劉得水，岳麗玲，陳德慶，李祖彬，鮑紅光，溫憲春，劉吉成

1.齊齊哈爾醫(yī)學院，黑龍江齊齊哈爾 161006；2.齊齊哈爾市第一醫(yī)院，黑龍江齊齊哈爾 161005；3.齊齊哈爾醫(yī)學院附屬第三醫(yī)院，黑龍江齊齊哈爾 161000；4.齊齊哈爾醫(yī)學院附屬第二醫(yī)院，黑龍江齊齊哈爾 161000

肺癌組織標本庫的創(chuàng)建與管理

劉得水1，岳麗玲1，陳德慶2，李祖彬3，鮑紅光4，溫憲春1，劉吉成1

1.齊齊哈爾醫(yī)學院，黑龍江齊齊哈爾 161006；2.齊齊哈爾市第一醫(yī)院，黑龍江齊齊哈爾 161005；3.齊齊哈爾醫(yī)學院附屬第三醫(yī)院，黑龍江齊齊哈爾 161000；4.齊齊哈爾醫(yī)學院附屬第二醫(yī)院，黑龍江齊齊哈爾 161000

目的探索肺癌組織標本庫的創(chuàng)建和管理措施。方法收集肺癌組織腫瘤、癌旁和切緣遠端非腫瘤組織和血液標本，采用統(tǒng)一的采集和標本管理辦法，建立肺癌標本庫。結果截至2017年1月，該組織標本庫共收集肺癌組織標本307例，男性209例，女性98例，右側171例，左側136例，其中腺癌119例，鱗癌103例，小細胞癌77例，腺鱗癌8例，其中全套標本219例，經科學管理經6個月存放后，全血和血清存放符合率較高，與存放前差異無統(tǒng)計學意義，血漿和淋巴細胞存6個月后存放差異有統(tǒng)計學意義。結論肺癌組織標本庫的創(chuàng)建及系統(tǒng)化管理有助于為肺癌的基礎研究和臨床研究提供保障。

肺癌；標本庫；創(chuàng)建；管理

肺癌是目前危害我國人民生命和健康的最大威脅的惡性腫瘤，肺癌已經成為我國排名首位的惡性腫瘤，其死亡率超過惡性腫瘤死亡率的20%，每年新增病例超過50萬，預計未來我國將成為肺癌第一大國[1]。因此，目前大量的肺癌研究集中于臨床病例分析、血液學分析和組織病理學分析，不合理的采集和保存管理措施都極大地影響了實驗結果[2]。因此，建立合理的數據庫和組織標本庫的建立，有利于整合各方面資源，能夠為肺癌的研究提供及時、快速、準確和高效的組織標本[3]。該研究針對肺癌組織標本庫和數據庫進行建立，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2013年1月—2016年6月就診于齊齊醫(yī)學院三所附屬醫(yī)院以及齊齊哈爾市第一醫(yī)院的肺癌病例資料?；颊叩募{入標準為：①經病理學診斷，確診為肺癌的患者；②經細胞學檢測，確診為肺癌的患者；③所有患者均符合知情同意原則，并簽署知情同意書。排除標準：①發(fā)生多發(fā)腫瘤；②腫瘤發(fā)病灶不能明確是來源于肺腫瘤；③其他器官腫瘤轉移至肺部者。該研究經齊齊哈爾醫(yī)學院倫理委員會批準，同意進行該次研究。

1.2 主要設備

電子天平；普通臺式低速離心機，-80℃冰箱，-150℃超低溫冰箱，恒溫水浴箱，低溫高速離心機，臺式電腦；數碼相機等辦公器材與設備。

1.3 標本的收集

1.3.1 組織標本的收集 組織標本選取者均經培訓合格的臨床醫(yī)生完成，腫瘤組織離體后，按照腫瘤、癌旁和切緣遠端非腫瘤組織3部分取材，每部分取材至少1塊組織，并且組織大小直徑不小于0.5 cm，在組織離體的30 min內，經液氮處理30 min后，切取小塊用石蠟包埋，分類存放于-80℃超低溫冰箱中儲存。

1.3.2 血液標本的收集 采血前先核對患者信息，記錄臨床數據庫，選取肘窩采血部位進行常規(guī)采血。取不添加抗凝劑真空采血管收集靜脈血和添加EDTA抗凝劑真空采血管收集靜脈血10 mL，每份5 mL。血液標本依據患者個人信息，二維碼打印機標記，存放于-80℃超低溫冰箱儲存。

1.4 血清及血細胞標本的保存

1.4.1血清標本的保存 收集不加抗凝劑的血液標本5 mL，室溫條件下放置3 h左右，采用普通臺式低速離心機離心10 min（2 000 r/min），所得血清標本分為6份保存于200 uL凍存管中，打印二維碼放置于-80℃超低溫冰箱儲存。

1.4.2 血漿、淋巴細胞的保存 收集經EDTA抗凝劑真空采血管中的血液標本5 mL，采用普通臺式低速離心機離心10 min（2 000 r/min），所得血漿標本分為6份保存于200 uL凍存管中，打印二維碼放置于-80℃超低溫冰箱儲存。將抗凝劑血漿后剩余血液采用0.01 g/L的PBS溶液稀釋2倍后混勻，取等量淋巴細胞分離液平均分配至15 mL離心管中，將稀釋血樣輕放置分離液上離心20 min（1 500 r/min），收集第二層細胞加入 0.01 g/L的PBS溶液5 mL的離心管中離心10 min（1 500 r/min），去上清液，再加0.01 g/L的PBS沖洗數次后離心10 min（1 500 r/min）后去上清液，最終沉淀物為淋巴細胞。取DMSO、1 640培養(yǎng)液、小牛血清比例為1:4:5配置成凍存液，將淋巴細胞放置于凍存液（3 mL）中，分4份分裝，每支0.8 mL[4]。經二維碼打印粘貼，放入-4℃0.5 h，再放入-20℃2 h，最后放入-80℃低溫保存。

1.5 組織標本與血液標本的質量控制與管理

1.5.1 組織標本的質量控制與管理 所有標本均經過病例技術人員檢查，符合腫瘤組織、癌旁組織和切緣遠端非腫瘤組織的組織要求，離體時間控制在30 min之內，轉運期間符合病理轉運要求，轉運過程中單獨存放3種組織，避免相互污染[5]。

1.5.2 血液標本的質量控制與管理 同一患者血液標本放入同一EP管盒中依據二維碼記錄。將兩份血液標本分別放置于兩臺-80℃超低溫冰箱儲存，避免因冰箱故障導致血液標本的損壞。全血標本進行肉眼觀察其顏色和外露情況。血清標本入庫6個月采用電化學發(fā)光法對腫瘤標記物CEA進行檢測，觀察其變化情況，確保血清標本的存儲質量，淋巴細胞在入庫時進行染色，計算存活率，在入庫后6個月再次染色，計算存活率，檢測淋巴細胞保存情況。

2 結果

2.1 組織標本采集情況

截至2017年1月，該組織標本庫共收集肺癌組織標本307例，男性209例，女性98例，右側171例，左側136例，其中腺癌119例，鱗癌103例，小細胞癌77例，腺鱗癌8例，其中全套標本219例（含所有組織標本和血液標本），占89.58%。詳見表1

表1肺癌組織標本庫構成

2.2 血液標本采集情況

經6個月存放后，全血和血清存放符合率較高，與存放前差異無統(tǒng)計學意義，血漿和淋巴細胞存放6個月后差異有統(tǒng)計學意義，但經CEA檢測，入庫前CEA（13.04±0.143），和 6 個月后 CEA（13.56±0.240）差異無統(tǒng)計學意義（t=0.995，P=0.573），血清標本在存放6個月后質量差異無統(tǒng)計學意義。在淋巴細胞存活率方面，6個月后平均存活率均大約90%，符合細胞存放生存標準。

表2肺癌數據庫血液標本有效6個月后合格情況

3 討論

隨著臨床醫(yī)學、病理學和分子生物學的發(fā)展，針對腫瘤組織分析和血液樣本的分析已經成為腫瘤基礎研究、臨床診斷和療效評估的重點領域。腫瘤標本庫的建立能夠對所有研究提供充足的標本資源和信息提供[6]。以往數據庫的建立，優(yōu)于缺乏系統(tǒng)化管理，僅僅低溫保存，沒有對血細胞及腫瘤組織標本成分進行檢測，缺乏了科研的前瞻性，也在一定程度上造成了科研的損失[7]。

該次研究，針對肺癌組織標本進行采集，嚴格的按照采集標準進行操作，規(guī)范了信息的全面性，基礎信息采集做能夠幫助腫瘤臨床工作的流行病學采集，信息全面準確，標本采集經過前期質量控制，保障了3個部分組織標本的質量。建立了規(guī)范的血液標本庫，在采血，保存和使用過程進行規(guī)范化管理，嚴格遵循了科學的管理模式。該次研究顯示，經6個月存放后，全血和血清存放符合率較高，保障了血液的存放質量，這也得益于嚴格控制標本離體時間和嚴格的管理措施。

綜上所述，肺癌組織標本庫已經初步建立，通過全面的，科學化和系統(tǒng)化的管理，保障了組織和血液標本的質量，為肺癌的科學研究提供了物質保障。

[1]Siegel R,Naishadham D,Jemal A.Cancer statistics,2013[J].CA:a cancer journal for clinicians，2013（63）:11-30.

[2]段劉劍，張杰，周曉光.腫瘤組織庫規(guī)范化操作程序的探討[J].醫(yī)學與哲學，2010，31(5)：28-30.

[3]陸曉芳，馬欣，周駿群，等.肝臟組織樣本庫的建立及管理[J].世界華人消化雜志，2011，19(11)：1187-1190.

[4]Mager SR,Oomen MH,Morente MM,et al.Standard operating procedure for the collection of fresh frozen tissue samples[J].Eur J Cancer，2007（43）:828-834.

[5]Hawkins AK.Biobanks:importance,implications and opportunities for genetic counselors[J].J Genet Couns，2010（19）:423-429.

[6]Reis ST,Feitosa EB,Pontes-Junior J,et al.Tumor banks:the cornerstone of basic research in urology[J].Int Braz J Urol，2010（36）:348-354.

[7]Yu-Lei Hou,Juan-Juan Chen,Yan-Feng Wu,et al.Clinical significance of serum mitochondrial DNA in lung cancer[J]Clinical Biochemistry，2013（46）:1473-1477.

R73

A

1672-5654（2017）08（b）-0105-02

2017-05-08）

10.16659/j.cnki.1672-5654.2017.23.105

國家自然科學基金項目（No.81202084）；齊齊哈爾市科學技術項目（No.SFGG-201201）。

劉得水（1981-），男，遼寧撫順人，碩士，助理實驗師，研究方向：腫瘤基礎研究。

劉吉成（1958-），男，黑龍江勃利人，博士，教授，研究方向：腫瘤發(fā)病機制研究，E-mail：qqybliu@126.com。