中陽性表達率高于無轉(zhuǎn)移組，并且癌旁組織中也是同樣的結(jié)果，這表明Galectin-3可能參與乳腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。CA19-9作為腫瘤標(biāo)志物用于協(xié)助乳腺癌早期診斷為臨床廣泛應(yīng)用，本次研究數(shù)據(jù)表明CA19-9表達與乳腺癌的進展、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，有助于協(xié)助評估乳腺癌的預(yù)后。腫瘤的轉(zhuǎn)移是一種多因素多步驟的過程，Galectin-3、CA19-9的高表達對乳腺癌的侵襲及轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)性改變。本研究顯示乳腺癌中Galectin-3的表達情況可能與乳腺癌的惡性侵襲，以及促進乳腺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移有關(guān)，Galectin-3高表達可能與患者發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和預(yù)后有著密切的關(guān)系。同樣乳腺癌中CA19-9的表達情況也具有統(tǒng)計學(xué)意義，這表明CA19-9也可能與乳腺癌的進展、轉(zhuǎn)移以及預(yù)后有關(guān)。

[1]Yang RY,Hsu DK,Yu L,et al.Cell cycle regulation by galectin-12,a new member of the galectin superfamily [J].J Biol Chem,2001,276(23):20252.

[2]賈舉聞,付 崢,葛 麟.血清半乳凝素-3、糖類抗原153和腫瘤特異生長因子結(jié)合乳腺鉬靶X線對乳腺癌的早期診斷價值 [J].中國腫瘤臨床與康復(fù),2017,02:135.

[3]Lin TW,Chang HT,Chen CH,et al.Galectin-3 Binding Protein and Galectin-1 Interaction in Breast Cancer Cell [J].J Am Chem Soc,2015,137(30):9685.

[4]Shetty P,Bargale A,Patil BR,et al.Cell surface interaction of annexin A2 and galectin-3 modulates epidermal growth [J].Mol Cell Biochem,2016,411(1-2):221.

[5]周逸琴,張 杰,鄭玉平.CA153、CA199、CA125和FER在乳腺癌診斷中的價值[J].臨床和實驗醫(yī)學(xué)雜志,2014,01:53.

[6]Hoyer KK,Pang M,Gui D,et al.An anti-apoptotic role for galectin-3 in diffuse large B-cell lymphomas [J].Am J Pathol,2004,164(3):893.

[7]Yang RY,Hsu DK,Liu FT.Expression of galectin-3 modulates T-cell growth and apoptosis[J].Proc Natl Acad Sci U S A,1996,93(13):6737.

[8]Zou J,Glinsky VV,Landon LA,et al.Peptides specific to the galectin-3 carbohydrate recognition domain inhibit[J].Carcinogenesis,2005,26(2):309.

[9]Nangia-Makker P,Honjo Y,Sarvis R,et al.Galectin-3 induces endothelial cell morphogenesis and angiogenesis [J].Am J Pathol,2000,156(3):899.

CorrelationbetweenlymphnodemetastasisandtheexpressionofGalectin-3,CA19-9ofbreastcancerresearch

YANWen-zhen,DAIJing,TIANMeng,etal.

(GuangdongMedicalUniversitySchoolofNursing,Dongguan523808,China)

ObjectiveBy detecting breast tissue half HA-3 (Galectin-3,GAL-3),the expression of CA19-9,Galectin-3,CA19-9 correlation with lymph node metastasis in breast cancer research.Methods85 cases of surgical resection in patients with carcinoma of breast cancer:① Pathological diagnosis,staging routine serial sections HE staining.② Immunohistochemical detection of carcinoma and paracancerous tissue levels of Galectin-3,CA19-9;③ Combined with lymph node metastasis were compared.Results① Metastasis of cancer Galectin-3 and CA19-9 of lymph node metastasis carcinomas by gene expression differences change(P<0.05).② Metastasis lung tissue expression of Galectin-3,CA19-9 and free expression of metastasis of cancer also showed the difference changes(P<0.05).ConclusionThe invasion and lymph node metastasis of breast cancer and expression was a positive correlation between changes of Galectin-3 and CA19-9.

breast cancer;Galectin-3;CA19-9;lymph node metastasis;immunohistochemistry

廣東省社會發(fā)展領(lǐng)域科技計劃項目(20101096037)

*通訊作者

1007-4287(2017)09-1299-03

R737.9

：A

2017-01-20)