張思依

湖北中醫(yī)藥大學(xué)針灸骨傷學(xué)院2014級(jí)研究生 湖北武漢 430061

針刺對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)肥胖小鼠脂肪炎癥的影響

張思依

湖北中醫(yī)藥大學(xué)針灸骨傷學(xué)院2014級(jí)研究生 湖北武漢 430061

目的：觀察針刺對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖小鼠脂肪炎癥的影響。方法：將40只雄性C57BL/6小鼠隨機(jī)抽取10只做為正常組，普通飼料喂養(yǎng)。其余30只給予高脂飼料喂養(yǎng)16周，16周后形成肥胖模型。將造模成功的小鼠隨機(jī)分為3組，分別為模型組、非穴位組、穴位組，每組各10只小鼠，繼續(xù)給予高脂飲食喂養(yǎng)8周。正常組繼續(xù)給予普通飼料喂養(yǎng)8周。穴位組選取小鼠特定穴進(jìn)行針刺，非穴位組選取尾部非穴位針刺，每日一次，每次針刺15min，連續(xù)治療8周。末次治療后第二天紀(jì)錄各組小鼠體質(zhì)量; 取材后，免疫組化法檢測(cè)小鼠脂肪中白細(xì)胞介素1β（IL-1β）的表達(dá)情況。結(jié)果：16周后給予高脂飲食的小鼠體質(zhì)量較給予普通飼料的小鼠明顯上升（P＜0.05）。治療8周后穴位組小鼠較正常組體質(zhì)量明顯下降（P＜0.05），IL-1β的表達(dá)明顯下。非穴位組小鼠體質(zhì)量和IL-1 β的表達(dá)下降不明顯（P＞0.05）。結(jié)論：針刺穴位可以改善肥胖小鼠脂肪的炎癥反應(yīng)。

針刺；肥胖；炎癥因子；小鼠

肥胖（obesity）是一種由多種因素引起的慢性代謝性疾病，其典型表現(xiàn)是脂肪在內(nèi)臟，皮下組織中大量累積。隨著社會(huì)的發(fā)展，飲食結(jié)構(gòu)的變化，肥胖作為一個(gè)嚴(yán)重的社會(huì)問(wèn)題，已廣泛引起人們的注意。而研究者對(duì)于肥胖的機(jī)制研究也更加深入，近年來(lái)研究顯示，肥胖是一種慢性炎癥性疾病，脂肪組織中的 caspase1對(duì)于肥胖的發(fā)展有至關(guān)重要的影響［1］,caspase1是一種半胱氨酸蛋白酶,會(huì)被炎癥小體激活，并促進(jìn)下游 IL-1β的成熟和分泌［2］。我們通過(guò)針刺干預(yù)高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖C57BL/6小鼠，觀察針刺對(duì)脂肪組織中的IL-1β的含量的影響，探討針刺通過(guò)改善脂肪炎癥來(lái)改善肥胖的作用。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物

8周齡SPF級(jí)C57BL／6雄性小鼠40只，小鼠體質(zhì)量（22±2）g，購(gòu)于南京大學(xué)-南京生物醫(yī)藥研究所。動(dòng)物許可證：SYXK（蘇）2014-0002。

1.2 飼料

普通飼料購(gòu)于華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，高脂飼料購(gòu)于江蘇美迪森生物醫(yī)藥有限公司，型號(hào)MD12032（45%fat Kcal%）

1.3 主要材料與試劑

戊巴比妥鈉（sigma）；SP檢測(cè)試劑盒、DAB試劑盒（北京中衫金橋生物技術(shù)有限公司）； IL－1β一抗（santa cruz）；中性樹(shù)膠（北京索萊寶科技有限公司）；熒光顯微鏡（日本尼康）；針灸針（蘇州醫(yī)療用品廠有限公司）；蘇木素、二甲苯、乙醇（武漢谷歌生物有限公司）

1.4 動(dòng)物模型制備及分組

40只小鼠普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)抽取10只做為正常組，用于空白對(duì)照，其余30只給予高脂飲食16周， 16周后形成肥胖模型［3］，當(dāng)高脂飼料喂養(yǎng)的小鼠體質(zhì)量明顯高于正常組（P＜0.05）為造模成功。將造模成功的小鼠隨機(jī)分為3組，分別為模型組、非穴位組、穴位組，每組各10只小鼠，繼續(xù)給予高脂飲食喂養(yǎng)8周。正常組繼續(xù)給予正常飼料喂養(yǎng)8周。所有小鼠在同一動(dòng)物房飼養(yǎng)，溫度（22±2）°C ，相對(duì)濕度（50±10）%，12小時(shí)明暗交替，自由進(jìn)水進(jìn)食，每天更換飲水，墊料。定時(shí)清潔鼠籠和飲水器。

1.5 干預(yù)方法

針刺治療組采用標(biāo)本配穴法用0.5寸毫針(1cm),在小鼠的關(guān)元穴斜刺1.5mm,雙側(cè)足三里穴直刺3mm，胰俞斜刺3mm。留針10min。隔天一次，治療8周。針刺非穴位組取小鼠尾部距離根部 0.5 cm 和 1 cm 各一點(diǎn)，用0.5寸毫針，45度進(jìn)針2～3mm。第12周開(kāi)始針刺治療，連續(xù)治療8周。

1.6 取材

治療結(jié)束后，給予小鼠腹腔注射1%戊巴比妥鈉（0.1ml/10g）麻醉，眼眶采血，在冰上取附睪脂肪。用多聚甲醛固定組織后包埋，切片，備用。

1.7 觀察與檢測(cè)

1.7.1 體重檢測(cè)

用電子稱稱量各組小鼠16周和24周后的體質(zhì)量。

1.7.2 IL-1β檢測(cè)

用免疫組化檢測(cè)各組小鼠附睪脂肪組織中IL-1β的表達(dá)水平。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間比較采用單因素方法分析，方差齊用LSD分析，方差不齊用Dunnett T3分析,以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 體質(zhì)量

表1 各組小鼠體質(zhì)量（x ± s, g ）

如表1所示，16周后，與正常組比較，模型組小鼠體質(zhì)量明顯上升（P＜0.05）,穴位組體質(zhì)量明顯上升（P＜0.05），非穴位組體質(zhì)量明顯上升（P＜0.05），高脂飼料持續(xù)16周喂養(yǎng)可成功形成肥胖小鼠模型；24周后，與模型組比較，穴位組體質(zhì)量明顯降低（P＜0.05），非穴位組體質(zhì)量下降不明顯。

2.2 脂肪組織IL－1β的表達(dá)

圖1 各組小鼠脂肪組織IL－1β的表達(dá)

如圖1所示，與正常組比較，模型組小鼠脂肪組織中IL-1β的表達(dá)明顯升高。與模型組比較，穴位組脂肪組織中 IL-1β的表達(dá)明顯降低，非穴位組脂肪組織中IL-1β的表達(dá)下降不明顯。

3 討論

肥胖是一種復(fù)雜的疾病，是誘發(fā)胰島素抵抗、2型糖尿病的危險(xiǎn)因素之一，與代謝性疾病、心血管疾病以及慢性炎癥性疾病等密切相關(guān)［4］。多項(xiàng)調(diào)查顯示［5］［6］，肥胖的發(fā)病率逐年攀升,已成為不容忽視的社會(huì)問(wèn)題。長(zhǎng)期營(yíng)養(yǎng)過(guò)剩的條件下，脂肪組織為應(yīng)對(duì)高營(yíng)養(yǎng)水平會(huì)改變其形態(tài)，功能，數(shù)量，而后肥大增生［7］，其功能失調(diào)以及引起脂肪的炎癥反應(yīng)，進(jìn)而引起其他組織如肝臟，骨骼肌的炎癥，誘導(dǎo)一系列疾病。

本實(shí)驗(yàn)，我們通過(guò)高脂飲食誘導(dǎo)小鼠肥胖模型。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為肥胖的病機(jī)有痰濕、氣虛、陽(yáng)虛、血瘀等，因此我們采用標(biāo)本配穴法，選取關(guān)元、足三里、胰俞等穴位，對(duì)肥胖小鼠進(jìn)行特定穴位針刺治療，以固本培元，和胃化濕，達(dá)到減肥和改善炎癥水平的作用。IL-1β是一個(gè)主要的炎癥細(xì)胞因子，主要由巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，與肥胖導(dǎo)致的胰島素抵抗密切相關(guān)［8］。還有研究表明［9］［10］，無(wú)論是在巨噬細(xì)胞或是脂肪細(xì)胞中，都有 IL-1β的產(chǎn)生，從而降低肥胖患者的胰島素敏感性，糖耐量，進(jìn)而誘導(dǎo)胰島素抵抗的發(fā)生和加重 2型糖尿病。研究發(fā)現(xiàn)［11］，在人類脂肪細(xì)胞和小鼠3T3-L1細(xì)胞中，IL-1β影響葡糖糖的轉(zhuǎn)運(yùn)和脂肪酸的攝取。肥胖時(shí)出現(xiàn)的炎癥反應(yīng)的一個(gè)重要特征在于它被啟動(dòng)的最初主要位于脂肪組織，故我們檢測(cè)脂肪組織中I L-1β的表達(dá)來(lái)檢測(cè)炎癥水平。研究發(fā)現(xiàn)模型組小鼠體質(zhì)量較正常組明顯上升，脂肪組織中 IL-1β的表達(dá)明顯上升。穴位組小鼠較模型組體質(zhì)量明顯下降，脂肪組織 IL-1β的表達(dá)明顯降低。非穴位組小鼠較模型組體質(zhì)量和脂肪組織 IL-1β的表達(dá)有所下降，但變化不明顯。提示針刺特定穴位可以改善肥胖和肥胖時(shí)脂肪組織的炎癥狀態(tài)。大量研究表明，針刺對(duì)肥胖小鼠具有良好的減肥效果［12］［13］［14］。針刺干預(yù)肥胖可能與糾正脂代謝紊亂有關(guān)，也可能直接抑制炎癥因子或通過(guò)降低血糖水平減輕體重，解除糖脂毒性作用［15］。針刺對(duì)于肥胖的治療作用可以說(shuō)時(shí)毋庸置疑，而炎癥與肥胖密切相關(guān)，炎癥因子水平在肥胖患者脂肪組織中表達(dá)水平明顯上升，但具體通過(guò)何種途徑使得炎癥因子水平上調(diào)尚不清楚。但抑制 IL-1β的產(chǎn)生可能是治療肥胖和胰島素抵抗的一個(gè)新靶點(diǎn)，對(duì)于肥胖和炎癥關(guān)系的新認(rèn)識(shí)可能為防治肥胖提供新途徑，針刺特定穴可以改善炎癥從而調(diào)節(jié)肥胖及其并發(fā)癥顯示出了良好的前景。

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Effects of Acupuncture on Inflammation of Liver in Mice on a Chronic High-Fat-Diet

Objective To observe the effects of acupuncture on inflammation of eWAT in mice on a chronic high-fat diet. Methods 40 male C57BL/6 mice were randomly divided into the control group(n=10), others were fed for 16 weeks a high-fat-diet. After 16 weeks, the model mice were divided into three group: model group(n=10)、sham acupuncture group(n=10)、acupuncture group(n=10). The mice of acupuncture group to acupuncture on “Guanyuan”、“Zusanli” of both sides、“Yishu” of both sides with 15 minutes. The mice of sham acupuncture group to acupuncture tail. After 8 weeks of treatment, at the second day of the last acupuncture , to observe body weight. IL-1β expression of mice were determined with IHC. Results Compared with the control group, there’s an increase in body weight in the mice on a chronic high-fat diet; Compared with the model group, there’s a decrease in body weight from the acupuncture group (P＜0.05), and in the IL-1β level; There’s no significant differency on the results of body weight and the IL-1β level between the sham acupuncture group and the model group (P＞0.05). Conclusions Acupuncture can improve inflammation of eWAT in obese mice.

Acupuncture; Obesity; Inflammation; Mice

R711.3

A

1672-5018（2017）01-023-02