關慧 岳俊麗

北京科信必成醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司哈爾濱分公司 150000

HPLC法測定阿奇霉素干混懸劑中阿奇霉素的含量研究

關慧 岳俊麗

北京科信必成醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司哈爾濱分公司 150000

目的：探討如何利用高效液相色譜法測定阿奇霉素干混懸劑中的成分含量。方法：采用WatersXbridgeC18柱（150mm ×2.1mm，5μm），以0.025mol·L-1的磷酸氫二鈉（pH9.0）-乙腈（45∶55）為流動相，流速為0.35mL·min-1，柱溫為30℃，檢測長為215nm。結果：線性范圍為467.70ˉ1434.51μg·mL-1，r=0.999 758，平均回收率（n=15）為99.9%（RSD=1.1%）；本方法重復性和精密度良好（RSD＜2.0%）。結論：采用HPLC法來測定阿奇霉素的含量，不但準確率高，且重復性較好，操作也簡單方便，十分適用于對阿奇霉素干混懸劑進行主要成分含量測定。

阿奇霉素干混懸劑；HPLC法；成分；含量；測定

作為一種常見抗生素，阿奇霉素在抗菌消炎方面有著顯著療效。從藥物成分類型上講，阿奇霉素是一種15元氮環(huán)內(nèi)酯類抗生素，在其他西藥抗生素中，紅霉素的抗菌效果與阿奇霉素較為相似。但與紅霉素相比，阿奇霉素的服用更加方便，且用量更少，效果更好。所以阿奇霉素比紅霉素的使用更為廣泛，也更受患者的歡迎。目前，阿奇霉素的制劑形式有片、膠囊、干混懸劑等多種類型。其中干混懸劑已經(jīng)被廣泛使用，但是與其他制劑相比，對干混懸劑的含量測定難度更大?，F(xiàn)本文就以HPLC法為例，探討其含量測定方法。

1、儀器與試劑

Waters液相色譜儀（Waters2695泵及自動進樣器，Wa-ters2487紫外檢測器）；Agilent1100液相色譜儀（四元泵，紫外檢測器，自動進樣器）；梅特勒 XS105電子天平；色譜柱 WatersXbridgeC18柱（150mm×2.1mm，5μm）。

阿奇霉素工作對照品（含量946μg·mg-1，批號：0601，石家莊歐意藥業(yè)有限公司）；阿奇霉素雜質(zhì)A工作對照品（含量95.4%，批號：aza060801，石家莊歐意藥業(yè)有限公司）；阿奇霉素干混懸劑（規(guī)格為 100mg，批號：063070521、063070301、063070302，石家莊歐意藥業(yè)有限公司）；乙睛為色譜純，美國Fisher公司產(chǎn)品；水為純化水；其余試劑均為分析純。

2、方法

2.1 色譜條件

色譜柱：Waters XbridgeC18柱（150mm×2.1mm，5μm）；流動相：0.025mol·L-1的磷酸氫二鈉（pH9.0）-乙腈（45∶55）；流速：0.35mL·min-1；柱溫：30℃；檢測波長：215nm；進樣體積：20μL。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液的制備

精密稱定阿奇霉素對照品25mg和阿奇霉素雜質(zhì)A對照品5mg，置同一25mL量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備

取阿奇霉素干混懸劑，求出平均裝量，將裝量差異項下的內(nèi)容物混勻，精密稱取適量（約相當于阿奇霉素25mg），置25mL容量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗

按上述色譜條件，進樣對照品溶液20μL，結果理論塔板數(shù)按阿奇霉素峰計算≥1 500；阿奇霉素峰與阿奇霉素雜質(zhì)A峰分離度大于5.0；阿奇霉素峰的托尾因子≤2.0，對照品溶液重復進樣主峰面積的RSD＜2.0%（n=5）。

2.4 線性關系試驗

按對照品溶液阿奇霉素濃度的50～150%制定5個不同濃度梯度，分別是50%、80%、100%、120%、150%，每個濃度梯度平行制備3份樣品溶液，共15份樣品溶液，每份樣品都加入處方量輔料，用流動相溶解并定量稀釋制成規(guī)定濃度，即得系列供試品溶液。按上述色譜條件，分別進樣20μL，記錄阿奇霉素峰面積，以濃度（μg·mL-1）為橫坐標，以相應的阿奇霉素峰面積為縱坐標進行回歸，得回歸方程：Y=3.21e+003X-5.36e+004r=0.999758

結果表明：在467.70-1434.51μg·mL-1范圍內(nèi)，阿奇霉素濃度與峰面積呈良好線性關系。

2.5 回收率試驗

溶液制備同線性關系試驗供試品溶液，按外標法以峰面積計算供試品中阿奇霉素（C38H72N2O12）的含量，根據(jù)含量結果計算回收率，結果5種濃度回收率（n=3）分別為99.2%（RSD=0.5%），98.6%（RSD=0.9%），100.0%（RSD=0.3%），101.2%（RSD=0.7%），100.7%（RSD=0.3%）；平均回收率（n=15）為99.9%（RSD=1.1%）。說明此方法得到的測定結果準確可靠。

2.6 精密度試驗

2.6.1 重復性

取同一批（063070521）阿奇霉素干混懸劑，按“3”項下方法制備所需溶液，平行測定6次的含量結果，RSD值為0.8%。

2.6.2 中間精密度

取3批阿奇霉素干混懸劑，在不同時間，由不同的化驗員，按“3”項下方法制備所需溶液分別測定，二人測定的同批含量結果的相對平均偏差063070521為0.8%，063070301為0.6%，063070302為1.6%。

2.7 穩(wěn)定性試驗

按“3”項下配制對照品溶液和樣品溶液（批號：063070521），每間隔1h，精密量取20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，重復進樣13次，量取主峰面積，計算幾次進樣結果峰面積的RSD值。對照品溶液RSD為0.9%，樣品溶液RSD為0.8%，表明對照品溶液和樣品溶液至少在12h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 樣品測定

取3批阿奇霉素干混懸劑，按“3”項下配制對照品溶液和樣品溶液，在上述色譜條件下分別進樣20μL，按外標法計算含量，結果與抗生素微生物法比較見下表。

從表結果可看出本法與藥典采用的抗生素微生物效價法測定阿奇霉素干混懸劑的含量無顯著性差異。

3、結論

3.1 本文參考有關文獻，對流動相的組成進行了探討，發(fā)現(xiàn)采用本文的流動相即0.025mol·L-1的磷酸氫二鈉（pH9.0）-乙腈（45：55），峰形穩(wěn)定，分離較好。

3.2 溶劑的選擇。由于阿奇霉素干混懸劑的輔料較多，故溶劑選擇比較困難。本法采用流動相和乙腈試驗對比，結果發(fā)現(xiàn)均可溶樣，但因純乙腈毒性較大且價格較貴，故最后溶劑定為流動相。

3.3 樣品濃度選擇。采用阿奇霉素濃度為 1mg·mL-1時峰形對稱，和相鄰雜質(zhì)峰分離較好；濃度過大，峰拖尾嚴重且輔料量大而不好過濾；濃度過小，準確度受影響。

3.4 干擾試驗 將溶劑和按處方工藝配制不含阿奇霉素的空白輔料，按“3”項下方法制備空白供試液，記錄色譜圖，結果顯示空白溶劑和空白輔料對本法測定無干擾。見圖1。

圖1 HPLC色譜圖A-空白基質(zhì)；B-對照品；C-供試品

3.5 測定條件流動相的流速±0.05mL，柱溫度±5℃，乙腈相比例±5%，緩沖鹽pH±0.4等進行小的變動，系統(tǒng)適用性均能達到試驗要求，說明此方法適用范圍較廣。

綜上所述從實驗結果可以看出，使用高效液相色譜法對阿奇霉素干混懸劑中的阿奇霉素含量進行測定，不但具備簡單方便的特點，且準確性和重現(xiàn)性都很好，樣品溶液也較為穩(wěn)定，由此可見，HPLC法是一種很好的阿奇霉素干混懸劑含量測定方法。

[1]曾國富，黃玉英.HPLC法測定阿奇霉素干混懸劑中阿奇霉素的含量[J].海峽藥學，2014（3）：66-67.

[2]吳燕，劉園，徐榮.HPLC法測定阿奇霉素干混懸劑的有關物質(zhì)[J].中國藥房，2011（4）：371-373.

[3]程紅杰，張曄.HPLC法測定阿奇霉素干混懸劑的溶出度[J].藥學研究，2010，29（5）：280-282.

R915.877

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1672-5018（2017）02-011-1