張 鑫，黃凌鷹，周振華，李 曼，高亞婷，孫學(xué)華，金樹根，高月求

上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院肝病科/細(xì)胞免疫實(shí)驗(yàn)室，上海 201203

慢性HBV感染者血清IL-15和外周血iNKT細(xì)胞水平變化及相關(guān)性研究

張 鑫，黃凌鷹，周振華，李 曼，高亞婷，孫學(xué)華，金樹根，高月求

上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院肝病科/細(xì)胞免疫實(shí)驗(yàn)室，上海 201203

目的探討慢性乙肝病毒(hepatitis B virus, HBV)感染者血清IL-15和外周血恒定自然殺傷T(invariant nature killer T， iNKT)細(xì)胞水平的變化。方法收集54例慢性HBV感染者和15名健康者外周血，分離血清和外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)；ELISA法檢測(cè)血清中IL-15水平；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)iNKT細(xì)胞占T細(xì)胞的比例，PMA、BFA和ionomycin處理PBMC后，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)iNKT分泌的IFN-γ和TNF-α水平，并利用Pearson法進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果與正常對(duì)照者相比，免疫清除期患者血清中IL-15水平明顯升高(P<0.05)，免疫耐受期患者高于正常對(duì)照者，低于免疫清除組，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；免疫清除期和免疫耐受期患者血清ALT水平和HBV DNA載量與IL-15水平無明顯相關(guān)性(P>0.05)。免疫清除期患者外周血iNKT細(xì)胞比例顯著降低，免疫耐受期患者略升高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。免疫耐受期和清除期患者外周血iNKT細(xì)胞分泌IFN-γ和TNF-α的細(xì)胞比例略有升高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。免疫耐受期和免疫清除期患者iNKT細(xì)胞分泌IFN-γ水平與IL-15水平呈正相關(guān)；免疫耐受期和免疫清除期患者iNKT細(xì)胞分泌TNF-α水平與IL-15水平無相關(guān)性(P>0.05)。結(jié)論慢性HBV感染者血清中IL-15水平升高，且外周血iNKT細(xì)胞數(shù)量減少，且不同感染狀態(tài)患者血清IL-15水平和外周血iNKT細(xì)胞數(shù)量呈動(dòng)態(tài)變化。

IL-15；慢性HBV感染；iNKT細(xì)胞

白細(xì)胞介素15(interleukin 15, IL-15)是一種多功能性的細(xì)胞因子，在各種細(xì)胞和組織中廣泛表達(dá)[1]。IL-15對(duì)自然殺傷(NK)、自然殺傷T(NKT)和CD8+T細(xì)胞的發(fā)育、活化、歸巢、生存和維持，在天然免疫和獲得性免疫中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)功能[2-4]。研究[5-7]表明,IL-15水平與慢性乙肝病毒(HBV)感染密切相關(guān)，IL-15可以通過IFN-β途徑抑制轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)HBV的復(fù)制[8]。iNKT細(xì)胞是NKT細(xì)胞的一重要亞群，在抗HBV復(fù)制中發(fā)揮重要的作用[9]，慢性HBV感染者外周血iNKT細(xì)胞分泌IFN-γ能力明顯下降，造成HBV感染的慢性化[10-11]；HBV轉(zhuǎn)基因鼠注射α-GalCer能促使NKT細(xì)胞活化并活化的NKT細(xì)胞有利于NK細(xì)胞表達(dá)IFN-γ而抑制HBV的復(fù)制[12]；為探討在HBV感染過程中，IL-15是否通過調(diào)節(jié)NKT細(xì)胞的功能發(fā)揮抗HBV作用。本研究觀察處于不同免疫時(shí)期的慢性HBV患者血清IL-15水平和外周血iNKT細(xì)胞數(shù)量及分泌細(xì)胞因子的能力，分析IL-15水平和iNKT細(xì)胞數(shù)量與其功能的相關(guān)性，為慢性HBV感染的治療提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1 研究對(duì)象：選取2013年3月-2014年6月上海曙光醫(yī)院肝病科門診收治的臨床確診的慢性HBV感染患者54例，其中免疫耐受期患者15例，男9例，女6例，年齡(30±11)歲(16～52歲)；免疫清除期患者39例，男28例，女11例，年齡(36±10)歲(18～59歲)。慢性HBV感染者的診斷符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)、感染病學(xué)分會(huì)聯(lián)合修訂的《慢性乙型肝炎防治指南(2010年版)》的標(biāo)準(zhǔn)，并排除有其他肝炎病毒感染、合并自身免疫性疾病、酒精性肝病、入組前6個(gè)月內(nèi)經(jīng)抗病毒和免疫抑制劑治療的患者。正常對(duì)照組15名，男11名，女4名，年齡(30±3)歲(27～35歲)。3組研究對(duì)象在年齡、性別間比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.1.2 主要試劑與儀器：淋巴細(xì)胞分離液(Cedarlane公司，加拿大)，IL-15 ELISA試劑盒(RD公司，美國)，CD3-PerCP-Cy5.5、IFN-γ-PE-Cy7、TNF-α-APC(eBioscience公司，美國)，TCRVα24-FITC、TCRVβ11-PE (Beckman公司，美國)，F(xiàn)ix&Perm cell permeabilization Kit(Invitrogen公司，美國)，PMA、ionomycin、BFA(Sigma-Aldrich公司，日本)，胎牛血清(Gibco公司，美國)。酶標(biāo)儀(BIO-RAD，美國)，F(xiàn)ACS ARIA流式細(xì)胞儀(BD公司，美國)。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 血清分離：取新鮮采集的促凝血3 ml，靜止30 min，3 000 r/min離心5 min，取上清，并按照60 μl分裝，置-80 ℃保存。

1.2.2 外周血單核細(xì)胞(PBMC)的分離：新鮮抽取的肝素鈉抗凝血4 ml和30 ml健康人濃縮白細(xì)胞懸液，用等體積生理鹽水稀釋后，緩慢加入到等體積的淋巴細(xì)胞分離的上層，800×g離心20 min；吸取中間的白膜層即單核細(xì)胞層，分別加PBS以800×g離心15 min和400×g離心5 min，留取沉淀即為PBMC。

1.2.3 ELISA法檢測(cè)IL-15的表達(dá)：按照IL-15 ELISA試劑盒的說明書，檢測(cè)所有研究對(duì)象血清中IL-15的含量。

1.2.4 外周血iNKT細(xì)胞及其分泌的細(xì)胞因子IFN-γ和TNF-α：400 μl PBMC懸液中加入PMA(1∶100)10 μl，BFA(1∶10)8 μl和Ionomycin(1∶20)8 μl置培養(yǎng)箱孵育4 h，PBMC清洗離心，100 μl PBS重懸后加入CD3-PerCP-Cy5-5 5 μl、TCRVα24-FITC 5 μl、TCRVβ11-PE 5 μl室溫避光孵育30 min；固定、破膜后100 μl PBS重懸細(xì)胞，加入IFN-γ-PE-Cy7 5 μl、TNFα-APC 5 μl室溫避光孵育30 min，PBS清洗后，加入400 μl PBS重懸細(xì)胞上機(jī)檢測(cè)。

2 結(jié)果

2.1不同免疫分期慢性HBV感染者血清IL-15水平慢性HBV感染者IL-15水平明顯高于正常對(duì)照者(P<0.05，見圖1A)。免疫清除期患者IL-15水平均明顯高于正常對(duì)照者(P<0.05，見圖1B)；免疫耐受期患者IL-15水平高于正常對(duì)照者，低于免疫清除期患者IL-15水平，但差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.2不同免疫分期慢性HBV感染者PBMC中iNKT細(xì)胞及其分泌細(xì)胞因子的水平流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)不同免疫分期患者外周血iNKT細(xì)胞和分泌細(xì)胞因子的水平，圖2A顯示慢性HBV患者外周血iNKT細(xì)胞占CD3+T細(xì)胞的比例低于正常對(duì)照組，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。圖2B顯示免疫耐受期患者iNKT細(xì)胞比例高于正常對(duì)照組，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；免疫清除期患者iNKT細(xì)胞比例顯著低于正常對(duì)照組和免疫耐受期患者(P<0.05)。圖2C、2D顯示，不同免疫分期患者和正常對(duì)照組經(jīng)PMA刺激后分泌IFN-γ和TNF-α的iNKT細(xì)胞占iNKT細(xì)胞的比例，免疫清除期患者高于正常對(duì)照組，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；免疫耐受期患者比例高于正常對(duì)照組和免疫清除期患者，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

圖1各組血清IL-15水平比較A：正常對(duì)照者與慢性HBV感染者；B：正常對(duì)照組與不同免疫分期患者

Fig1ComparisonofserumIL-15levelsineachgroupA: healthy controls and chronic hepatitis B virus infection patients; B: healthy controls and patients with different immune stages

圖2各組患者PBMC中iNKT細(xì)胞及其分泌細(xì)胞因子的水平比較A：iNKT細(xì)胞占CD3+T細(xì)胞比例； B： IFN-γ+及TNF-α+iNKT占iNKT細(xì)胞的比例

Fig2ComparisonoflevelsofiNKTcellsandtheirsecretorycytokinesinPBMCineachgroupA: the ratio of iNKT cell accounted for CD3+T cells; B: the ratio of IFN-γ+and TNF-α+accounted for iNKT cells

2.3不同免疫分期慢性HBV感染者血清ALT水平和HBVDNA載量與IL-15水平的相關(guān)性由圖3可知，免疫耐受期和免疫清除期患者血清ALT水平和HBV DNA載量與IL-15水平無明顯相關(guān)性(P>0.05)。

圖3不同免疫分期慢性HBV感染者血清ALT水平和HBVDNA載量與IL-15水平的相關(guān)性A：患者血清ALT水平與IL-15水平；B：患者血清HBV DNA載量與IL-15水平

Fig3CorrelationanalysisofALTlevelsandHBVDNAloadandIL-15levelsinserumofpatientswithdifferentimmunestagesA: ALT and IL-15 levels; B: HBV DNA load and IL-15 levels

2.4不同免疫分期慢性HBV感染者外周血iNKT細(xì)胞數(shù)量與IL-15水平的相關(guān)性由圖4可知，免疫耐受期和免疫清除期患者iNKT細(xì)胞占CD3+T細(xì)胞的百分比與IL-15水平無明顯相關(guān)性(P>0.05)。

圖4不同免疫分期慢性HBV感染者外周血iNKT細(xì)胞數(shù)量與IL-15水平的相關(guān)性A：免疫耐受期患者；B：免疫清除期患者

Fig4CorrelationanalysisoftheiNKTcellnumberandIL-15levelsinpatientswithdifferentimmunestagesA: immune tolerance; B: immune clearance

2.5不同免疫分期慢性HBV感染者外周血iNKT細(xì)胞分泌IFN-γ和TNF-α水平與IL-15水平的相關(guān)性由圖5可知，免疫耐受期和免疫清除期患者iNKT細(xì)胞分泌IFN-γ水平與IL-15水平呈正相關(guān)(P<0.05)。免疫耐受期患者iNKT細(xì)胞分泌TNF-α水平與IL-15水平呈正相關(guān)(P<0.05)，免疫清除期患者NKT細(xì)胞分泌TNF-α水平與IL-15水平無明顯相關(guān)性(P>0.05)。

3 討論

IL-15是一種重要的抗病毒細(xì)胞因子，能直接或間接促進(jìn)NK、NKT和T細(xì)胞的IFN-γ和TNF-α分泌，增強(qiáng)其抗病毒活性[13-15]。有研究[5]表明，免疫清除期患者肝組織中IL-15 mRNA和蛋白水平均顯著高于免疫耐受期和正常對(duì)照，急性肝炎、慢性肝炎中度和重度、慢性重型肝炎患者血清中IL-15水平顯著高于正常對(duì)照者[6]。本研究通過ELISA法檢測(cè)不同免疫分期的慢性HBV感染者和正常對(duì)照血清中IL-15水平，發(fā)現(xiàn)免疫清除期患者IL-15水平顯著高于正常對(duì)照者和免疫耐受期患者，尚未發(fā)現(xiàn)IL-15的水平與HBV DNA載量和ALT水平有顯著相關(guān)性，與前期研究結(jié)果一致。

圖5不同免疫分期慢性HBV感染者外周血IFN-γ+iNKT和TNF-α+iNKT細(xì)胞占iNKT細(xì)胞的百分比與IL-15水平的相關(guān)性分析A：患者IFN-γ+iNKT占iNKT細(xì)胞的百分比與IL-15水平；B：患者TNF-α+iNKT占iNKT細(xì)胞的百分比與IL-15水平

Fig5CorrelationanalysisbetweenthepercentageofIFN-γ+iNKTandTNF-α+iNKTcellsiniNKTcellandIL-15levelsofpatientswithdifferentimmunestagesA: the percentage of IFN-γ+iNKT and IL-15 levels; B: the percentage of TNF-α+iNKT and IL-15 levels

iNKT細(xì)胞是一種同時(shí)具有NK細(xì)胞和T細(xì)胞部分表型及功能的細(xì)胞亞群，廣泛分布于肝、骨髓、脾和外周血中，既能增強(qiáng)又能抑制免疫反應(yīng)，在抗腫瘤、抗感染、抑制自身免疫性疾病和移植耐受中起重要作用。不同iNKT細(xì)胞亞群分泌的細(xì)胞因子不同，CD4+iNKT細(xì)胞可分泌IL-4、IL-13、TNF-α等Th2樣的細(xì)胞因子，CD4-CD8-iNKT和CD8+iNKT細(xì)胞可分泌IFN-γ等Th1樣的細(xì)胞因子，發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)功能[16]。iNKT細(xì)胞的活化能分泌IFN-γ/α/β，抑制HBV的復(fù)制有效清除HBV，同時(shí)活化的iNKT細(xì)胞分泌的IFN-γ可激活NK細(xì)胞分泌更多的細(xì)胞因子，從而動(dòng)員后續(xù)的適應(yīng)性免疫細(xì)胞分泌大量細(xì)胞因子，造成肝臟內(nèi)淋巴細(xì)胞浸潤，導(dǎo)致肝細(xì)胞損傷[17]。本研究發(fā)現(xiàn)，免疫清除期患者外周血iNKT細(xì)胞占T細(xì)胞的比例(0.1%)顯著低于正常對(duì)照者(0.3%)，但PMA刺激后分泌IFN-γ和TNF-α的能力與正常對(duì)照者比較無明顯差異；de Lalla等[18]報(bào)道免疫清除期患者iNKT細(xì)胞占T細(xì)胞的比例為0.09%，正常對(duì)照者為0.2%，與本研究結(jié)果一致；Jiang等[19]研究結(jié)果也與本研究一致。de Lalla等[18]研究也表明，慢性HBV和HCV感染者外周血和肝內(nèi)iNKT細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ、IL-4和IL-13的能力與正常對(duì)照相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，伴有肝硬化患者的iNKT細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的能力增強(qiáng)。由此可見，HBV慢性感染的過程中，外周血iNKT細(xì)胞比例是動(dòng)態(tài)變化的，免疫耐受期高滴度的HBV DNA刺激iNKT細(xì)胞增殖[20]導(dǎo)致外周血iNKT細(xì)胞比例高于正常對(duì)照，隨著免疫的激活，外周iNKT細(xì)胞在肝內(nèi)炎癥因子作用下趨化入肝，使高病毒載量的免疫清除期患者外周血iNKT細(xì)胞的比例下降，而病毒復(fù)制、肝內(nèi)炎癥得到控制后iNKT細(xì)胞又逐步恢復(fù)至正常水平；在此過程中外周血iNKT細(xì)胞分泌IFN-γ和TNF-α的能力并未受到影響。

本研究表明，免疫清除期患者外周血中iNKT細(xì)胞的比例降低，除了肝內(nèi)炎癥因子趨化iNKT細(xì)胞入肝外，還有什么原因?qū)е耰NKT細(xì)胞比例降低？IL-15能促進(jìn)胸腺NKT細(xì)胞前體細(xì)胞向終末效應(yīng)NKT細(xì)胞分化，IL-15基因缺陷可導(dǎo)致成熟NKT細(xì)胞功能低下[21]；腫瘤動(dòng)物模型中NKT細(xì)胞功能低下，體內(nèi)過表達(dá)IL-15能顯著提高NKT細(xì)胞抗腫瘤活性[22]，表明IL-15在NKT細(xì)胞效應(yīng)功能獲得和恢復(fù)中起重要作用。故推測(cè)免疫清除期患者外周血中iNKT細(xì)胞比例的降低及分泌IFN-γ和TNF-α的能力與血清中IL-15水平升高有相關(guān)性。通過分析慢性HBV患者血清中IL-15水平和外周血iNKT細(xì)胞數(shù)及分泌細(xì)胞因子能力的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)IL-15水平與免疫耐受期患者和免疫清除期患者iNKT細(xì)胞比例無明顯相關(guān)性，與免疫耐受期和免疫清除期患者iNKT細(xì)胞分泌IFN-γ水平呈正相關(guān)，與免疫耐受期患者iNKT細(xì)胞分泌TNF-α水平正相關(guān)，與免疫清除期患者NKT細(xì)胞分泌TNF-α水平無相關(guān)性。由此可見，慢性HBV患者可能通過IL-15水平的升高負(fù)反饋機(jī)制來抑制iNKT細(xì)胞的增殖，并維持iNKT細(xì)胞分泌IFN-γ和TNF-α的能力，從而抑制HBV復(fù)制，但I(xiàn)L-15對(duì)iNKT細(xì)胞增殖、殺傷能力的影響及在HBV感染中的作用有待于進(jìn)一步的研究。

[1] Fehniger TA, Caligiuri MA. Interleukin 15: biology and relevance to human disease [J]. Blood, 2001, 97(1): 14-32.

[2] Dadi S, Chhangawala S, Whitlock BM, et al. Cancer immunosurveillance by tissue-resident innate lymphoid cells and innate-like T cells [J]. Cell, 2016, 164(3): 365-377.

[3] Hromadnikova I, Li S, Kotlabova K, et al. Influence of in vitro IL-2 or IL-15 alone or in combination with Hsp 70 derived 14-Mer peptide (TKD) on the expression of NK cell activatory and inhibitory receptors on peripheral blood T cells, B cells and NKT cells [J]. PLoS One, 2016, 11(3): e0151535.

[4] Kitayama S, Zhang R, Liu TY, et al. Cellular adjuvant properties, direct cytotoxicity of re-differentiated Vα24 invariant NKT-like cells from human induced pluripotent stem cells [J]. Stem Cell Reports, 2016, 6(2): 213-227.

[5] Zhang Z, Zhang S, Zou Z, et al. Hypercytolytic activity of hepatic natural killer cells correlates with liver injury in chronic hepatitis B patients [J]. Hepatology, 2011, 53(1): 73-85.

[6] 蘇智軍, 莊建良, 郭如意, 等. 乙型肝炎不同白介素細(xì)胞因子的檢測(cè)及其意義[J]. 中國實(shí)用內(nèi)科雜志, 2006, 26(23): 1881-1883. Su ZJ, Zhuang JL, Guo RY, et al. Detection of serum interleukin-10, interleukin-13, interleukin-15 levels in patients with viral hepatitis B and their significance [J]. Chinese Journal of Practical Internal Medicine, 2006, 26(23): 1881-1883.

[7] 劉佩芝, 唐先梅. 慢性乙型肝炎患者血清白細(xì)胞介素15的檢測(cè)及其意義[J]. 醫(yī)學(xué)理論與實(shí)踐, 2007, 20(9): 1017-1019. Liu PZ, Tang XM. The significance of detection of interleukin-15 in serum from patients with chronic hepatitis B [J]. J Med Theor & Prac, 2007, 20(9): 1017-1019.

[8] Yin W, Xu L, Sun R, et al. Interleukin-15 suppresses hepatitis B virus replication via IFN-β production in a C57BL/6 mouse model [J]. Liver Int, 2012, 32(8): 1306-1314.

[9] Lawrenczyk A, Kim S, Wen X, et al. Exploring the therapeutic potentials of iNKT cells for anti-HBV treatment [J]. Pathogens, 2014, 3(3): 563-576.

[10] Ishikawa S, Ikejima K, Yamagata H, et al. CD1d-restricted natural killer T cells contribute to hepatic inflammation and fibrogenesis in mice [J]. J Hepatol, 2011, 54(6): 1195-1204.

[11] Woltman AM, Ter Borg MJ, Binda RS, et al. Alpha-galactosylceramide in chronic hepatitis B infection: results from a randomized placebo-controlled Phase I/II trial [J]. Antivir Ther, 2009, 14(6): 809-818.

[12] Kakimi K, Guidotti LG, Koezuka Y, et al. Natural killer T cell activation inhibits hepatitis B virus replication in vivo [J]. J Exp Med, 2000, 192(7): 921-930.

[13] Tan AT, Hoang LT, Chin D, et al. Reduction of HBV replication prolongs the early immunological response to IFNα therapy [J]. J Hepatol, 2014, 60(1): 54-61.

[14] Verbist KC, Klonowski KD. Functions of IL-15 in anti-viral immunity: multiplicity and variety [J]. Cytokine, 2012, 59(3): 467-478.

[15] Ali AK, Nandagopal N, Lee SH. IL-15-PI3K-AKT-mTOR: a critical pathway in the life journey of natural killer cells [J]. Front Immunol, 2015, 6: 355.

[16] Baev DV, Peng XH, Song L, et al. Distinct homeostatic requirements of CD4+and CD4-subsets of Valpha24-invariant natural killer T cells in humans [J]. Blood, 2004, 104(13): 4150-4156.

[17] Trobonjaca Z, Kr?ger A, Stober D, et al. Activating immunity in the liver. II. IFN-beta attenuates NK cell-dependent liver injury triggered by liver NKT cell activation [J]. J Immunol, 2002, 168(8): 3763-3770.

[18] de Lalla C, Galli G, Aldrighetti L, et al. Production of profibrotic cytokines by invariant NKT cells characterizes cirrhosis progression in chronic viral hepatitis [J]. J Immunol, 2004, 173(2): 1417-1425.

[19] Jiang X, Zhang M, Lai Q, et al. Restored circulating invariant NKT cells are associated with viral control in patients with chronic hepatitis B [J]. PLoS One, 2011, 6(12): e28871.

[20] Brennan PJ, Tatituri RV, Brigl M, et al. Invariant natural killer T cells recognize lipid self antigen induced by microbial danger signals [J]. Nat Immunol, 2011, 12(12): 1202-1211.

[21] Gordy LE, Bezbradica JS, Flyak AI, et al. IL-15 regulates homeostasis and terminal maturation of NKT cells [J]. J Immunol, 2011, 187(12): 6335-6345.

[22] Liu D, Song L, Wei J, et al. IL-15 protects NKT cells from inhibition by tumor-associated macrophages and enhances antimetastatic activity [J]. J Clin Invest, 2012, 122(6): 2221-2233.

(責(zé)任編輯：王全楚)

Changes and correlation analysis of the levels of IL-15and iNKT in patients with chronic hepatitis B virus infection

ZHANG Xin, HUANG Lingying, ZHOU Zhenhua, LI Man, GAO Yating, SUN Xuehua, JIN Shugen, GAO Yueqiu

Department of Hepatology, Laboratory of Cellular Immunity, Shuguang Hospital Affiliated to Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 201203, China

ObjectiveTo investigate the changes and correlation analysis of serum levels of interleukin-15 (IL-15) and invariant nature killer T (iNKT) in patients with chronic hepatitis B virus (HBV) infection.MethodsSerum and peripheral blood mononuclear cells (PBMC) were isolated from 54 patients with chronic HBV infection and 15 healthy subjects. The serum IL-15 level was determined by ELISA. The ratio of iNKT cells in T cell was detected by flow cytometry. The expressions of intracellular IFN-γ and TNF-α in iNKT cells were analyzed by flow cytometry after the treatment with PMA, BFA and ionomycin in vitro. The relationship between the IL-15 level and the iNKT rate was analyzed by Pearson correlation analysis.ResultsCompared with the normol control group (P<0.05), the expression of IL-15 was elevated in serum of immune clearance phase (P<0.05). Compared with immune clearance phase, the expression of IL-15 was reduced in serum of immune tolerance phase (P>0.05). There was no significant correlation between the ALT, HBV DNA level and IL-15 level in immune clearance phase and immune tolerance phase (P>0.05). Compared with the normol control group, the expression of iNKT was elevated in PBMC of immune tolerance phase and reduced in PBMC of immune clearance phase. Compared with immune tolerance phase, the expression of iNKT was reduced in PBMC of immune clearance phase. Compared with normol control group, the expressions of IFN-γ+and TNF-α+iNKT were slight elevated in PBMC of immune tolerance phase and immune clearance phase, but no significant differences. Compared with immune tolerance phase, the expressions of IFN-γ+and TNF-α+iNKT were slight elevated in PBMC of immune clearance phase, but no significant differences (P>0.05). There was positive correlation between IFN-γ+iNKT and IL-15 level and there was no significant correlation between TNF-α+iNKT and IL-15 level in immune clearance phase and immune tolerance phase.ConclusionThe level of IL-15 in serum there is elevated and the number of iNKT cells of peripheral blood reduce in chronic HBV infection patients, and a dynamic changes trend between them in different immune phase.

Interleukin 15; Chronic hepatitis B virus infection; iNKT

10.3969/j.issn.1006-5709.2017.09.014

R512.6+2

：A

：1006-5709(2017)09-1016-06

：2016-10-27

國家自然科學(xué)基金(81403237；81473477；81403354；81473629；81403351；81503545；81673938；81673767)；國家“艾滋病和病毒性肝炎等重大傳染病防治”科技重大專項(xiàng)(2012ZX10005004-002)；上海市中醫(yī)藥事業(yè)發(fā)展三年行動(dòng)計(jì)劃項(xiàng)目(ZY3-LCPT-1-1001，ZY3-CCCX-3-3027)；上海市科委揚(yáng)帆計(jì)劃(15YF1412300)；上海申康市級(jí)醫(yī)院新興前沿技術(shù)聯(lián)合攻關(guān)項(xiàng)目(SHDC12016121)；上海市衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)科研項(xiàng)目(20144Y0141)

張?chǎng)?，助理研究員，研究方向：慢性肝病易感基因及其免疫機(jī)制。E-mail：zhangxin68619@163.com

高月求，主任醫(yī)師，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向：慢乙肝免疫機(jī)制及中藥調(diào)控。E-mail：gaoyueqiu@hotmail.com