劉定輝， 吳 琳， 余舒杰， 周 彬， 王 敏， 劉 勇， 郝寶順， 鄭振達(dá)， 錢孝賢, 2△

(中山大學(xué) 1附屬第三醫(yī)院心血管內(nèi)科， 2中西醫(yī)結(jié)合研究所， 廣東 廣州 510630)

Rb1延緩人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞早熟性衰老與caveolin-1表達(dá)的關(guān)系*

劉定輝1， 吳 琳1， 余舒杰1， 周 彬1， 王 敏1， 劉 勇1， 郝寶順1， 鄭振達(dá)1， 錢孝賢1, 2△

(中山大學(xué)1附屬第三醫(yī)院心血管內(nèi)科，2中西醫(yī)結(jié)合研究所， 廣東 廣州 510630)

目的： 血管內(nèi)皮細(xì)胞衰老是動脈粥樣硬化發(fā)生的病理生理機(jī)制之一。本研究旨在探討人參皂苷Rb1延緩人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)早熟性衰老與窖蛋白1(caveolin-1)表達(dá)的關(guān)系，為延緩HUVECs衰老提供新的靶點(diǎn)。方法: 建立60 μmol/L過氧化氫(H2O2)誘導(dǎo)的HUVECs早熟性衰老模型，根據(jù)細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化、衰老相關(guān)β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色陽性率和細(xì)胞周期評估內(nèi)皮細(xì)胞衰老，采用Western blot和激光共聚焦顯微成像的方法檢測caveolin-1的變化，觀察人參皂苷Rb1對HUVECs衰老的作用及其相關(guān)的分子機(jī)制。結(jié)果: 60 μmol/L H2O2可成功地誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞衰老，早熟性衰老的HUVECs體積變大，SA-β-Gal活性明顯增加，細(xì)胞發(fā)生G1期阻滯，細(xì)胞增殖受抑制，caveolin-1表達(dá)增多。與H2O2處理組相比，人參皂苷Rb1預(yù)處理延緩HUVECs早熟性衰老，SA-β-Gal染色陽性細(xì)胞百分比降低，G0/G1期細(xì)胞比例下降，caveolin-1表達(dá)減少。結(jié)論: 人參皂苷Rb1可通過抑制caveolin-1的表達(dá)延緩H2O2誘導(dǎo)的HUVECs早熟性衰老。

細(xì)胞衰老； 窖蛋白1； 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞； 人參皂苷Rb1

細(xì)胞衰老是生命體中普遍存在的一種壓力和損傷反應(yīng)現(xiàn)象，表現(xiàn)為不可逆的增殖停滯，其可分為兩大類：復(fù)制性衰老和壓力誘導(dǎo)的早熟性衰老。氧化應(yīng)激可誘導(dǎo)早熟性衰老[1]。其中，內(nèi)皮細(xì)胞衰老呈現(xiàn)出促炎、促血栓形成、促動脈粥樣硬化的表型，在增齡相關(guān)性血管疾病如動脈粥樣硬化的發(fā)病中發(fā)揮重要作用[2]。因此，深入探討內(nèi)皮細(xì)胞衰老的機(jī)制有助于為增齡相關(guān)性血管疾病治療提供新視角、新靶點(diǎn)。

胞膜窖是細(xì)胞質(zhì)膜內(nèi)陷形成的一種特異性結(jié)構(gòu)。在大部分細(xì)胞，窖蛋白1(caveolin-1)是胞膜窖的主要結(jié)構(gòu)蛋白成分，在調(diào)節(jié)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中起重要作用[1]。目前文獻(xiàn)報道caveolin-1在衰老中發(fā)揮重要作用。有研究發(fā)現(xiàn)，在氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的成纖維細(xì)胞早熟性衰老模型中，caveolin-1通過抑制Sirt1從而促進(jìn)P53依賴的早熟性衰老并刺激IL-6的分泌[1]。但caveolin-1在內(nèi)皮細(xì)胞衰老中的作用研究尚不多見。

目前有部分報道阿司匹林、他汀、白藜蘆醇等對內(nèi)皮細(xì)胞衰老有一定的防治作用[3-5]。人參是我國常見的中草藥之一，具有“久服輕身延年”的作用。人參皂苷是人參發(fā)揮藥理學(xué)作用的主要成分，其中人參皂苷Rb1(ginsenoside Rb1，Rb1)是人參皂苷的主要活性單體。有研究發(fā)現(xiàn)Rb1可通過抗氧化應(yīng)激對內(nèi)皮衰老有一定的作用[6]，但Rb1對caveolin-1的調(diào)節(jié)研究不多見。

本研究以過氧化氫(hydrogen peroxide，H2O2)誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vein endothelial cells，HUVECs)衰老為研究模型，觀察Rb1延緩內(nèi)皮細(xì)胞衰老的作用，并從caveolin-1角度探討Rb1延緩內(nèi)皮細(xì)胞衰老的機(jī)制。

材料和方法

1材料

人參皂苷Rb1購自于中國藥品生物制品檢定所。30% H2O2購自廣州化學(xué)試劑廠。M199粉劑、無血清培養(yǎng)基(serum-free medium，SFM)、胎牛血清(fetal bovine serum，F(xiàn)BS)、EDTA胰酶和Ⅰ型膠原酶購自Gibco；內(nèi)皮細(xì)胞生長添加劑(endothelial cell growth supplement，ECGS)購自BD；DMSO和碘化丙啶(propidium iodide，PI)購自Sigma-Aldrich；X-Gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-D-半乳糖苷)購自AMESCO；全蛋白提取試劑盒購自南京凱基生物有限公司；BCA蛋白定量試劑盒購自上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司；預(yù)染分子marker購自Fermentas；兔抗caveolin-1多抗購自Cell Signaling Technology；兔抗GAPDH多抗購自Proteintech Group；辣根酶標(biāo)記羊抗兔IgG購自武漢博士德公司；綠色熒光羊抗兔 II 抗購自Invitrogen。

2HUVECs原代分離及培養(yǎng)

HUVECs原代培養(yǎng)參考Bandin等[7]報道的方法。取健康新生兒臍帶，在無菌條件下用PBS反復(fù)沖洗直至液體清亮，使用0.1%Ⅰ型膠原酶室溫消化20～30 min，收集膠原酶細(xì)胞混合液，1 000 r/min離心7 min，棄上清，用預(yù)溫的完全培養(yǎng)液(60% M199，20% SFM，20% FBS，2 mmol/L谷氨酰胺，60 mg/L ECGS)懸浮細(xì)胞，吹打數(shù)次后種于培養(yǎng)瓶進(jìn)行培養(yǎng)。第1～3代用于實(shí)驗(yàn)。通過顯微鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)以及流式檢測細(xì)胞表面標(biāo)志物CD31鑒定細(xì)胞類型。

3實(shí)驗(yàn)方法

3.1內(nèi)皮細(xì)胞衰老模型的建立以及細(xì)胞處理 第1～2代臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞消化計(jì)數(shù)后，以1×104cells/mm2種入不同的培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿。待培養(yǎng)24 h后，換用含2%血清的M199培養(yǎng)基饑餓細(xì)胞至少8 h，然后加入H2O2進(jìn)行刺激處理，刺激1 h后置換成正常完全培養(yǎng)基，培養(yǎng)24 h后進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。通過衰老相關(guān)β-半乳糖苷酶(senescence-associated β-galactosidase，SA-β-Gal)染色和細(xì)胞周期的檢測判斷模型成功與否。

在探討人參皂苷Rb1逆轉(zhuǎn)內(nèi)皮細(xì)胞早衰及其機(jī)制時，細(xì)胞分組為：空白對照組(正常完全培養(yǎng)基培養(yǎng))、模型組(60 μmol/L H2O2作用細(xì)胞1 h)及10 μmol/L、20 μmol/L和40 μmol/L Rb1干預(yù)組(10、20和40 μmol/L Rb1作用30 min后加入60 μmol/L H2O2刺激1 h)。

3.2SA-β-Gal染色 SA-β-Gal染色參考Dimri等[8]的方法進(jìn)行。染色18 h后在倒置顯微鏡下以物鏡(×10)觀察細(xì)胞染色情況，進(jìn)行相關(guān)計(jì)數(shù)和拍照，連續(xù)計(jì)數(shù)400個細(xì)胞，統(tǒng)計(jì)其中的藍(lán)染細(xì)胞數(shù)目(即SA-β-Gal染色陽性細(xì)胞)，藍(lán)染細(xì)胞/400個細(xì)胞為染色百分比，該百分比作為衰老程度的評價標(biāo)準(zhǔn)。

3.3細(xì)胞周期測定 各組細(xì)胞消化后于低溫離心機(jī)300×g離心 5 min，PBS清洗2次，緩慢加入70%冰乙醇，輕柔吹散混勻細(xì)胞，于4 ℃固定過夜；次日300×g離心5 min棄去乙醇，冷PBS清洗細(xì)胞2次，加入終濃度為50 mg/L PI染液，4 ℃避光反應(yīng)60 min，隨后流式細(xì)胞術(shù)檢測分析各組的細(xì)胞周期時相。

3.4Western blot實(shí)驗(yàn) 細(xì)胞蛋白提取方法按照南京凱基生物有限公司全蛋白提取試劑盒說明書執(zhí)行。隨后按照上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司BCA蛋白定量試劑盒說明書測定蛋白量。經(jīng)BCA定量后，10 μg樣品蛋白進(jìn)行SDS-PAGE分離，然后轉(zhuǎn)移到PVDF膜上。用5%脫脂奶粉溶液室溫封閉1 h后，加入抗caveolin-1(1∶10 000)抗體，4 ℃搖床過夜孵育12 h以上。 I 抗孵育結(jié)束后，棄去 I 抗，TBST洗膜 5 min×3次，加入羊抗兔 II 抗(1∶40 000)，室溫孵育1 h，TBST洗3次后使用化學(xué)發(fā)光法曝光顯影。最后用Quantity One軟件掃描條帶，分析圖像。

3.5激光共聚焦成像觀察 將第1～2代細(xì)胞消化計(jì)數(shù)，種于含有玻璃蓋片的6孔板中，培養(yǎng)24 h后，用含2%胎牛血清的M199培養(yǎng)基同步化細(xì)胞，同步化次日加入相應(yīng)處理因素，處理好的細(xì)胞再培育24 h，隨后棄去培養(yǎng)基，PBS洗滌2次后使用4%多聚甲醛固定細(xì)胞15 min，用預(yù)冷的TBST輕柔洗滌細(xì)胞2次，再用含0.25% Triton X-100的TBST孵育細(xì)胞7 min進(jìn)行打孔，隨后使用碧云天封閉液封閉60 min，先后加入 I 抗、II 抗和Hoechst染色液進(jìn)行不同時間孵育，封片避光過夜。最后在正置熒光顯微鏡下觀察，進(jìn)行激光掃描共聚焦觀察。

4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

用SPSS 16.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示。多組數(shù)據(jù)間比較采用單因素方差分析(one-way ANOVA)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1HUVECs培養(yǎng)形態(tài)學(xué)觀察及鑒定

HUVECs單層生長，早期呈小多角形，胞漿豐富，核清晰，細(xì)胞融合后呈典型鋪路石樣排列(圖1)。CD31(血小板內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子1)被廣泛應(yīng)用于鑒定內(nèi)皮細(xì)胞，本實(shí)驗(yàn)的流式細(xì)胞術(shù)分析結(jié)果顯示，第1代和第2代人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的CD31陽性率分別為99.9%和99.6%，符合內(nèi)皮細(xì)胞特性(圖2)。

Figure 1. Normal appearance of HUVECs.

圖1人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞顯微鏡下形態(tài)

Figure 2. The identification of HUVECs via CD31 with flow cytometry. A: the cells at passage 1 (left: negative control; right: positive rate of CD31 on the surface of cells); B: the cells at passage 2 (left: negative control; right: positive rate of CD31 on the surface of cells).

圖2流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞表面CD31鑒定內(nèi)皮細(xì)胞

2Rb1對H2O2誘導(dǎo)的早熟性衰老HUVECsSA-β-Gal染色的影響

本課題組既往的研究顯示40～100 μmol/L H2O2可以有效地誘導(dǎo)HUVECs衰老，且未引起明顯凋亡，基于后續(xù)實(shí)驗(yàn)對細(xì)胞數(shù)目的要求，我們選用60 μmol/L H2O2刺激HUVECs建立衰老模型[6, 9]。從圖3中我們可以看到，60 μmol/L H2O2刺激組與對照組相比，細(xì)胞形態(tài)失去鋪路石樣排列外觀，細(xì)胞體積變大、呈扁平狀，SA-β-Gal染色陽性細(xì)胞數(shù)明顯升高(P<0.01)。Rb1 (10、20和40 μmol/L)作用于H2O2誘導(dǎo)的早熟性衰老HUVECs，與H2O2組相比，SA-β-Gal染色陽性細(xì)胞數(shù)明顯降低(P<0.01)，以20 μmol/L Rb1組效果最佳，見圖3。

Figure 3. The effect of Rb1 pretreatment on H2O2-induced senescence in the HUVECs detected by SA-β-Gal staining (×100). Senescent cells were identified as blue-stained cells. Mean±SD.n=5.**P<0.01vsH2O2group.

圖3不同濃度Rb1預(yù)處理對于各組細(xì)胞衰老染色的影響

3Rb1對H2O2誘導(dǎo)的早熟性衰老HUVECs細(xì)胞周期的影響

H2O2誘導(dǎo)的早熟性衰老模型組細(xì)胞G0/G1期比例明顯高于對照組(P<0.05)，S期細(xì)胞明顯低于對照組(P<0.05)；10 μmol/L Rb1作用于HUVECs，與衰老模型組相比，G0/G1期比例降低(P<0.05)，S期細(xì)胞比例增多，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性；20和40 μmol/L Rb1作用于HUVECs，與衰老模型組相比，G0/G1期比例降低(P<0.05)，S期細(xì)胞比例增多(P<0.05)；20 μmol/L Rb1組與40 μmol/L Rb1組各期細(xì)胞比例的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性，見圖4。

4Rb1對H2O2誘導(dǎo)的早熟性衰老HUVECscaveolin-1蛋白的影響

為了評估Rb1抗內(nèi)皮細(xì)胞衰老是否與caveolin-1有關(guān)，我們分別使用Western blot和激光共聚焦技術(shù)對caveolin-1蛋白表達(dá)進(jìn)行了檢測。Western blot結(jié)果顯示，與對照組相比，60 μmol/L H2O2組的caveolin-1蛋白表達(dá)明顯增多，Rb1(10、20和40 μmol/L)預(yù)處理后，caveolin-1表達(dá)減少。其中，以20 μmol/L Rb1組的效果最佳(P<0.05)，見圖5。

Figure 4. The effect of Rb1 pretreatment on cell cycle in the HUVECs. The cell cycle was detected by flow cytometry with PI staining. Mean±SD.n=3.*P<0.05vsH2O2.

圖4不同濃度Rb1預(yù)處理對于各組細(xì)胞周期的影響

同時，我們采用激光共聚焦技術(shù)對caveolin-1的蛋白表達(dá)進(jìn)行了檢測。如圖6所示，與對照組相比，60 μmol/L H2O2組內(nèi)皮細(xì)胞胞漿體積明顯增大，形態(tài)扁平，caveolin-1熒光強(qiáng)度變強(qiáng)，其在胞膜和胞漿分布均增多，說明caveolin-1蛋白表達(dá)明顯增多；20 μmol/L Rb1預(yù)處理后，胞漿體積有所減小，caveolin-1熒光強(qiáng)度變暗，胞膜和胞漿分布均減少，說明其表達(dá)減少。

Figure 5. The effect of Rb1 on the protein expression of caveolin-1 in the HUVECs. The protein level of caveolin-1 was evaluated by Western blot with caveolin-1 antibody. GAPDH served as loading control. Mean±SD.n=3.*P<0.05vsH2O2.

圖5Rb1對HUVECscaveolin-1蛋白的影響

Figure 6. The effect of Rb1 on the expression of caveolin-1 in the HUVECs evaluated by confocal laser-scanning microscopy (×400).

圖6激光掃描共聚焦顯微鏡觀察H2O2處理及人參皂苷Rb1預(yù)處理后HUVECscaveolin-1的表達(dá)

討 論

本課題研究發(fā)現(xiàn)，60 μmol/L H2O2能夠有效地誘導(dǎo)原代人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的衰老，而人參皂苷Rb1可通過抑制caveolin-1的表達(dá)發(fā)揮延緩H2O2誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞早熟性衰老的作用。

胞膜窖是細(xì)胞質(zhì)膜內(nèi)陷形成的囊狀結(jié)構(gòu)。在大部分細(xì)胞類型包括內(nèi)皮細(xì)胞，caveolin-1是胞膜窖的重要功能蛋白。Caveolin-1具有特殊的腳手架區(qū)(caveolin scaffolding domain，CSD)，該區(qū)可介導(dǎo)ca-veolin-1與許多信號分子之間的直接作用，成為多條信號通路的樞紐中心，影響信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞代謝、膽固醇平衡、自噬、腫瘤增殖或抑制等過程，近年來，其在細(xì)胞衰老方面的作用日益被關(guān)注[15]。Feng等[16]的研究發(fā)現(xiàn)caveolin-1與高糖誘導(dǎo)的人腎小球系膜細(xì)胞衰老有關(guān)，阻斷caveolin-1能顯著地減少細(xì)胞衰老，其可能與P53途徑有關(guān)。Volonte等[1]的研究表明caveolin-1能結(jié)合Sirt1，從而抑制Sirt1的活性，促進(jìn)成纖維細(xì)胞的衰老以及IL-6的分泌。Rippe等[17]在研究microRNA變化與內(nèi)皮細(xì)胞衰老的關(guān)系時發(fā)現(xiàn)，caveolin-1抑制miR-133a，抑制eNOS的活性，在衰老人動脈內(nèi)皮細(xì)胞中，caveolin-1表達(dá)增多。Powter 等[18]的研究發(fā)現(xiàn)胞膜窖可調(diào)控內(nèi)皮細(xì)胞一種新的抗炎衰老表型，在H2O2誘導(dǎo)或過表達(dá)ARHGAP18/SENEX誘導(dǎo)的衰老內(nèi)皮細(xì)胞中，胞膜窖和caveolin-1表達(dá)明顯增多。與既往在不同細(xì)胞模型中的研究結(jié)果類似，我們的研究發(fā)現(xiàn)在氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞衰老模型中，caveolin-1表達(dá)明顯增多，說明caveolin-1表達(dá)與內(nèi)皮細(xì)胞衰老密切相關(guān)。

人參首見于《神農(nóng)本草經(jīng)》，具有“補(bǔ)五臟、安精神、定魂魄、止驚悸、除邪氣、明目開心益智，久服輕身延年”等作用，其作為補(bǔ)氣藥在中國使用已超過2 000余年。人參皂苷Rb1是人參發(fā)揮藥理作用的主要成分之一[19]。近年來，已有部分研究證實(shí)，人參皂苷Rb1在心血管及神經(jīng)系統(tǒng)中具有保護(hù)作用[20-24]。Lan等[23]的研究證實(shí)人參皂苷Rb1可通過激活PI3K/Akt途徑、抑制PKC從而改善同型半胱氨酸引起的內(nèi)皮細(xì)胞損傷。Xu 等[24]的研究發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rb1可上調(diào)NO水平、刺激ghrelin表達(dá)，保護(hù)同型半胱氨酸損傷的內(nèi)皮細(xì)胞。我們的研究發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rb1可改善內(nèi)皮細(xì)胞衰老，目前人參皂苷Rb1抗內(nèi)皮細(xì)胞衰老的研究并不多見。我們課題組既往的研究發(fā)現(xiàn)H2O2刺激的衰老內(nèi)皮細(xì)胞ROS水平明顯增加，MDA水平增高，SOD1活性明顯下降，細(xì)胞內(nèi)SOD1 mRNA及蛋白水平明顯減少，eNOS表達(dá)和NO含量明顯下降，以上作用均能被人參皂苷Rb1有效地逆轉(zhuǎn)[6, 9]。本研究中發(fā)現(xiàn)，在加入不同濃度人參皂苷Rb1預(yù)處理后，H2O2誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞衰老能被有效地遏制，大且扁平、多形核的細(xì)胞數(shù)目減少，SA-β-Gal染色陽性細(xì)胞數(shù)明顯減少，G0/G1期細(xì)胞比例降低，S期細(xì)胞比例增多，caveolin-1表達(dá)減少，說明人參皂苷Rb1具有抗衰老作用，其抗衰老作用可能與Rb1調(diào)節(jié)caveolin-1的表達(dá)相關(guān)。并且在大多數(shù)情況下，以20 μmol/L Rb1預(yù)處理的抗衰老效果最佳，提示在我們的研究中人參皂苷Rb1逆轉(zhuǎn)H2O2誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞衰老并不是劑量依賴的。本研究從caveolin-1角度進(jìn)行探討，發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rb1抗衰老可能與Rb1調(diào)節(jié)caveolin-1的表達(dá)相關(guān)。我們的研究進(jìn)一步豐富了人參皂苷Rb1抗內(nèi)皮細(xì)胞衰老的機(jī)制。

本研究結(jié)果表明人參皂苷單體Rb1可能通過抑制caveolin-1的表達(dá)發(fā)揮延緩H2O2誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞早熟性衰老的作用。本課題探索了人參皂苷Rb1防治內(nèi)皮細(xì)胞衰老的可行性及部分機(jī)制，但仍需在體外及體內(nèi)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步深入探討其上游及下游機(jī)制。

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(責(zé)任編輯： 陳妙玲， 羅 森)

Rb1 protects human umbilical vein endothelial cells from hydrogen peroxide-induced senescence: involvement of caveolin-1

LIU Ding-hui1, WU Lin1, YU Shu-jie1, ZHOU Bin1, WANG Min1, LIU Yong1, HAO Bao-shun1, ZHENG Zhen-da1, QIAN Xiao-xian1, 2

(1Department of Cardiology, The Third Affiliated Hospital，2Institute of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine, Sun Yat-sen University, Guangzhou 510630, China. E-mail: xiaoxianq@qq.com)

AIM: Endothelial cell senescence has been proposed to be involved in endothelial dysfunction and atherogenesis. This study aims to investigate the effects of ginsenoside Rb1, a major constituent of ginseng, on hydrogen peroxide (H2O2)-induced endothelial cell senescence， and to explore the expression and production of caveolin-1 in H2O2-induced premature senescence.METHODS: The senescence of primary human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) was induced by H2O2as judged by morphology inspection, senescence-associated β-galactosidase (SA-β-Gal) staining and cell cycle detection. The protein expression of caveolin-1 was determined by Western blot and confocal laser-scanning microscopy.RESULTS: Treatment of the HUVECs with H2O2at 60 μmol/L induced premature senescence, as judged by enlarged, flattened cell morphology, increased SA-β-Gal activity and sustained growth arrest. H2O2effectively increased caveolin-1 level. Pretreatment of the HUVECs with Rb1 was found to reverse endothelial cell senescence, as witnessed by a significant decrease in senescent cell numbers and a decreased percentage of G0/G1phase cells. Furthermore, Rb1 administration reversed the H2O2-increased protein level of caveolin-1.CONCLUSION: Ginsenoside Rb1 antagonizes H2O2-induced endothelial cell senescence through caveolin-1 modulation.

Cell senescence; Caveolin-1; Human umbilical vein endothelial cells; Ginsenoside Rb1

1000- 4718(2017)09- 1544- 07

2017- 02- 06 [

] 2017- 03- 22

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No. 81370447)； 廣東省自然科學(xué)基金博士啟動項(xiàng)目(No. 2015A030310048)

R363.2

A

10.3969/j.issn.1000- 4718.2017.09.002

△通訊作者 Tel: 0738-85252168； E-mail: xiaoxianq@qq.com