孫宇

摘 要：目的：對(duì)口腔潰瘍膜里面具有的松含量手段進(jìn)行了檢測(cè)。方法：實(shí)驗(yàn)人員利用高效液相色譜法來對(duì)口腔潰瘍膜里面具有的松含量進(jìn)行檢測(cè)的，色譜柱是SinochromODS-BP柱，流動(dòng)相作為乙腈-水（50∶50），檢測(cè)波長(zhǎng)設(shè)置為245nm，產(chǎn)生的流速是1.0mL·min-1的范圍，進(jìn)樣量控制在10μL左右。結(jié)果：氫化可存在的松進(jìn)樣量控制在0.2092～1.5690μg的范圍里面都會(huì)和鋒面面積分值處于良好的狀態(tài)（r=0.9999）；在高處的回收率是102.8%（RSD=1.59%）、在中處得到的回收率是102.4%（RSD=1.35%）、低處得到的回收率是102.9%（RSD=0.77%）。結(jié)論：實(shí)驗(yàn)人員采取該方法有著諸多的優(yōu)勢(shì)，例如操作簡(jiǎn)單、得到的結(jié)果具有準(zhǔn)確性等，值得大力的推廣。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法；口腔潰瘍膜；氫化可的松；含量測(cè)定

通常情況下，氫化可的松屬于激素類藥物之一，有著諸多的優(yōu)點(diǎn)，例如起到抗炎的作用，達(dá)到抗休克的效果，經(jīng)常使用到腎上腺皮質(zhì)功能減退癥較為適合，在相關(guān)領(lǐng)域得到了普遍的認(rèn)可。因?yàn)榭谇粷兡ぴ谠撫t(yī)院的制劑室中進(jìn)行制備的，可以實(shí)現(xiàn)消炎的目的，達(dá)到止痛的效果，對(duì)患者存在的口腔潰瘍可以起到治療的作用。該制劑是在1990年期間記載的，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)當(dāng)中不涵蓋含量測(cè)量這一項(xiàng)。為了對(duì)該制劑的質(zhì)量做好科學(xué)的控制，筆者需要使用了高效液相色譜法（HPLC）來對(duì)口腔潰瘍膜中氫化可具有的松含量進(jìn)行檢測(cè)得到幾點(diǎn)結(jié)論，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 試驗(yàn)準(zhǔn)備和方法

1.1 儀器與試藥

600HPLC系統(tǒng)、2996二極管陣列檢測(cè)器、717plus自動(dòng)進(jìn)樣器、Empower數(shù)據(jù)管理系統(tǒng)；十萬分之一電子天平；萬分之一電子天平；超聲波清洗儀；超純水器。

氫化可的松對(duì)照品；口腔潰瘍膜；甲醇、乙腈為色譜純，水為超純水。

1.2 色譜條件

色譜柱：SinochromODS-BP柱（250mm×4.6mm，5um）；流動(dòng)相：乙腈-水（50∶50）；檢測(cè)波長(zhǎng)：245nm；流速：1.0mL·min-1；柱溫：25℃；進(jìn)樣量：10μL。

1.3 溶液的制備

1.3.1 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取氫化可的松對(duì)照品52.3mg，置于100mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成氫化可的松對(duì)照品貯備液（氫化可的松濃度為0.5230mg·mL-1）。精密量取對(duì)照品貯備液5mL，置于25mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成氫化可的松對(duì)照品供試液（氫化可的松濃度為0.1046mg·mL-1）。

1.3.2 供試品溶液的制備

取口腔潰瘍膜5片（約相當(dāng)于氫化可的松9.25mg），置于100mL容量瓶中，加甲醇適量，超聲處理30min，放冷至室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得（氫化可的松濃度為0.0925mg·mL-1）。

1.3.3 線性關(guān)系考察

取氫化可的松對(duì)照品溶液（0.1046mg·mL-1），經(jīng)針頭過濾器過濾后進(jìn)樣，在軟件內(nèi)設(shè)置使自動(dòng)進(jìn)樣器將樣品按2、4、8、10、12、15？滋L的體積依次進(jìn)樣，記錄色譜圖。以峰面積（A）為縱坐標(biāo)，氫化可的松對(duì)照品進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，擬合回歸方程，得A=2.70×106X+1.67×104，r=0.999964。結(jié)果表明，氫化可的松進(jìn)樣量在0.2092～1.5690μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。

1.4 精密度試驗(yàn)

取氫化可的松對(duì)照品溶液（0.1046mg·mL-1）進(jìn)樣，每次進(jìn)樣10μL，重復(fù)進(jìn)樣6次。結(jié)果，RSD=0.30%，說明精密度良好。

1.5 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批樣品（批號(hào)：20100412）適量，共6份，按擬定的含量測(cè)定方法制備供試品溶液，按“1.2”項(xiàng)下方法測(cè)定供試品溶液和對(duì)照品溶液的峰面積，計(jì)算氫化可的松的含量。結(jié)果，樣品中氫化可的松的平均標(biāo)示百分含量為101.2%，RSD=1.77%（n=6），表明本法重復(fù)性良好。

1.6 樣品含量測(cè)定

實(shí)驗(yàn)人員取一定數(shù)量的口腔潰瘍膜，并依據(jù)1.3.2中采取的方法對(duì)溶液進(jìn)行制備，并依據(jù)1.1中的方法來對(duì)以下兩種溶液進(jìn)行提?。阂环N是供試品溶液；另一種是對(duì)照品溶液，實(shí)驗(yàn)人員需要將這兩種溶液注入到HPLC中，對(duì)得到的色譜圖進(jìn)行認(rèn)真記載，并將含量計(jì)算出來。得到的結(jié)果為：第一批羊皮陪你的含量是106.5%（RSD=0.42%）；第二批樣品的含量是107.2%（RSD=0.19%）、第三批樣品的含量是91.3%（RSD=0.25%）。

2 結(jié)果

取陰性供試品溶液9份，分別精密加入氫化可的松對(duì)照品貯備液（0.5230mg·mL-1）4.0、5.0、6.0mL，高、中、低濃度平行3份；按“2.2.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，按“1.2”項(xiàng)下方法進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

3 討論

通過以上內(nèi)容的論述，可以得到以下幾點(diǎn)結(jié)論：實(shí)驗(yàn)人員在對(duì)氫化可的松及其制劑中含有的成分進(jìn)行檢測(cè)的時(shí)候，主要采取以下幾種方法：第一種是紫外分光光度法；第二種是HPLC法。筆者依據(jù)相關(guān)藥典對(duì)氫化可的松含量測(cè)定手段來看，利用HPLC法對(duì)口腔潰瘍膜里面含有的氫化可的松數(shù)量進(jìn)行認(rèn)真的檢測(cè)有著顯著的效果，并且樣品在預(yù)處理的時(shí)候也較為簡(jiǎn)單。

由于氫化可的松無論是在乙醇當(dāng)中還是在丙酮當(dāng)中都處于略溶的狀態(tài)，但是在水中卻保持不變。這個(gè)時(shí)候筆者依據(jù)我國相關(guān)藥典記載中對(duì)氫化可的松含量的測(cè)定手段來看，實(shí)驗(yàn)人員可以直接使用甲醇當(dāng)作相應(yīng)的提取溶媒。通過一系列試驗(yàn)可以得知，甲醇能夠?qū)⒃撍幤啡芙獾?，與此同時(shí)因?yàn)樵诳谇粷兡ぶ写嬖诘拇蟛糠治镔|(zhì)通過是水溶性基質(zhì)，實(shí)驗(yàn)人員利用甲醇將口腔潰瘍膜里面存在的樣品氫化可的松含量進(jìn)行提取的過程中，因?yàn)橐氲碾s質(zhì)不多，所以會(huì)對(duì)色譜柱不會(huì)帶來不利影響。

總而言之，實(shí)驗(yàn)人員在對(duì)色譜條件及其系統(tǒng)進(jìn)行相關(guān)試驗(yàn)的過程中，需要使用甲醇-水（70∶30）做好相應(yīng)的試驗(yàn)工作，這個(gè)時(shí)候發(fā)現(xiàn)了在口腔潰瘍膜里面含有的基質(zhì)是和主藥氫化可的松處于不分離的狀態(tài)，這樣會(huì)在某種程度上導(dǎo)致氫化可的松主峰出現(xiàn)了拖尾的情況。這個(gè)時(shí)候筆者參考了相關(guān)文獻(xiàn)資料，將以往的甲醇-水（70∶30）替換成乙腈-水（50∶50）當(dāng)作相應(yīng)的流動(dòng)相，并利用相關(guān)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)可以清楚的了解到，在試驗(yàn)的環(huán)境下基線處于平穩(wěn)的狀態(tài)，氫化可的松能夠和雜質(zhì)峰分離度處于良好的狀態(tài)，產(chǎn)生的雜質(zhì)對(duì)其檢測(cè)工作不會(huì)產(chǎn)生不利影響，并且柱效高，形成的峰形也達(dá)到了預(yù)期目的。所以實(shí)驗(yàn)人員使用乙腈-水（50∶50）當(dāng)作相關(guān)流動(dòng)相。依據(jù)上述論述可以看出，采取該方法有著諸多的優(yōu)點(diǎn)，例如操作簡(jiǎn)單、得到的結(jié)果具有準(zhǔn)確性等，值得大力的推廣。

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