黃何何，黃永輝，王征，陳永煊

（福建省產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)研究院，福建 福州 350002）

快速溶劑萃取-氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定兒童用品中17種鄰苯二甲酸酯類環(huán)境雌激素*

黃何何，黃永輝，王征，陳永煊

（福建省產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)研究院，福建 福州 350002）

建立了采用快速溶劑萃取-氣相色譜/質(zhì)譜（ASE-GC-MS）測(cè)定兒童用品中17種鄰苯二甲酸酯類（PAEs）環(huán)境雌激素的含量的分析方法。樣品以正己烷為溶劑，在溫度為90℃條件下，使用ASE萃取，毛細(xì)管柱HP-5 MS（30m，0.25mm×0.25μm）分離，采用選擇離子（SIM）進(jìn)行定量分析。17 種環(huán)境雌激素在線性范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，且相關(guān)系數(shù)（r2）均大于0.99；方法的檢出限為：除鄰苯二甲酸二異壬酯為0.5 mg/kg，其余均為0.05 mg/kg，定量限：除鄰苯二甲酸二異壬酯為1.0 mg/kg，其余均為0.1 mg/kg，實(shí)際樣品加標(biāo)回收率范圍為77.8%～109.9%，方法的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=6）為1.1%～7.2%。該方法操作簡(jiǎn)單、靈敏度高、重現(xiàn)性好，適用于兒童用品中17種鄰苯二甲酸酯類（PAEs）環(huán)境雌激素的含量的分析測(cè)定。

快速溶劑萃取-氣相色譜/質(zhì)譜；鄰苯二甲酸酯；環(huán)境雌激素；兒童用品

環(huán)境雌激素類化合物( Environmental estrogens，EEs)是指一類具有雌激素作用的化合物，能模擬或干擾天然激素的生理、生化作用，對(duì)生物體產(chǎn)生各種毒效應(yīng)，包括干擾體內(nèi)正常內(nèi)分泌物質(zhì)的合成、釋放、運(yùn)輸、結(jié)合、代謝等過(guò)程，激活或抑制內(nèi)分泌系統(tǒng)的調(diào)控功能等。EEs主要包括：鄰苯二甲酸酯類（PAEs）、多氯聯(lián)苯類（PCBs，polychlorinated Biphenyls）、農(nóng)用化學(xué)品類（Agricultural Chemicals）、二噁英類（Diopxinlike chemicals）、雙酚類（BPs，Bisphenols）和烷基酚類等，這些化合物廣泛分布于生活環(huán)境中，而且會(huì)通過(guò)食物鏈在動(dòng)物和人體內(nèi)富集。極低濃度的環(huán)境雌激素就可能對(duì)動(dòng)物和人生殖系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)造成嚴(yán)重?fù)p害。EEs對(duì)兒童健康的潛在危害是可通過(guò)食物鏈或直接接觸等途徑進(jìn)入嬰幼兒體內(nèi)，干擾機(jī)體內(nèi)分泌系統(tǒng)的功能，及血漿中正常激素水平的維持，從而對(duì)機(jī)體生長(zhǎng)發(fā)育、腫瘤發(fā)生、神經(jīng)系統(tǒng)等產(chǎn)生多方面的影響。發(fā)育中的兒童對(duì)環(huán)境雌激素更具有易感性，其中泌尿生殖系統(tǒng)尤為明顯。研究人員發(fā)現(xiàn)含有PAEs的塑料玩具及兒童用品有可能被小孩放進(jìn)口中，如果放置的時(shí)間足夠長(zhǎng)，就會(huì)導(dǎo)致PAEs的溶出量超過(guò)安全水平，危害兒童的肝臟和腎臟，也可引起兒童性早熟[1]。

目前，對(duì)鄰苯二甲酸酯類化合物的測(cè)定方法主要有氣相色譜法[2-3]、氣相色譜-質(zhì)譜法[4-5]、液相色譜法[6-7]、液相色譜-質(zhì)譜法[8-9]等。而當(dāng)前采用ASE技術(shù)對(duì)兒童用品中PAEs類環(huán)境雌激素進(jìn)行分析測(cè)定的研究較少，鑒于環(huán)境雌激素對(duì)兒童的影響，文章針對(duì)兒童用品如奶嘴、奶瓶、兒童玩具等開展鄰苯二甲酸酯類環(huán)境雌激素含量測(cè)定方法的研究，研究成果將對(duì)我國(guó)兒童用品中環(huán)境雌激素檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)的建立提供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

氣相色譜-質(zhì)譜儀：Agilent GC-MS 5975（Agilent公司，美國(guó)）；Dionex-ASE-350 快速溶劑萃取儀（Termo公司，美國(guó)）；HP-5 MS（30m， 0.25mm×0.25μm）毛細(xì)管色譜柱；正己烷（Thermofisher，美國(guó)），色譜純。

17種PAEs混合標(biāo)準(zhǔn)溶液：鄰苯二甲酸二甲酯(DMP)、鄰苯二甲酸二乙酯(DEP)、鄰苯二甲酸二異丁酯(DIBP)、鄰苯二甲酸二丁酯(DBP)、鄰苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯(DMEP)、鄰苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯(BMPP)、鄰苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯(DEEP)、鄰苯二甲酸二戊酯(DPP)、鄰苯二甲酸二己酯(DHXP)、鄰苯二甲酸丁基芐基酯(BBP)、鄰苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯(DBEP)、鄰苯二甲酸二環(huán)己酯(DCHP)、鄰苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)、鄰苯二甲酸二苯酯、鄰苯二甲酸二正辛酯(DNOP)、鄰苯二甲酸二壬酯(DNP)、鄰苯二甲酸二異壬酯(DINP)均為1000 μg/mL（O2SI公司，美國(guó)）。

1.2 樣品前處理

1.2.1 準(zhǔn)確稱取5 g樣品至22 mL萃取池中，使用ASE進(jìn)行萃取。

1.2.2 ASE條件：

萃取溶劑：正己烷；壓力：1500 psi；溫度：90 ℃；靜態(tài)萃取時(shí)間：6 min；預(yù)加熱平衡時(shí)間：5 min；循環(huán)次數(shù)：2次。

萃取完成后，將提取液以正己烷定容至25 mL。

1.3 氣相色譜與質(zhì)譜條件

1.3.1 氣相色譜條件：色譜柱為HP-5 MS（30m，0.25mm×0.25μm）；進(jìn)樣口溫度250℃；柱溫：柱溫箱初始溫度為60℃，保持1min；以20℃/min升至220℃，保持1min；以5℃/min升至280℃，保持3min；進(jìn)樣方式：分流進(jìn)樣，分流流量5 mL/min，分流比為：5：1；進(jìn)樣量：1 μL；載氣：高純氦氣（99.999%），恒定流速：1 mL/min。

1.3.2 質(zhì)譜條件：電子轟擊離子源（EI源）；離子源電壓：70eV；離子源溫度：230℃；四級(jí)桿溫度：150℃；溶劑延遲7min；17種PAEs的保留時(shí)間、特征離子、定量離子信息見(jiàn)表1，17種PAEs混合標(biāo)準(zhǔn)溶液總離子流色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 17種PAEs總離子流色譜圖（TIC圖）

2 結(jié)果與討論

2.1 前處理方法的優(yōu)化

相較于傳統(tǒng)的索氏提取，采用快速溶劑萃取可以縮短分析周期，節(jié)約萃取溶劑。而影響ASE萃取效率的因素包括：萃取溶劑、溫度、壓力、時(shí)間等。研究選正己烷作為提取溶劑，設(shè)定萃取壓力為10.3Mpa，優(yōu)化了ASE萃取時(shí)間和萃取溫度。

2.1.1 萃取時(shí)間的優(yōu)化

取空白樣品進(jìn)行加標(biāo)平行實(shí)驗(yàn)，考察了不同靜態(tài)同萃取時(shí)間（2，4，6，8和10min）對(duì)PAEs萃取效率的影響，萃取效率對(duì)比圖見(jiàn)圖2。結(jié)果表明，隨著萃取時(shí)間的增加，萃取效率呈上升趨勢(shì)，但萃取時(shí)間為6min，8min，10min時(shí)，添加回收率無(wú)顯著差異。因此，選擇靜態(tài)萃取時(shí)間設(shè)定為6min。

表1 17種PAEs質(zhì)譜信息

表2 17種PAEs的線性方程、相關(guān)系數(shù)及靈敏度

2.1.2 萃取溫度的優(yōu)化

對(duì)空白樣品進(jìn)行加標(biāo)實(shí)驗(yàn)，考察不同溫度（60，70，80，90，100，110和120℃）對(duì)PAEs萃取效率的影響。結(jié)果表明，隨著溫度的升高，回收率也升高，當(dāng)溫度達(dá)到90℃時(shí)，17種PAEs的回收率均大于90%，溫度再升高，萃取效率沒(méi)有顯著提高，因此，設(shè)定90℃為萃取溫度。

圖2 不同靜態(tài)萃取時(shí)間的萃取效率

表3 空白樣品中17種PAEs加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.2 線性范圍和靈敏度

以濃度為1000 μg/L的17種PAEs混合標(biāo)準(zhǔn)溶液為母液，逐步稀釋成濃度為0.01、0.02、0.05、0.10、0.20、0.50、1.00、2.00、5.00 和10.0μg/mL系列溶液，在本文設(shè)定的GC-MS條件下運(yùn)行。方法的線性關(guān)系、檢出限和定量限結(jié)果見(jiàn)表2。結(jié)果表明，DINP在0.1～10.0 μg/mL，其余16種PAEs在0.01～10.0 μg/mL濃度范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)（r2）均大于0.99；DINP的檢出限和定量限分別為0.50mg/kg和1.00mg/kg，其余16種PAEs的檢出限均為0.05mg/kg，定量限為0.10mg/kg。

2.3 方法回收率及精密度

向空白樣品中添加不同濃度水平標(biāo)準(zhǔn)溶液，添加水平參照GB/T 27404-2008《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范食品理化檢測(cè)》要求進(jìn)行選擇，按照本研究方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，每個(gè)濃度做6個(gè)平行，并做空白對(duì)照，計(jì)算加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，17種PAEs回收率和精密度結(jié)果如表3所示。從表中可以看出，17種鄰苯二甲酸酯的回收率為77.8%-109.9%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為1.1%-7.2%，結(jié)果符合分析檢測(cè)的要求，本方法能夠準(zhǔn)確、精密地應(yīng)用于兒童用品中17種PAEs的檢測(cè)分析。

3 總結(jié)

研究建立了兒童用品中17種PAEs同時(shí)測(cè)定的ASE-GC-MS的分析方法。方法通過(guò)優(yōu)化ASE條件進(jìn)行前處理，采用正己烷提取目標(biāo)化合物后，毛細(xì)管柱HP-5 MS（30m， 0.25mm×0.25μm）分離，采用選擇離子（SIM）進(jìn)行定量分析。17種PAEs在線性范圍內(nèi)相關(guān)性良好，檢出限和定量限滿足檢測(cè)分析的要求。方法前處理簡(jiǎn)單，耗時(shí)少、成本低，提取效率較高，可應(yīng)用于兒童用品中17種PAEs的簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確的定性定量。

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O657.63

A

1007-550X（2017）01-0045-05

10.3969/j.issn.1007-550X.2017.01.003

福建省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局科技項(xiàng)目（FJQI2014037）

2016-12-07

黃何何（1987-），男，福建龍巖人，碩士研究生，主要從事食品檢測(cè)技術(shù)研究。