羅江華 吳朝芳 盧黎明 樊莉 徐弘 鮑偉華/浙江省寧波市畜牧獸醫(yī)局

孫鵬烈/浙江省寧波市鄞州區(qū)畜牧獸醫(yī)站

吳銀麗/浙江省寧?？h畜牧獸醫(yī)局

H5N1亞型禽流感(Re-6+Re-7)疫苗在雞群的免疫抗體消長(zhǎng)規(guī)律

羅江華 吳朝芳 盧黎明 樊莉 徐弘 鮑偉華/浙江省寧波市畜牧獸醫(yī)局

孫鵬烈/浙江省寧波市鄞州區(qū)畜牧獸醫(yī)站

吳銀麗/浙江省寧?？h畜牧獸醫(yī)局

高 致 病 性 禽 流 感(Highly pathogenic avianinfluenza，HPAI)是由正粘病毒科流感病毒屬A型禽流感病毒(AIV)引起的禽類(lèi)高度接觸性、急性傳染病。OIE將其列為應(yīng)報(bào)告動(dòng)物傳染病。AIV分為若干亞型，其中H5、H7亞型多為高致病性強(qiáng)毒株，最近的研究表明，H5型禽流感病毒與以前相比已經(jīng)更容易使哺乳動(dòng)物致病，并更廣泛的在鳥(niǎo)類(lèi)中傳染,到目前為止，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了感染禽流感病毒的貓、老虎和雪豹，禽流感的宿主范圍變得越來(lái)越廣。HPAI不僅對(duì)家禽業(yè)造成重大經(jīng)濟(jì)損失，并可直接感染人，具有重要的公共衛(wèi)生意義。世界不同國(guó)家采取撲殺或疫苗免疫進(jìn)行有效防控HPAI，我國(guó)H5N1亞型禽流感滅活疫苗對(duì)雞和水禽均具有良好的免疫效果。根據(jù)AIV株的變異趨勢(shì)，2014年我國(guó)對(duì)H5N1亞型禽流感疫苗病毒株進(jìn)行了調(diào)整，采用Re-7疫苗病毒株代替之前使用的Re-4疫苗株制備。本研究選擇了某雞場(chǎng)進(jìn)行新H5N1亞型重組禽流感(Re-6+Re-7)滅活疫苗的臨床免疫試驗(yàn)，通過(guò)跟蹤檢測(cè)疫苗免疫后抗體變化情況，了解該二價(jià)疫苗免疫后的抗體消長(zhǎng)規(guī)律和特點(diǎn)，評(píng)估其對(duì)Re-6和Re-7毒株的防控效果。

一、材料和方法

1．主要實(shí)驗(yàn)材料及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。

重組H5N1亞型AIV滅活疫苗 (Re-6+Re-7)(批 號(hào)：2014001)購(gòu)自遼寧益康生物股份有限公司2012006)和H5N1亞型禽流感Re-6、Re-7、Re-4株滅活血凝抗原及陽(yáng)性對(duì)照血清，購(gòu)自哈爾濱維科生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司。選取鄞州區(qū)集士港鎮(zhèn)某雞場(chǎng)的三黃雞(1 500只)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

2.抗體檢測(cè)方法及判定標(biāo)準(zhǔn)。

抗體檢測(cè)采用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《高致病性禽流感診斷技術(shù)》(GB／T 18936—2003)中血凝(HA)和血凝抑制(HI)試驗(yàn)方法。通過(guò)log2的指數(shù)均值計(jì)算平均HI抗體效價(jià)，以每份樣品的禽流感免疫抗體水平≥41og2為合格，并計(jì)算免疫合格率。

3.分組及實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。

在32日齡時(shí)隨機(jī)抽取30只雞采血，之后將雞群在33日齡、63日齡2次重組H5N1亞型二價(jià)滅活疫苗(Re-6+Re-7)免疫(以下簡(jiǎn)稱(chēng)二價(jià)疫苗(Re-7+Re-6)。按照說(shuō)明書(shū)規(guī)定劑量進(jìn)行免疫。實(shí)驗(yàn)雞群分別在48日齡、63日齡（二免前）、84日齡、115日齡、147日齡、205日齡時(shí)隨機(jī)抽取30只雞采血分離血清測(cè)抗體。實(shí)驗(yàn)雞血清均采用HI試驗(yàn)檢測(cè)H5N1亞型禽流感Re-7、Re-6、Re-4抗體。

二、結(jié)果

1.雞免疫試驗(yàn)結(jié)果。

33日齡隨機(jī)抽取30只雞檢測(cè)Re-6、Re-7母源抗體合格率分別為12.5%和0%，可見(jiàn)母源抗體對(duì)二價(jià)疫苗(Re-6+Re-7)的影響已經(jīng)處于比較低的水平。從檢測(cè)數(shù)據(jù)看，一免后15天Re-6和Re-7免疫抗體合格率分別為63.33%和60.00%，而且免疫抗體繼續(xù)上升，到二免前分別達(dá)到了93.33%和90.00%，二面后直到第205日齡，免疫抗體都在96%以上（詳細(xì)結(jié)果見(jiàn)表1、表2）。

同時(shí)本試驗(yàn)中還對(duì)Re-4毒株非免疫抗體進(jìn)行了檢測(cè)，顯示該類(lèi)型母源抗體在33日齡時(shí)仍處于比較高的水平，且二免前抗體合格率變化不大，二免后則快速上升并維持較高水平，最高時(shí)（二免后七周）90%以上（詳情見(jiàn)表3）。

表1 雞群Re-6免疫抗體檢測(cè)結(jié)果（log2）

表2 雞群Re-7免疫抗體檢測(cè)結(jié)果（log2）

表3 雞群Re-4免疫抗體檢測(cè)結(jié)果（log2）

三、討論

本研究采用H5N1亞型禽流感二價(jià)疫苗（Re-6+Re-7）對(duì)1500只雞群進(jìn)行免疫實(shí)驗(yàn)，通過(guò)分析免疫抗體水平檢測(cè)評(píng)估表明，采用H5N1亞型禽流感二價(jià)疫苗（Re-6+Re-7），在試驗(yàn)中能誘導(dǎo)出較高的免疫抗體，表現(xiàn)出良好的抗原性和免疫效果。免疫抗體跟蹤檢測(cè)結(jié)果顯示該二價(jià)苗在二免前Re-6和 Re-7抗體合格率都可以達(dá)到90%以上，且兩種抗體90%以上保護(hù)率長(zhǎng)達(dá)205 d。研究也發(fā)現(xiàn)，免疫抗體評(píng)價(jià)最好在首免三周以后采血檢測(cè)，才能真實(shí)評(píng)價(jià)該疫苗的免疫效果，否則可能會(huì)出現(xiàn)免疫效果達(dá)不到標(biāo)的現(xiàn)象。

鑒于實(shí)驗(yàn)中含有的Re-7毒株疫苗和之前使用的Re-4毒株疫苗同屬一個(gè)分支，親緣關(guān)系較近，因此本次實(shí)驗(yàn)中將Re-4抗體列入調(diào)查對(duì)象，結(jié)果顯示，33日齡時(shí)，該批雞群的Re-4母源抗體還處于比較高的水平，為31.25%，說(shuō)明雞群的父母代經(jīng)過(guò)了Re-4毒株疫苗的良好免疫。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)了一個(gè)奇怪的現(xiàn)象，二免前該抗體合格率變化不是很大，二免后合格率水平則大幅上升，并維持比較高的水平，最高時(shí)（二免后七周內(nèi)）甚至在90%以上。因此對(duì)于Re-7和Re-4疫苗之間是否存在交叉免疫保護(hù)等現(xiàn)象，還有待于我們繼續(xù)研究。

不過(guò)由于本次實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)都是建立在對(duì)1 500只雞群的免疫評(píng)估基層之上，每批抽樣采血的都是隨機(jī)抽取的，不排除存在雞個(gè)體差異及其他因素在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中造成的誤差，因此實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)都只是實(shí)驗(yàn)評(píng)估數(shù)據(jù)，但本法是基層工作中常用的免疫評(píng)估方法，通過(guò)本次實(shí)驗(yàn)可以得出，此種免疫評(píng)估方法在基層實(shí)際工作中具有一定的科學(xué)性和可行性，能夠滿(mǎn)足基層免疫效果評(píng)價(jià)的要求。

另外，通過(guò)實(shí)時(shí)檢測(cè)雞群母源抗體的方式，是一個(gè)行之有效的首免日齡確定方法，這樣能有效減少免疫次數(shù)及免疫低效等問(wèn)題，提高我們?nèi)粘Ｉa(chǎn)中防疫工作的效果。

（略）