張暉，周順軍，胡文聰

（四川省攀枝花市第二人民醫(yī)院，四川 攀枝花 617068）

干細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子O C T4、SO X2在食管鱗癌中的表達(dá)及與預(yù)后的關(guān)系

張暉，周順軍，胡文聰

（四川省攀枝花市第二人民醫(yī)院，四川 攀枝花 617068）

目的探討干細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子Sry相關(guān)HMG盒2（SOX2）、八聚體結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子4（OCT4）在食管鱗癌中的表達(dá)變化及與患者臨床特征、預(yù)后的關(guān)系。方法采用免疫組織化學(xué)SP法檢測77例手術(shù)后經(jīng)病理學(xué)證實(shí)為食管鱗癌的手術(shù)標(biāo)本（食管癌組）和40例癌旁組織標(biāo)本（癌旁組織）中SOX2、OCT4蛋白的表達(dá)水平，并分析其與患者臨床特征、預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果食管癌組織中的SOX2蛋白、OCT4蛋白陽性表達(dá)率分別為63.64%和77.92%均高于癌旁組織的17.50%和15.00%，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；食管癌組織中的SOX2蛋白、Oct4蛋白在低分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中呈高表達(dá)（P＜0.05）；食管癌組織中的SOX2蛋白陽性表達(dá)患者的3年隨訪中位生存期24個月低于陰性患者的30個月（χ2=4.072，P=0.044）；OCT4蛋白陽性表達(dá)患者的中位生存時(shí)間21個月低于陰性患者33個月（χ2=4.880，P=0.037）。結(jié)論SOX2、OCT4蛋白在食管癌組織中高表達(dá)，并且與患者的分化程度、轉(zhuǎn)移及預(yù)后有關(guān)。

Sry相關(guān)HMG盒2；八聚體結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子4；食管鱗癌；表達(dá)；預(yù)后

隨著人們的物質(zhì)生活水平提高，飲食上多高脂肪高蛋白，使我國食管癌漸呈高發(fā)狀態(tài)，也使我國逐漸成為世界上食管癌高死亡率的國家[1]。相關(guān)研究顯示，食管癌與生活、飲食習(xí)慣有密切的關(guān)系，不良的生活、飲食習(xí)慣可增加食管癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)[2]。在我國，食管癌常見的類型為鱗癌，早期不易發(fā)現(xiàn)、侵襲性強(qiáng)、進(jìn)展迅速、容易耐藥、容易復(fù)發(fā)。多數(shù)患者在早期僅有咽下哽咽等不適感，但可自行緩解甚至消失，導(dǎo)致患者未重視從而錯過早期最佳治療時(shí)間。對食管鱗癌的常規(guī)治療可以使瘤體縮小，甚至消失，但不能使腫瘤治愈，說明在瘤體組織中有一些腫瘤細(xì)胞可以逃避藥物作用，表明有腫瘤干細(xì)胞的存在。現(xiàn)代研究已經(jīng)清楚干細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子Sry相關(guān)HMG盒2（stem cell transcription factor Sry related HMG box 2，SOX2）、八聚體結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子4（eight dimer binding transcription factor 4，OCT4）等干細(xì)胞轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子參與了胚胎干細(xì)胞及原始生殖細(xì)胞的自我更新過程，大量研究表明，OCT4、SOX2等在腫瘤組織中有表達(dá)[3]。為了進(jìn)一步研究干細(xì)胞轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子對食管鱗癌的表達(dá)及治療的重要意義，筆者探討了OCT4、SOX2在食管鱗癌中的表達(dá)及與臨床預(yù)后的關(guān)系，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取四川省攀枝花市第二人民醫(yī)院手術(shù)后經(jīng)病理學(xué)證實(shí)為食管鱗癌的77例患者的癌組織手術(shù)標(biāo)本（食管癌組）和40例癌旁組織標(biāo)本（癌旁組織）。食管癌組77例患者。男49例、女28例；年齡39～79歲，平均（63.8±12.7）歲；分化程度：高分化 14例、中分化17例、低分化46例；根據(jù)2009年美國癌癥聯(lián)合會（AJCC）TNM分期標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ期17例、Ⅱ期19例、Ⅲ期20例、Ⅳ期21例；發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移40例。癌旁組織40例患者。男29例、女11例；年齡41～75歲，平均（64.8±10.5）歲。兩組患者的年齡、性別構(gòu)成差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）具有可比性。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn) 所有納入對象的組織標(biāo)本均來源于本院手術(shù)切除后經(jīng)病理學(xué)證實(shí)為食管癌組織或癌旁組織；患者術(shù)前未接受過放療、化療等治療；患者的各項(xiàng)臨床病理特征、術(shù)后隨訪情況均具有良好的數(shù)據(jù)記錄；本研究獲得研究對象的知情同意。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn) 術(shù)前具有放化療病史的患者；合并其他惡性腫瘤疾病的患者；各項(xiàng)資料不完整的患者。

1.3 方法

1.3.1 組織標(biāo)本采集 在標(biāo)本離體后迅速進(jìn)行組織標(biāo)本的采集。首先觀察大體標(biāo)本并進(jìn)行拍照，確認(rèn)腫瘤的部位及范圍，然后將癌及癌旁組織切成多塊直徑為0.5 cm左右的組織小塊并分塊裝進(jìn)帶有編號的滅菌凍存管，立即放進(jìn)液氮轉(zhuǎn)移罐。

1.3.2 免疫組織化學(xué)法 切片，烤片；脫蠟及復(fù)水；1份30%過氧化氫H2O2加10份蒸餾水，室溫10 min，蒸餾水洗3次，每次3 min；微波修復(fù)；將切片自然冷卻至室溫，PBS洗滌3次；封閉，5%BSA，室溫20 min，甩去多余液體；滴加一抗，37℃，1 h，或者4℃過夜；PBS洗滌3次，每次3 min；滴加二抗，37℃，15～30 min；PBS洗滌3次，每次3 min；滴加SABC，37℃，30 min；PBS 洗滌 3 次，每次 5 min；1 ml蒸餾水中分別滴加顯色劑，混勻；DAB顯色劑配置好后，滴加于切片，室溫，鏡下檢測反應(yīng)時(shí)間（約5 min）；自來水沖洗干凈，過蒸餾水；蘇木素復(fù)染2 min，自來水沖洗；脫水；樹膠封片，鏡檢。

1.4 免疫組織化學(xué)判斷標(biāo)準(zhǔn)

免疫組織化學(xué)結(jié)果判定：SOX2、OCT4蛋白的陽性著色表達(dá)于細(xì)胞核，呈黃色、棕黃色、褐色顆粒，本研究采用光鏡下度每一張切片每一個視野中的陽性著色細(xì)胞數(shù)、著色強(qiáng)度進(jìn)行評分的半定量方法進(jìn)行評價(jià)；根據(jù)著色強(qiáng)度：0分為無色、1分為淡黃色、2分為棕黃色、3分為褐色、黑色；根據(jù)陽性細(xì)胞比例：陽性細(xì)胞數(shù)目所占比例＜10%為1分、陽性細(xì)胞所占比例11%～50%為2分、陽性細(xì)胞數(shù)51%～75%為3分、陽性細(xì)胞數(shù)所占比例＞75%為4分，兩種積分相乘總分≤3分為陰性、＞3分為陽性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SAS9.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，正態(tài)分布的計(jì)量指標(biāo)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，百分或構(gòu)成比率比較采用χ2檢驗(yàn)；生存分析采用kaplan-meier法，生存中位時(shí)間比較采用log-rank秩檢驗(yàn)法；P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組SO X2蛋白、O C T4蛋白陽性表達(dá)

食管癌組中的SOX2蛋白、OCT4蛋白陽性表達(dá)率分別為63.64%和77.92%均高于癌旁組織中的17.50%和 15.00%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1和圖1。

2.2 食管癌組SO X2蛋白、O C T4蛋白陽性表達(dá)與患者的臨床病理特征的關(guān)系

食管癌組中的SOX2蛋白、OCT4蛋白在低分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中呈高表達(dá)（P＜0.05），見表2、3。

2.3 食管癌組中SO X2蛋白、O C T4蛋白陽性表達(dá)與患者預(yù)后生存的關(guān)系

食管癌組中的SOX2蛋白陽性表達(dá)患者的3年隨訪中位生存期24個月低于陰性表達(dá)患者的30個月（χ2=4.072，P=0.044）（見圖 2）；OCT4 蛋白陽性表達(dá)患者的中位生存時(shí)間21個月低于陰性患者33個月（χ2=4.880，P=0.037）（見圖 3）。

表1 SO X2蛋白、O C T4蛋白陽性表達(dá)比較 例（%）

表2 食管癌組中SO X2蛋白表達(dá)與患者的臨床病理特征的關(guān)系

表3 食管癌組中O C T4蛋白表達(dá)與患者的臨床病理特征的關(guān)系

圖1 SO X2蛋白和O C T4蛋白陽性表達(dá) （SP×400）

圖2 SO X2蛋白不同表達(dá)患者的生存函數(shù)圖

圖3 O C T4蛋白不同表達(dá)患者的生存函數(shù)圖

3 討論

在我國每年大約有25萬人新確診為食管癌，食管癌因此越來越受到人們的關(guān)注和研究[4]。食管癌的組織學(xué)分型包括鱗狀細(xì)胞癌、腺癌和未分化癌。其中以鱗狀細(xì)胞癌最為多見，未分化癌雖較少見但惡性程度最高，以腺癌最為少見。食管癌的病因包括食物中亞硝酸鹽刺激、身體的創(chuàng)傷和炎癥、環(huán)境的污染及食品的污染等[5]。近年來越來越多的研究顯示吸煙、飲酒也是引起食管癌的常見原因[6]，患者類型呈男性多于女性，且40歲以上男性是高發(fā)人群。由于食管癌早期癥狀不明顯，不易被發(fā)現(xiàn)，所以在臨床中患者一旦確診為食管癌往往已是中晚期，已失去最佳治療時(shí)機(jī)，手術(shù)效果并不理想，復(fù)發(fā)率非常高，使食管癌患者術(shù)后5年存活率往往不足10%[7]。故食管癌早期發(fā)現(xiàn)早期治療是非常重要的步驟，但是由于目前常用腫瘤標(biāo)志物對食管癌缺乏特異性及敏感性，導(dǎo)致食管癌的早期發(fā)現(xiàn)陷入困難[8]。因此尋找新的對食管癌有特異性和敏感性的腫瘤標(biāo)志物、了解食管癌生物特點(diǎn)將有利于食管癌的早期發(fā)現(xiàn)和有利于探尋新的生物治療靶點(diǎn)，為提高食管癌患者的生存時(shí)間和生活質(zhì)量帶來巨大的影響[9]。

在自然界中，生物所表現(xiàn)出獨(dú)特的形狀都是由于基因轉(zhuǎn)錄和翻譯的結(jié)果。轉(zhuǎn)錄和翻譯可以使基因控制蛋白質(zhì)合成，毫無誤差的完成基因的表達(dá)，整個過程中任何一點(diǎn)細(xì)微偏差，都將導(dǎo)致不可預(yù)知的缺陷或疾病[10]。真核生物轉(zhuǎn)錄過程中有多重蛋白質(zhì)因子協(xié)助參與，它是多基因協(xié)同作用的復(fù)雜過程。轉(zhuǎn)錄因子定位于細(xì)胞核中，不僅參與機(jī)體器官及血管生成，還對細(xì)胞凋亡起到調(diào)控作用，更可對癌基因、抑癌基因及細(xì)胞凋亡的相關(guān)分子進(jìn)行調(diào)節(jié)，從始至終干預(yù)細(xì)胞生長發(fā)育，最終導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生及轉(zhuǎn)移，所以，針對單基因的治療不能夠有效地抑制腫瘤的生長。相關(guān)研究表明，腫瘤組織一般具有以下的表型特征：具有向正常組織侵襲和轉(zhuǎn)移的能力；可持續(xù)性促進(jìn)腫瘤血管生成；復(fù)制潛力有限性；可程序性逃避細(xì)胞凋亡；對生長抑制信號不敏感性；呈自給自足性生長。因此說，食管癌發(fā)病的分子機(jī)制也與很多因素、很多基因的改變相關(guān)，其中包括人乳頭瘤狀病毒、細(xì)胞周期調(diào)控異常、抑癌基因丟失或失活、角蛋白及原癌基因的激活。目前，國內(nèi)外多對P53、P21、Rb、P16等抑癌基因的失活以及 cyclinD1、H-ras、EGF、myc等原癌基因的激活從而導(dǎo)致患者食管癌發(fā)病進(jìn)行研究。目前，對于食管癌腫瘤干細(xì)胞的研究比較少，已有的研究在細(xì)胞水平探討了SOX-2及OCT等干細(xì)胞因子在促進(jìn)食管癌細(xì)胞增殖、分化或者凋亡等病理過程中的作用，認(rèn)為高表達(dá)的干細(xì)胞因子是促進(jìn)癌細(xì)胞持續(xù)性病變的核心因素，但關(guān)于組織水平的研究較少，同時(shí)本次研究在探討組織水平相關(guān)分子變化的同時(shí)，揭示了其與患者遠(yuǎn)期臨床預(yù)后的關(guān)系。SXO2和OCT4基因是維持胚胎干細(xì)胞（ESC）特性的核心物質(zhì)，是胚胎干細(xì)胞分化發(fā)育成為各種功能細(xì)胞不可缺少的影響因子，并且目前已經(jīng)證實(shí)，兩者在多種腫瘤發(fā)生發(fā)展中起到了重要作用[11]。SXO2與OCT4能夠相互結(jié)合，形成一個復(fù)合體，這個復(fù)合體可以以一種高度序列特異性的方式與靶基因進(jìn)行結(jié)合，控制轉(zhuǎn)錄表達(dá)。本研究運(yùn)用免疫細(xì)胞化學(xué)的方法檢測SOX2蛋白、OCT4蛋白表達(dá)情況，并分析其表達(dá)與臨床預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果發(fā)現(xiàn)食管癌中的SOX2蛋白、OCT4蛋白陽性表達(dá)率均高于癌旁組織，并且食管癌組中的SOX2蛋白、OCT4蛋白在低分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中呈高表達(dá)。食管癌患者出院后的隨訪中發(fā)現(xiàn)，食管癌組中的SOX2蛋白陽性表達(dá)患者的3年隨訪中位生存期低于陰性患者，OCT4蛋白陽性表達(dá)患者的中位生存時(shí)間低于陰性患者。縱觀筆者的研究可以得出SXO2和OCT4基因在食管癌干細(xì)胞生物學(xué)特性維持及腫瘤轉(zhuǎn)移中有重要的作用，進(jìn)一步深入研究SXO2和OCT4基因與食管癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系，將有助于了解食管癌的發(fā)生及復(fù)發(fā)機(jī)制，具有一定的臨床意義，以期為食管癌的早期發(fā)現(xiàn)早期治療做出貢獻(xiàn)。

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（張蕾 編輯）

Expressions of OCT4 and SOX2 in esophageal squamous cell carcinoma and their relationships with clinical prognosis

Hui Zhang,Shun-jun Zhou,Wen-cong Hu
(The Second People's Hospital of Panzhihua City,Panzhihua,Sichuan 617068,China)

ObjectiveTo investigate the expressions of stem cell transcription factor Sry related HMG box 2(SOX2)and eight dimer binding transcription factor 4 (OCT4)in esophageal squamous cell carcinoma and their relationships with clinical characteristics and prognosis.MethodsThe expression levels of SOX2 and OCT4 proteins were detected by immunohistochemical SP method in 77 cases of esophageal squamous cell carcinoma(esophageal cancer)tissues and 40 cases of paracancerous tissues(adjacent tissues),and their correlations with the clinical features and prognosis of the patients were analyzed.ResultsThe positive expression rates of SOX2 protein and OCT4 protein in the esophageal cancer tissues(63.64%and 77.92%respectively)were significantly higher than those in the adjacent tissues(17.50%and 15.00%respectively,P＜0.05).SOX2 protein and OCT4 protein were highly expressed in the esophageal cancer tissues of the patients with poorly-differentiated cancer and lymph node metastasis(P＜0.05).In the patients with positive expression of SOX2 protein in the esophageal carcinoma tissues,the median survival time during the three-year follow-up was 24 months,which was significantly shorter than that(30 months)of the SOX2 negative patients(χ2=4.072,P=0.044).The median survival time of the patients with positive OCT4 protein expression(21 months)was significantly shorter than that(33 months)of the OCT4 negative patients(χ2=4.880,P=0.037).ConclusionsSOX2 and OCT4 proteins are highly expressed in esophageal cancer,and correlated with the degree of differentiation,metastasis and prognosis.

Sry related HMG box 2;eight dimer binding transcription factor 4;esophageal squamous cell carcinoma;expression;prognosis

R735.1

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2017.13.011

1005-8982（2017）13-0058-05

2016-11-28