胡海巖，尹麗娟，張靜，馮濤，蔣春林，杜爽

1.內(nèi)蒙古自治區(qū)興安盟人民醫(yī)院 a.檢驗科 b.輸血科，內(nèi)蒙古 烏蘭浩特 137400；2.哈爾濱二四二醫(yī)院 檢驗科，黑龍江 哈爾濱 150060

Roche Cobas e411電化學發(fā)光全自動免疫分析系統(tǒng)性能評估

胡海巖1a，尹麗娟2，張靜1a，馮濤1a，蔣春林1a，杜爽1b

1.內(nèi)蒙古自治區(qū)興安盟人民醫(yī)院 a.檢驗科 b.輸血科，內(nèi)蒙古 烏蘭浩特 137400；2.哈爾濱二四二醫(yī)院 檢驗科，黑龍江 哈爾濱 150060

目的就人絨毛膜促性腺激素（β-HCG）作為急診項目在Roche Cobas e411電化學發(fā)光全自動免疫分析系統(tǒng)上的性能進行分析評估。方法根據(jù)美國臨床和實驗室標準化協(xié)會（CLSI）文件，中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標準WS/T408-2012《臨床化學設備線性評價指南》，使用患者血清和室間質評物，通過β-HCG對儀器的精密度、準確度、線性及可報告范圍與實驗室內(nèi)參考儀器進行比對，以評估同一項目在實驗室檢測結果是否具有一致性。結果使用患者混合血清完成β-HCG的精密度測定試驗，批內(nèi)精密度和總精密度CV值小于廠家聲明的CV值；使用室間質評物完成準確度測定試驗，5份質評物的檢測結果與回報靶值的偏倚在9.8%～13.8%，均在室間質評的測量范圍內(nèi)；選取接近β-HCG檢測上限的高值標本進行線性評估試驗，顯示數(shù)據(jù)組在0.1～9572 mIU/mL，具有臨床可接受的非線性；臨床可報告范圍為0.1～957200 mIU/L。選擇20個患者標本進行比對試驗，計算與參考儀器間的絕對偏倚均＜12.5%，比對通過。結論β-HCG在Roche Cobas e411電化學發(fā)光全自動免疫分析系統(tǒng)上的精密度、準確度符合要求，線性及可報告范圍可滿足臨床應用。

人絨毛膜促性腺激素；電化學發(fā)光全自動免疫分析系統(tǒng)；性能驗證；精密度；準確度；線性

引言

根據(jù)國家實驗室認可委及等級醫(yī)院評審的相關要求，臨床實驗室應對其擬開展的定量檢驗項目進行性能評價，判斷其是否滿足臨床應用的要求，以確定其能否作為臨床診療的指標正式投入使用。對于已開展的檢驗項目也要定期進行性能評估，以了解其是否長期處于一個較為穩(wěn)定的狀態(tài)。只有檢測系統(tǒng)處于穩(wěn)定狀態(tài)，檢驗科才能提供準確可靠的實驗數(shù)據(jù)，從而為臨床提供診療支持[1-3]。

2010年，人絨毛膜促性腺激素作為平診項目在我科開始檢測。應臨床需求以及等級醫(yī)院評審的規(guī)定，2016年起該項目被列入急診項目在Roche Cobas e411電化學發(fā)光全自動免疫分析系統(tǒng)上進行檢測。正式使用前，我們按照規(guī)定對其在該儀器上的檢測性能進行了評估，其內(nèi)容包括精密度、準確度，線性及可報告范圍和與參考儀器的室內(nèi)比對[4-7]。

1 材料與方法

1.1 標本

選取無溶血、黃疸、脂血的患者新鮮血清，冷藏待用；將部分標本進行混合并分裝，冷凍待用。

1.2 質控品

選擇2016年衛(wèi)生部臨床檢驗中心全國腫瘤標志物第一次室間質量評價質控品，批號為201611～201615。

1.3 試劑與儀器

Roche電化學發(fā)光人絨毛膜促性腺激素（β-HCG）檢測試劑盒，儀器為Roche Cobas e411電化學發(fā)光全自動免疫分析系統(tǒng)。實驗室參考儀器為Roche Cobas c602全自動電化學發(fā)光儀。

1.4 方法

工作人員在經(jīng)過培訓、考核合格后對儀器進行操作，在當日室內(nèi)質控在控的情況下進行試驗。1.4.1 精密度試驗

參照美國臨床與實驗室標準化協(xié)會（CLSI）EP15-A2《用戶對精密度和準確度性能的核實試驗-批準指南》[8]，選擇高、低濃度的新鮮混合血清在當日室內(nèi)質控在控的情況下進行試驗[9-10]。每個濃度標本在每個工作日重復測定4次，連續(xù)測定5個工作日，計算出均值（X），標準偏差（S）和變異系數(shù)（CV）。與廠家聲明的CV值進行比較，如實驗結果小于廠家聲明，則判定評估合格。

1.4.2 準確度試驗

取2016年衛(wèi)生部臨床檢驗中心第一次全國室間質評樣本進行檢測，共5個濃度，批號分別為201611、201612、201613、201614、201615。每個樣本測定兩次，與回報靶值進行比較評價。

1.4.3 線性范圍評估試驗

根據(jù)中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標準WS/T408-2012《臨床化學設備線性評價指南》，選取接近試劑盒聲明的上、下限的新鮮血清（高值H，低值L）各一份。按6L、5L+1H、4L+2H、3L+3H、2L+4H、1L+5H、6H配成7個濃度水平，每個濃度測定兩次，兩次的測定值計算得出均值。根據(jù)高低值標本的濃度和配比計算預期值，將測定值和預期值輸入Excel表格，進行多項回歸分析，擬合出一階、二階、三階多項式。

通過對回歸方程的回歸系數(shù)進行t檢驗，判斷其為線性或非線性。如非線性系數(shù)無顯著性，則認為數(shù)據(jù)組具有線性，此時對數(shù)據(jù)組進行精密度檢驗。精密度符合線性判斷要求時，數(shù)據(jù)分析結束，判斷數(shù)據(jù)組具有統(tǒng)計學線性或一階線性。如任一非線性系數(shù)具有顯著性，數(shù)據(jù)組則為非線性。而后進行臨床標準的線性與非線性檢驗，計算ADL（最優(yōu)擬合曲線與直線的平均差異值）。設定PctBnd（有臨床意義的臨界相關界值）＜5%為臨床可允許的誤差，將ADL與臨界值比較，ADL小于臨界值，判定為臨床可接受的非線性。否則，判定為臨床不可接受的非線性[7]。

1.4.4 可報告范圍確定試驗

使用線性范圍評估試驗的上限標本，根據(jù)臨床需求做機上百倍稀釋測定。測定結果與原結果做偏差計算，結果＜1/2TE即判斷稀釋結果與原結果的差異可接受?？蓤蟾娣秶舷逓樵撋舷迾吮窘Y果的100倍。

1.4.5 室內(nèi)比對試驗

選擇盡可能覆蓋檢測范圍的20個新鮮患者血清，分裝兩份冷藏保存待用。選擇同一時間在兩臺儀器上同時檢測，每個標本測定2次，取平均值。將比對儀器的均值與參考儀器均值做百分偏倚計算，結果小于1/2 允許總誤差（Total Error, TE）即判斷比對通過，認為兩儀器檢測結果具有一致性。

2 結果

2.1 精密度試驗結果

β-HCG批內(nèi)精密度和總精密度的檢測結果均小于廠家要求（CV≤8.3%），驗證通過。具體結果，見表1～2。

表1 Roche Cobas e411電化學發(fā)光全自動免疫分析系統(tǒng)檢測β-HCG批內(nèi)精密度驗證結果

表2 Roche Cobas e411電化學發(fā)光全自動免疫分析系統(tǒng)檢測β-HCG總精密度驗證結果

2.2 準確度試驗結果

β-HCG準確度檢驗結果，見表3。檢測結果與回報靶值進行偏倚計算，結果符合要求，驗證通過。

2.3 線性范圍試驗結果

Roche Cobas e411電化學發(fā)光全自動免疫分析系統(tǒng)檢測β-HCG線性評價測定結果和線性評價t檢驗，見表4～5。

經(jīng)過t檢驗后（t=4.57＞t0.05），顯示三階系數(shù)有統(tǒng)計學意義，即三階方程為最佳擬合方程。數(shù)據(jù)擬合結果是統(tǒng)計學標準的非線性。對數(shù)據(jù)組進行精密度檢驗，計算14次測定的平均濃度C=4613.943，回歸標準誤σ=60.13598，不精密度σ/C=1.3%。ADL為0.59%。最優(yōu)擬合方程是三階方程，在L（樣本數(shù)）×R（重復測量次數(shù)）=14和σ/C=1.3%時，查臨界值表為5.4%～5.9%，未標注字母“P”。表明測量數(shù)據(jù)的精密度符合做線性評價的要求。最終結論為ADL=0.59%，小于臨界值，數(shù)據(jù)組0.1～9572 mIU/mL具有臨床可接受的非線性。

表3 Roche Cobas e411電化學發(fā)光全自動免疫分析系統(tǒng)檢測β-HCG準確度驗證結果 (mIU/mL)

表4 Roche Cobas e411電化學發(fā)光全自動免疫分析系統(tǒng)檢測β-HCG線性評價測定結果 (mIU/mL)

表5 Roche Cobas e411電化學發(fā)光全自動免疫分析系統(tǒng)檢測β-HCG線性評價t檢驗

2.4 可報告范圍確定試驗結果

Roche Cobas e411電化學發(fā)光全自動免疫分析系統(tǒng)檢測β-HCG可報告范圍試驗結果，見表6。此次試驗可報告范圍為該上限結果乘以百倍后，確定可報告范圍為0.1～957200.0 mIU/mL。

2.5 室內(nèi)比對試驗結果

20個覆蓋檢測范圍的標本測定后，本儀器與參考儀器間的偏倚在-0.58% ～ +12.0%之間，絕對值＜±12.5%。比對通過，認為兩儀器檢測結果具有一致性。

3 討論

檢驗科綜合各方面的需求，選定檢測系統(tǒng)為臨床提供數(shù)據(jù)支撐，出具檢驗結果的可靠與否直接影響到臨床醫(yī)生對病患的診療。因此熟悉檢測系統(tǒng)的特點，掌握其性能指標就成為了檢驗科工作人員的必修課之一。

隨著臨床實驗室的規(guī)范化管理和ISO15189認可的不斷深入，各個廠家在儀器正式投入臨床使用前就按照CLSI及相關文件的規(guī)定對其所能開展的檢測項目進行了性能評價工作，為實驗室提供完整的性能評價報告。儀器進入檢驗科后，工作人員只需對其進行定期驗證即可。本實驗室于2013年9月順利通過了國家認可委關于醫(yī)學實驗室質量和能力認可（ISO15189）的現(xiàn)場評審，在質量管理上有了更加規(guī)范化的要求和流程。根據(jù)科室質量管理體系的規(guī)定，每年要對儀器進行性能評價的驗證，其結果也要符合相應要求。

表6 Roche Cobas e411電化學發(fā)光全自動免疫分析系統(tǒng)檢測β-HCG可報告范圍試驗結果 (mIU/mL)

4 結論

性能評價中，精密度檢測是所有性能評價的基礎[10-12]；準確度是指測量值與真實值之間相符合的程度，是檢測系統(tǒng)或檢測方法重要的分析性能之一，是臨床可報告范圍、分析靈敏度及參考區(qū)間等評價實驗的基礎。這兩個指標應用的驗證方法較為常見，在此不再贅述。線性范圍是指測定值與稀釋倍數(shù)成線性關系的范圍，它保證了樣本檢測結果在線性范圍內(nèi)準確可靠[12-14]。本研究使用中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標準WS/T408-2012《臨床化學設備線性評價指南》對β-HCG的線性范圍做了評價。這種方法應用不多，但能夠敏感的檢出非線性關系[14-16]。在此為同行加以歸納，以備參考。

[1] 叢玉隆.尿液沉渣檢查標準化建議[J].中華檢驗醫(yī)學雜志, 2002,25(4):249-250.

[2] 馮仁豐.臨床檢驗質量管理技術基礎[M].3版.上海:上海科學技術文獻出版社,2007.

[3] 張洪霞.兩臺全自動生化分析儀精密度評價分析[J].實用醫(yī)技雜志,2012,7:759-760.

[4] 陳芳芳,李家亮,張中書,等.BECKMAN DxI800全自動化學發(fā)光儀檢測泌乳素的性能驗證[J].現(xiàn)代檢驗醫(yī)學雜志,2015,30(1): 126-127.

[5] 歐陽能良,王偉佳,李飛,等.應用CLSI EP15-A2文件評價BNP和NT-proBNP測定的精密度性能[J].國際檢驗醫(yī)學雜志,2011,32(5);538-540.

[6] 楊有業(yè),張秀明.臨床檢驗方法學評價[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2008:126.

[7] WS/T408-2012.臨床化學設備線性評價指南[S].

[8] 孔瑩,劉世國,龔菲.實驗室自動化系統(tǒng)的性能驗證[J].檢驗醫(yī)學與臨床,2015,(A01):204-207

[9] 王治國.臨床檢驗方法確認與性能驗證[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2009.

[10] 張傳寶.精密度和正確度性能驗證[A].中華醫(yī)學會.中華醫(yī)學會第九次全國檢驗醫(yī)學學術會議暨中國醫(yī)院協(xié)會臨床檢驗管理專業(yè)委員會第六屆全國臨床檢驗實驗室管理學術會議論文匯編[C].北京:2011.

[11] 張秀明,莊俊華,鄭松柏,等.臨床化學發(fā)光免疫法檢測AFP的分析性能驗證與實驗方法[J].中華檢驗醫(yī)學雜志;2007,11(30): 1293-1297.

[12] 孫輝.臨床化學發(fā)光免疫法檢測AFP的分析性能驗證及實驗方法分析[J].中國保健營養(yǎng),2014, (1):556-557.

[13] 唐妮娜.羅氏E601檢測系統(tǒng)檢測HE4的方法學性能評價[J].四川醫(yī)學,2013,11(34):1772-1773.

[14] 朱安友,王鳳超,葛鑫,等.RCHITECT i2000SR化學發(fā)光分析儀檢測胃泌素釋放肽前體的性能評價[J].國際檢驗醫(yī)學雜志,2013,8(34):2018-2020.

[15] 楊佳,陳麗龍,李順君.化學發(fā)光微粒免疫分析法對心肌損傷標志物及BNP檢測的方法學性能評價[J].淮海醫(yī)藥,2011,11(29): 481-482.

[16] 麥愛芬.羅氏e601型電化學發(fā)光分析儀測定癌胚抗原的方法學性能評價[J].醫(yī)學檢驗與臨床,2012,23(5):13-15.

本文編輯 劉峰

Performance Evaluation of Roche Cobas e411 Electrochemical Luminescence Automatic Immunoassay System

HU Haiyan1a, YIN Lijuan2, ZHANG Jing1a, FENG Tao1a, JIANG Chunlin1a, DU Shuang1b
1.a.Department of Clinical Laboratory; b.Department of Blood Transfusion, Xing’an League People’s Hospital of Inner Mongolia Autonomous Region, Ulan Hot Inner Mongolia 137400, China; 2.Department of Clinical Laboratory, Harbin 242ndHospital, Harbin Heilongjiang 150060, China

ObjectiveThis paper aims to evaluate and analyze the performance of Roche Cobas e411 electrochemical luminescence full automatic immune system with β-HCG.MethodsAccording to the clinical and laboratory standards institute (CLSI) file and the People’s Republic of China health industry standard WS/T408-2012 linear evaluation guide clinical chemistry equipment, patients serum, ventricular interstitial material and β-HCG were used to evaluate precision, accuracy, linear reportable range of this machine by comparing the results of Roche Cobas e411 with reference instruments, in order to find whether they had the same results.ResultsMixed serum in patients was used to complete the β-HCG precision test, and results showed that total CV value and CV value within the group were less than manufacturer statement CV value. External quality assessment was used to complete measurement accuracy test, the bias between 5 quality assessment and return target value were all in the range of 9.8%～13.8%, which were all in the range of external quality assessment. High value specimens which close to β-HCG superior limit were chosen to complete linear evaluation experiment, results showed that the data set were in the range of 0.1～9572 mIU/mL, with clinical acceptable nonlinear. 20 patients’specimens were selected to do comparison test, absolute bias of calculation and reference instruments were less than 12.5%, results showed that the test was passed.Conclusionβ-HCG tests in Roche Cobas e411 electrochemical luminescence full automatic immune system show that precision and accuracy of the machine meet the requirements, and linear and reportable range are acceptable in clinical.

human chorionic gonadotropin; electrochemical luminescence full automatic immune system; performance veri fication; precision; accuracy; linear

R446.1

B

10.3969/j.issn.1674-1633.2017.09.021

1674-1633(2017)09-0087-03

2016-11-23

2017-01-06

作者郵箱：283132066@qq.com