陳孝得

（青海省大通種牛場，青海大通 810102）

大通牦牛布魯氏菌病血清學(xué)調(diào)查報告

陳孝得

（青海省大通種牛場，青海大通 810102）

大通種牛場地處祁連山東端，北靠達(dá)坂山，東南與大通縣界接壤，西與海晏縣連接，北與祁連縣毗鄰。北緯37°11′～37°32′，東經(jīng)100°52′～101°54′之間。海拔2900～4800m，東西長約40km，南北寬約15km，土地總面積5.6萬hm2，可利用草場面積5.1萬 hm2，飼草料基地3800hm2，場部距西寧92km，場區(qū)內(nèi)山間谷地重疊氣候濕潤，雨量充足，年平均雨量為463.2～636.1mm，全年蒸發(fā)量1054.7～1422.3mm，境內(nèi)有大小河流30余條，水量充足。年均氣溫2.4℃，最高氣溫24℃，最低氣溫-31℃，全年無絕對無霜期、牧草生長期約120d左右。草地類型以高寒草甸和山地草甸為主，高寒草甸占46%，山地草甸占54%。為了解大通牦牛布魯氏菌病感染情況，特進(jìn)行了本次血清學(xué)調(diào)查。采用布魯氏菌病虎紅平板凝集試驗(yàn)結(jié)合布魯氏菌病試管凝集試驗(yàn)。

1 虎紅平板凝集試檢測方法

1.1 材料的準(zhǔn)備

器材與試劑：虎平板凝集抗原、載玻片、移液器、移液槍頭、酒精燈、記號筆、計時器、試管架。

1.2 檢測過程

該實(shí)驗(yàn)又稱為板式孟加拉紅平板凝集實(shí)驗(yàn)，由于所用的抗原是酸性帶色的抗原，抗原與被檢的血清作用時，能抑制血清中的抗體的凝集活性，檢查出的抗體。因此提高了該向反應(yīng)的特異性。在平板玻片上加抗原30μl被檢血清30μl攪勻，酒精燈加熱至37℃靜止5min觀察載玻片。同時做陰、陽性血清做對照。

1.3 檢測結(jié)果

5min觀察載玻片，如果出現(xiàn)了凝聚顆粒呈菌叢狀，凝集間液體明顯清亮，即為陽性，反之為陰性。

2 試管凝集試驗(yàn)

2.1 材料的準(zhǔn)備

器材與試劑：布魯氏菌病試管凝集抗原、對照陰陽性血清。試管架。試管、移液器、500ml燒杯、吸頭、記號筆、可調(diào)加液器、0.9%氯化鈉注射液、蒸餾水、恒溫培養(yǎng)箱。

2.2 檢測過程

準(zhǔn)備好試管，取九只試管放在試管架上，進(jìn)行編號，一號試管為血清對照管，二到八號為試驗(yàn)管，九號為抗原對照管。

將一號試管進(jìn)行血清稀釋，加入2.4ml的生理鹽水，二號試管中不加入，三號到九號試管中各加入0.5ml的生理鹽水，一號試管加入0.1ml被檢測的血清。攪拌均勻后各吸入0.5ml，加入二號三號試管中，從三號試管開始做比對稀釋，從八號試管中吸出0.5ml倒掉。

十倍稀釋抗原，從二號試管開始，每支加入0.5ml稀釋后的抗原。凝集試管檢驗(yàn)判斷透亮程度，取五只試管進(jìn)行編號。取稀釋后的抗原再做第二次的稀釋實(shí)驗(yàn)。

試管編號 抗原稀釋液 生理鹽水 透亮度 標(biāo)記1 0.00 1.00ml 100% +++++ 2 0.25 0.75ml 75% +++ 3 0.50 0.50ml 50% + 4 0.75 0.25ml 25% -5 1.00 0.00ml 0% --

根據(jù)上述的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可以看出，一號試管清亮透明，九號試管，渾濁均勻。牦牛血清凝集的一號試管中檢測為陽性，九號試管中為陰性反應(yīng)。

2.3 結(jié)果與討論

2.3.1 對人類的影響

牦牛布病的感染是其繁衍疾病的主要原因之一，這樣就給牦牛的養(yǎng)殖戶造成了嚴(yán)重的損失，減少了養(yǎng)殖戶的收入。牦牛布病感染一直都為養(yǎng)殖戶關(guān)注，布病是人畜共患的傳染病，而且人可以經(jīng)過多種途徑感染上布病。人感染上布病，可以通過三種方式進(jìn)行傳播。首先是通過皮膚黏膜，直接接觸感染源。比如工作在畜牧一線的人員，通過與病畜的直接接觸或者是病畜污染的水源，土壤等。使人通過皮膚黏膜直接接觸，感染了布病。再有就是通過消化道感染。這種方式就是生吃了病畜的肉，或者是未經(jīng)煮熟的肉，在接觸病畜后不洗手直接拿食物吃等現(xiàn)象，都會造成消化道感染，導(dǎo)致布病的發(fā)生。第三種情況，就是通過呼吸道感染。在畜牧場工作的人員，通過空氣中的飛沫和塵埃感染。受污染的飛沫和空氣含有病畜的感染源。因此，會導(dǎo)致呼吸道感染。從而使人感染上布病。

2.3.2 檢驗(yàn)結(jié)果的探討

本次試驗(yàn)的檢驗(yàn)結(jié)果，大通牦牛感染率為0.11%，此次試驗(yàn)采用了虎紅平板凝集試驗(yàn)做初選，操作方便快捷，適用于大規(guī)模檢測的篩選樣本。但虎紅平板凝集試驗(yàn)易于出現(xiàn)假性陽性的情況，這是由于虎紅抗原敏感性特高，再是血清樣本的純潔、污染程度，保存運(yùn)輸及環(huán)境溫度等都會導(dǎo)致檢測結(jié)果的不真實(shí)性。試管凝集試驗(yàn)較準(zhǔn)確的復(fù)合判定虎紅篩選的血清樣本，大大減少檢測人員的工作強(qiáng)度。

影響結(jié)果因素還有采樣血清樣本的數(shù)量較少或是集中在某個區(qū)域的牦牛感染布病的情況較少，這樣有關(guān)血清樣本就非常單一。由于時間的關(guān)系，沒有進(jìn)行大范圍的牦牛血清采集。在今后的工作中要進(jìn)一步擴(kuò)大新的血清采集范圍，增加血清樣本，完善檢測目標(biāo)，加強(qiáng)布病的預(yù)防工作。

2.3.3 防控治措施

首先，要制定嚴(yán)格的檢疫報告制度。發(fā)現(xiàn)布病疫情后要做到及時、如實(shí)的上報。根據(jù)上級的指示進(jìn)行疫情的防治工作。有關(guān)部門要密切注意疫情的動態(tài)，積極地開展調(diào)查，進(jìn)行監(jiān)測。其次，要深入開展宣傳教育活動，通過實(shí)地宣傳、媒體、印發(fā)小冊子等多種形式進(jìn)行布病防治的宣傳工作，增強(qiáng)群眾的自我保護(hù)意識，有效的控制牦牛布病的發(fā)生，從根源出切斷傳染源，這樣可以提高牦牛的繁衍。提高牦牛的繁殖率，增加職工的收入。

3 結(jié)語

虎紅平板凝集試驗(yàn)操作方便，而且還快捷，適用于大規(guī)模的篩選實(shí)驗(yàn)，但易于出現(xiàn)假陽性的情況。采用試管凝集試驗(yàn)，這種實(shí)驗(yàn)的方法特異性高，檢測較準(zhǔn)確。但操作麻煩不適應(yīng)于大規(guī)模的檢測，虎紅檢出的血清樣本進(jìn)行試管凝集試驗(yàn)復(fù)合，減少工作強(qiáng)度，以做出較準(zhǔn)確的判定。

[1]張可榮，貢嘎，索朗斯珠，等.西藏部分地區(qū)牦牛布病血清學(xué)檢測初報[J].中國奶牛，2011，（24）：48-49.

[2]郭昱潔，瑪依拉·買買提，李飛. 霍城縣2012年布病血清檢測結(jié)果分析[J].新疆醫(yī)學(xué)，2014，44（5）：117-118.