尚亞細(xì)亞 杜菊梅 張磊 申艷方 張文青 梁風(fēng)俊

醒腦靜對(duì)Aβ25-35誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞線(xiàn)粒體損傷的保護(hù)作用

尚亞細(xì)亞 杜菊梅 張磊 申艷方 張文青 梁風(fēng)俊

目的 觀(guān)察醒腦靜注射液對(duì)Aβ25-35誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞線(xiàn)粒體損傷的保護(hù)作用。方法 將培養(yǎng)的SH-SY5Y細(xì)胞隨機(jī)分為5組，即(1)正常對(duì)照組：細(xì)胞正常培養(yǎng)27 h；(2)AD細(xì)胞模型組：細(xì)胞正常培養(yǎng)3 h，隨后用老化的Aβ25-35(25μmol/L)處理24 h；(3)醒腦靜低濃度組：醒腦靜注射液(5 μl/mL)預(yù)處理細(xì)胞3 h，隨后用老化的Aβ25-35(25 μmol/L)處理24 h；(4)醒腦靜中濃度組：醒腦靜注射液(10 μl/mL)預(yù)處理細(xì)胞3 h，隨后用老化的Aβ25-35(25μmol/L)處理24 h；(5)醒腦靜高濃度組：醒腦靜注射液(20 μl/mL)預(yù)處理細(xì)胞3 h，隨后用老化的Aβ25-35(25 μmol/L)處理24 h；處理后各組細(xì)胞利用MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率，紫外分光光度法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ATP含量，流式細(xì)胞儀檢測(cè)線(xiàn)粒體膜電位水平。結(jié)果 AD細(xì)胞模型組細(xì)胞存活率較正常對(duì)照組降低(P<0.05)，醒腦靜不同濃度組細(xì)胞存活率較AD細(xì)胞模型組均明顯升高(P<0.05)；AD細(xì)胞模型組細(xì)胞內(nèi)ATP含量、線(xiàn)粒體膜電位水平較正常對(duì)照組下降(P<0.05)，醒腦靜不同濃度組細(xì)胞內(nèi)ATP含量、線(xiàn)粒體膜電位水平較AD細(xì)胞模型組顯著升高(P<0.05)。結(jié)論 醒腦靜預(yù)處理可抑制Aβ25-35誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞凋亡，提高細(xì)胞存活率，其機(jī)制可能與醒腦靜提高細(xì)胞內(nèi)ATP含量及線(xiàn)粒體膜電位水平而發(fā)揮線(xiàn)粒體保護(hù)作用有關(guān)。

醒腦靜 阿爾茨海默病 β淀粉樣蛋白 ATP 線(xiàn)粒體膜電位

阿爾茨海默病(Alzheimer disease，AD)是老年人常見(jiàn)的神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病，也最常見(jiàn)的癡呆類(lèi)型，臨床上主要表現(xiàn)為進(jìn)行性記憶與認(rèn)知功能減退。目前我國(guó)有AD患者600～800萬(wàn)，其中65歲以上老年人AD患病率為3%～7%，隨著人口老年化社會(huì)的不斷加劇，AD防治形勢(shì)不容樂(lè)觀(guān)。目前AD具體發(fā)病機(jī)制尚不明確，β淀粉樣蛋白(amyloid beta, Aβ)沉積形成的老年斑及神經(jīng)原纖維纏結(jié)形成是AD典型病理特征。研究表明Aβ可直接或間接對(duì)線(xiàn)粒體結(jié)構(gòu)及功能造成損傷[1-3]，而線(xiàn)粒體損傷后一方面可誘發(fā)氧化應(yīng)激、激活凋亡信號(hào)通路等級(jí)聯(lián)反應(yīng)；另一方面可促進(jìn)Aβ生成[4]，進(jìn)一步加重線(xiàn)粒體損傷，從而形成惡性循環(huán)，導(dǎo)致神經(jīng)元變性凋亡。因此，抑制Aβ誘導(dǎo)的線(xiàn)粒體損傷對(duì)減輕AD病理?yè)p害具有重要意義。

醒腦靜注射液是由傳統(tǒng)名方“安宮牛黃丸”經(jīng)科學(xué)改制而成的水溶性中藥注射液，主要成分為麝香、郁金、冰片、梔子。研究顯示醒腦靜注射液可改善臨床AD患者M(jìn)MSE、ADAS-cog、GDS評(píng)分[5]，但其具體機(jī)制尚不清楚。膿毒癥大鼠實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)醒腦靜注射液可減輕心肌線(xiàn)粒體腫脹、空泡樣改變，降低線(xiàn)粒體電鏡下的半定量評(píng)分，具有線(xiàn)粒體保護(hù)作用[6]。在A(yíng)D患者中醒腦靜注射液是否可發(fā)揮線(xiàn)粒體保護(hù)作用、抑制神經(jīng)元凋亡、改善認(rèn)知障礙尚未明確。本研究利用AD細(xì)胞模型探討醒腦靜注射液對(duì)Aβ25-35誘導(dǎo)的線(xiàn)粒體損傷的保護(hù)作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

SH-SY5Y細(xì)胞購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞庫(kù)；高糖DMEM培養(yǎng)基(Gibco公司)；胎牛血清(Hyclone公司)；0.25%胰酶(Trypsin公司)；Aβ25-35(Sigma公司)；噻唑藍(lán)MTT(Sigma公司)；ATP含量測(cè)試盒(南京建成生物工程研究所)；細(xì)胞凋亡線(xiàn)粒體膜電位檢測(cè)試劑盒(南京建成生物工程研究所)；醒腦靜注射液。

1.2 方法

1.2.1 Aβ25-35老化處理

用1.8 mL重蒸水將1 mg Aβ25-35溶解成濃度為500 μmol/L的母液，于37 ℃下孵育7 d以形成聚集形式的Aβ25-35，-20℃冷凍保存?zhèn)錅y(cè)，測(cè)量前用培養(yǎng)基稀釋成實(shí)驗(yàn)所需濃度。

1.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)

SH-SY5Y細(xì)胞株接種于盛有DMEM完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，放置于37 ℃、5%的CO2培養(yǎng)箱中，每天在倒置顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞生長(zhǎng)狀況，每3～4 d傳代1次，傳代按1∶3進(jìn)行，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.2.3 AD細(xì)胞模型制備

AD細(xì)胞模型制備參考Hongquan等方法[7]：用DMEM完全培養(yǎng)基將老化的Aβ25-35稀釋至25 μmol/L，將正常培養(yǎng)的SH-SY5Y細(xì)胞暴露于 Aβ25-35(25 μmol/L)中24 h，即制成所需AD細(xì)胞模型。

1.2.4 實(shí)驗(yàn)分組

將培養(yǎng)的SH-SY5Y細(xì)胞隨機(jī)分為5組，即(1)正常對(duì)照組：細(xì)胞正常培養(yǎng)27 h；(2)AD細(xì)胞模型組：細(xì)胞正常培養(yǎng)3 h，隨后用老化的Aβ25-35(25 μmol/L)處理24 h；(3)醒腦靜低濃度組：醒腦靜注射液(5 μl/mL)預(yù)處理細(xì)胞3 h，隨后用老化的Aβ25-35(25 μmol/L)處理24 h；(4)醒腦靜中濃度組：醒腦靜注射液(10 μl/mL)預(yù)處理細(xì)胞3 h，隨后用老化的Aβ25-35(25 μmol/L)處理24 h；(5)醒腦靜高濃度組：醒腦靜注射液(20 μl/mL)預(yù)處理細(xì)胞3 h，隨后用老化的Aβ25-35(25 μmol/L)處理24 h。

1.2.5 MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率

SH-SY5Y細(xì)胞接種于96孔培養(yǎng)板，按照實(shí)驗(yàn)分組干預(yù)處理后每孔加入MTT溶液(5 mg/ml)20 μL，37 ℃繼續(xù)孵育4 h，終止培養(yǎng)，移除孔內(nèi)培養(yǎng)液，每孔加入150 μl DMSO，搖床上低速震蕩10 min使甲臜充分溶解，空白孔調(diào)零，酶標(biāo)儀上490 nm波長(zhǎng)處檢測(cè)各孔OD值，記錄并計(jì)算細(xì)胞存活率。

1.2.6 細(xì)胞ATP含量檢測(cè)

SH-SY5Y細(xì)胞接種于6孔培養(yǎng)板，按照實(shí)驗(yàn)分組干預(yù)處理后嚴(yán)格按ATP含量測(cè)試盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，利用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)各孔吸光度值，記錄并計(jì)算ATP含量，ATP含量(μmol/L)=[(測(cè)定OD值-對(duì)照OD值)/(標(biāo)準(zhǔn)OD值-空白OD值)]×標(biāo)準(zhǔn)品含量×樣本測(cè)定前稀釋倍數(shù)÷待測(cè)樣本蛋白含量。

1.2.7 細(xì)胞線(xiàn)粒體膜電位檢測(cè)

利用JC-1熒光探針檢測(cè)線(xiàn)粒體膜電位，將SH-SY5Y細(xì)胞接種于6孔培養(yǎng)板，按照實(shí)驗(yàn)分組干預(yù)處理后嚴(yán)格按線(xiàn)粒體膜電位檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，各組單細(xì)胞懸液用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(Ex=488 nm；Em=530 nm)，綠色熒光通過(guò)FITC通道FL1檢測(cè)，紅色熒光通過(guò)PI通道FL2檢測(cè)，計(jì)算各組紅綠熒光強(qiáng)度比值。

1.2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1 各組細(xì)胞存活率

AD細(xì)胞模型組細(xì)胞存活率較正常對(duì)照組降低(P<0.05)；與AD細(xì)胞模型組比較，醒腦靜低濃度組、中濃度組及高濃度組細(xì)胞存活率明顯升高(P<0.05)；不同濃度醒腦靜組比較，醒腦靜低濃度組細(xì)胞存活率高于中濃度組、高濃度組(P<0.05)(表1)。

注：與正常對(duì)照組比較，*P<0.05；與AD細(xì)胞模型組比較，#P<0.05；與醒腦靜低濃度組比較，▲P<0.05

2.2 ATP含量檢測(cè)

與正常對(duì)照組比較，AD細(xì)胞模型組ATP含量顯著降低(P<0.05)；醒腦靜低濃度組、中濃度組及高濃度組ATP含量較AD細(xì)胞模型組升高(P<0.05)；不同濃度醒腦靜組比較，醒腦靜低濃度組ATP含量高于中濃度組、高濃度組(P<0.05)(表2)。

2.3 線(xiàn)粒體膜電位檢測(cè)

與正常對(duì)照組比較，AD細(xì)胞模型組線(xiàn)粒體膜電位明顯降低(P<0.05)；醒腦靜低濃度組、中濃度組及高濃度組線(xiàn)粒體膜電位較AD細(xì)胞模型組升高(P<0.05)；不同濃度醒腦靜組比較，醒腦靜低濃度組線(xiàn)粒體膜電位高于中濃度組、高濃度組(P<0.05)(圖1，表3)。

表2 各組細(xì)胞ATP含量檢測(cè)(μmol/L)

注：與正常對(duì)照組比較，*P<0.05；與AD細(xì)胞模型組比較，#P<0.05；與醒腦靜低濃度組比較，▲P<0.05

圖1 流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞線(xiàn)粒體膜電位

表3 各組細(xì)胞線(xiàn)粒體膜電位檢測(cè)

注：與正常對(duì)照組比較，*P<0.05；與AD細(xì)胞模型組比較，#P<0.05；與醒腦靜低濃度組比較，▲P<0.05

3 討 論

AD是老年人最常見(jiàn)的癡呆類(lèi)型，雖然隨著國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)AD研究的不斷深入，相繼提出了Aβ級(jí)聯(lián)假說(shuō)、Tau蛋白過(guò)度磷酸化假說(shuō)、氧化應(yīng)激假說(shuō)、膽堿能假說(shuō)、興奮性氨基酸毒性假說(shuō)等發(fā)病機(jī)制假說(shuō)，但目前AD發(fā)病機(jī)制仍未完全闡明，亦無(wú)確切有效的治療方法。腦組織中Aβ異常沉積形成老年斑是AD典型病理特征之一，研究表明Aβ對(duì)神經(jīng)元內(nèi)線(xiàn)粒體具有顯著毒性作用，AD模型大鼠腦組織中靠近Aβ斑塊的神經(jīng)元內(nèi)線(xiàn)粒體數(shù)量減少、膜電位下降，并可見(jiàn)營(yíng)養(yǎng)不良和破碎的線(xiàn)粒體[8]。利用電子顯微鏡觀(guān)察AD患者海馬、額葉皮層、小腦皮層、丘腦等部位的神經(jīng)元，亦可見(jiàn)廣泛的線(xiàn)粒體腫脹、數(shù)量減少、嗜鋨物質(zhì)聚集，嚴(yán)重者出現(xiàn)空泡變性和線(xiàn)粒體嵴斷裂[9]。線(xiàn)粒體損傷后可刺激APP經(jīng)淀粉樣代謝途徑水解生成具有毒性作用的Aβ[4]，從而形成Aβ聚集→線(xiàn)粒體損害→Aβ生成的惡性循環(huán)，加重AD病理?yè)p害。因此，積極尋求線(xiàn)粒體保護(hù)劑來(lái)抑制Aβ誘導(dǎo)的線(xiàn)粒體損傷對(duì)緩解AD病理?yè)p害具有重要意義。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，神明失用是阿爾茨海默病發(fā)病的基本病理，心腎虛衰、痰瘀阻滯是導(dǎo)致神明失用的內(nèi)在機(jī)制，治療當(dāng)以開(kāi)竅醒神、強(qiáng)記益智為施治總則。醒腦靜注射液是由《溫病條辨》傳統(tǒng)名方“安宮牛黃丸”經(jīng)科學(xué)改制而成的水溶性中藥注射液，主要成分為麝香、郁金、冰片、梔子，四藥相配具有醒腦開(kāi)竅、行痰通瘀、清解毒邪之功效。有研究發(fā)現(xiàn)醒腦靜注射液可明顯縮短AD模型大鼠在水迷宮試驗(yàn)中的逃避潛伏期，增加跨越原平臺(tái)次數(shù)，減輕AD模型大鼠的學(xué)習(xí)記憶障礙[7]，改善臨床AD患者M(jìn)MSE、ADAS-cog、GDS評(píng)分[5]，但其具體分子機(jī)制尚不清楚。在膿毒癥大鼠心肌損傷實(shí)驗(yàn)中王金華等研究發(fā)現(xiàn)醒腦靜注射液可減輕膿毒癥大鼠心肌線(xiàn)粒體腫脹、空泡樣改變，降低線(xiàn)粒體電鏡下的半定量評(píng)分，對(duì)膿毒癥大鼠心肌線(xiàn)粒體發(fā)揮保護(hù)作用[6]。醒腦靜是否可通過(guò)線(xiàn)粒體保護(hù)作用來(lái)減輕Aβ細(xì)胞毒性、改善AD患者癡呆癥狀尚不清楚，本研究利用AD細(xì)胞模型探討醒腦靜注射液對(duì)Aβ25-35誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞線(xiàn)粒體損傷的保護(hù)作用。

線(xiàn)粒體是細(xì)胞內(nèi)能量轉(zhuǎn)換的主要結(jié)構(gòu)，被稱(chēng)為“細(xì)胞動(dòng)力工廠(chǎng)”。線(xiàn)粒體通過(guò)三羧酸循環(huán)、電子傳遞過(guò)程使H+經(jīng)ATP酶復(fù)合體回流產(chǎn)生自由能，進(jìn)而驅(qū)動(dòng)ATP合酶將高能磷酸鍵轉(zhuǎn)移給ADP生成ATP。前期研究表明Aβ可引起線(xiàn)粒體ATP合成減少，其機(jī)制可能是Aβ結(jié)合ATP合酶的α亞單位后引起ATP合酶構(gòu)象改變，從而阻礙了底物水平磷酸化產(chǎn)生的高能磷酸鍵轉(zhuǎn)移至ADP生成ATP[10]；也可能與Aβ誘導(dǎo)細(xì)胞氧化應(yīng)激，降低細(xì)胞色素C氧化酶活性，抑制了線(xiàn)粒體電子傳遞和氧化磷酸化過(guò)程有關(guān)[11]。本研究發(fā)現(xiàn)，Aβ25-35可導(dǎo)致SH-SY5Y細(xì)胞ATP含量下降，而醒腦靜預(yù)處理可相對(duì)提高細(xì)胞內(nèi)ATP含量，提示醒腦靜預(yù)處理可減輕Aβ25-35引起的SH-SY5Y細(xì)胞ATP合成障礙。ATP是細(xì)胞內(nèi)能量?jī)?chǔ)存的主要形式，ATP高能磷酸鍵水解生成ADP所釋放的能量，可為細(xì)胞分裂增殖、離子轉(zhuǎn)運(yùn)、信號(hào)傳導(dǎo)、神經(jīng)元軸突運(yùn)輸?shù)壬砘顒?dòng)提供動(dòng)力支持，醒腦靜預(yù)處理提高AD模型細(xì)胞內(nèi)ATP含量，有利于維持細(xì)胞正常新陳代謝、減少細(xì)胞凋亡。

線(xiàn)粒體是由流動(dòng)的雙層單位膜套疊形成的封閉性膜囊結(jié)構(gòu)，雙側(cè)單位膜分別稱(chēng)為外膜和內(nèi)膜，外膜可允許分子量10000以下的小分子物質(zhì)自由通過(guò)，而內(nèi)膜對(duì)物質(zhì)的通透具有高度選擇性，是線(xiàn)粒體膜電位形成的基礎(chǔ)。線(xiàn)粒體膜電位下降是線(xiàn)粒體損傷和細(xì)胞凋亡的早期標(biāo)志，研究發(fā)現(xiàn)Aβ干預(yù)海馬神經(jīng)元8 h后神經(jīng)元內(nèi)線(xiàn)粒體膜電位下降、細(xì)胞凋亡增加，其機(jī)制可能與Aβ激活多聚-ADP-核糖聚合酶(PARP)有關(guān)[12]。Rao等研究發(fā)現(xiàn)線(xiàn)粒體通透轉(zhuǎn)換孔(mPTP)開(kāi)放在A(yíng)β誘導(dǎo)的線(xiàn)粒體膜電位下降中也發(fā)揮作用，Aβ可與mPTP上的親環(huán)素-D相互作用，促進(jìn)mPTP開(kāi)放，引起線(xiàn)粒體膜電位下降[13]。本研究Aβ25-35干預(yù)SH-SY5Y細(xì)胞24 h后細(xì)胞線(xiàn)粒體膜電位顯著下降，與前期研究結(jié)果一致，而醒腦靜各組細(xì)胞線(xiàn)粒體膜電位較AD模型細(xì)胞明顯升高，提示醒腦靜預(yù)處理可減輕Aβ引起的線(xiàn)粒體膜電位下降，從而有利于維持線(xiàn)粒體膜正常通透性及線(xiàn)粒體內(nèi)膜兩側(cè)電荷梯度，穩(wěn)定細(xì)胞氧化呼吸及能量代謝。

線(xiàn)粒體膜電位下降是細(xì)胞凋亡的早期標(biāo)志，醒腦靜可相對(duì)升高Aβ25-35誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞線(xiàn)粒體膜電位，可能具有抗Aβ誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡作用。本研究利用MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率，結(jié)果發(fā)現(xiàn)醒腦靜各組細(xì)胞存活率較AD模型組細(xì)胞明顯升高，提示醒腦靜預(yù)處理可抑制Aβ誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。有研究發(fā)現(xiàn)醒腦靜可通過(guò)下調(diào)Caspase-3水平來(lái)抑制腦外傷、腦出血后神經(jīng)元凋亡[14-16]，醒腦靜的抗神經(jīng)元凋亡作用可能與其調(diào)節(jié)Caspase-3活性有關(guān)，Caspase-3是Caspase依賴(lài)凋亡途徑的主要下游分子，線(xiàn)粒體損傷后線(xiàn)粒體膜電位下降、ATP含量減少，線(xiàn)粒體通透性增加，可導(dǎo)致線(xiàn)粒體內(nèi)細(xì)胞色素C、內(nèi)核酸酶G、凋亡誘導(dǎo)因子等凋亡相關(guān)蛋白釋放，活化Caspase-3，啟動(dòng)Caspase依賴(lài)細(xì)胞凋亡[17]。本研究發(fā)現(xiàn)醒腦靜可提高Aβ25-35干預(yù)后SH-SY5Y細(xì)胞存活率，同時(shí)可提高線(xiàn)粒體膜電位、ATP含量，推測(cè)醒腦靜抗神經(jīng)元凋亡作用可能與其減輕Aβ誘導(dǎo)的線(xiàn)粒體損傷，減少線(xiàn)粒體凋亡蛋白釋放有關(guān)，但其對(duì)線(xiàn)粒體的保護(hù)作用機(jī)制尚有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)醒腦靜預(yù)處理可抑制Aβ25-35誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞凋亡，提高細(xì)胞存活率，其機(jī)制可能與醒腦靜提高細(xì)胞內(nèi)ATP含量及線(xiàn)粒體膜電位水平，發(fā)揮線(xiàn)粒體保護(hù)作用有關(guān)，但其對(duì)線(xiàn)粒體的保護(hù)作用機(jī)制尚有待進(jìn)一步研究。醒腦靜是臨床上廣泛用于腦血管病、腦外傷的治療，其安全性、有效性已獲得臨床認(rèn)可，深入發(fā)掘醒腦靜在A(yíng)D治療方面的潛在作用機(jī)制將有望為AD治療提供新的治療選擇。

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(2016-11-17收稿)

The protective effect of Xingnaojing on mitochondrial damage of SH-SY5Y cells induced by Aβ25-35proteins

ShangYaxiya,DuJumei*,ZhangLei,etal.

DepartmentofNeurology,TheSecondAffiliatedHospitalofShaanxiUniversityofChineseMedicine,Xianyang712000

Objective To investigate the protective effect of Xingnaojing on mitochondrial damage of SH-SY5Y cells induced by Aβ25-35proteins.Methods SH-SY5Y cells were divided into 5 groups: (1) normal control group(cells were cultured for 27 h), (2) AD cell model group(after 3h in normal culture, cells were treated with 25 μM Aβ25-35for 24h), (3) Xingnaojing low concentration group( before treatment with 25 μM Aβ25-35for 24h, cells were pretreated with 5 μl/mL Xingnaojing for 3 h), (4) Xingnaojing middle concentration group(before treatment with 25μM Aβ25-35for 24 h, cells were pretreated with 10 μl/mL Xingnaojing for 3 h), (5) Xingnaojing high concentration group(before treatment with 25 μM Aβ25-35for 24 h, cells were pretreated with 20 μl/mL Xingnaojing for 3 h). After treatment, cell viability was measured by MTT conversion, levels of mitochondrial membrane potential and ATP contents were evaluated by flow cytometry and UV-Spectrophotometric method respectively.Results cell viability significantly decreased in AD cell model group compared with normal control group(P<0.05), Xingnaojing(5,10,20 μl/mL) pretreatment significantly elevated cell viability compared with AD cell model group(P<0.05). Exposure of SH-SY5Y cells to Aβ25-35for 24 h reduced mitochondrial membrane potential and ATP contents(P<0.05), compared with AD cell model group, Xingnaojing(5,10,20 μl/mL) pretreatment significantly elevated ATP content and mitochondrial membrane potential(P<0.05).Conclusion Xingnaojing pretreatment could inhibit apoptosis of SH-SY5Y cells induced by Aβ25-35and improve cell viability, which might be related with Xingnaojing elevated intracellular ATP contents and the level of mitochondrial membrane potential to protect mitochondria.

Xingnaojing Alzheimer's disease Beta-amyloid proteins ATP Mitochondrial membrane potential

陜西中醫(yī)藥大學(xué)科研創(chuàng)新基金(項(xiàng)目編號(hào)2016PY20)；陜西中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院專(zhuān)項(xiàng)科研計(jì)劃項(xiàng)目(項(xiàng)目編號(hào)2016ZD02)

712000 陜西省咸陽(yáng)市陜西中醫(yī)藥大學(xué)(尚亞細(xì)亞)；陜西中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院 [杜菊梅(通信作者)張磊 申艷方 張文青 梁風(fēng)俊]

R742

A

1007-0478(2017)04-0297-05

10.3969/j.issn.1007-0478.2017.04.005