陳國強，郝亞寧

(1.陜西省西安市兒童醫(yī)院腎內(nèi)科，陜西 西安 710003；2.西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院腎內(nèi)科，陜西 西安 710061)

兒童原發(fā)性腎病綜合征腎組織中Toll樣受體4及Toll樣受體7的表達

陳國強1，郝亞寧2

(1.陜西省西安市兒童醫(yī)院腎內(nèi)科，陜西 西安 710003；2.西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院腎內(nèi)科，陜西 西安 710061)

目的 探究兒童原發(fā)性腎病綜合征腎組織中Toll樣受體4(TLR4)及TLR7的表達及臨床意義。方法 選取陜西省西安市兒童醫(yī)院自2013年7月至2016年7月收治的300例接受腎活檢的兒童原發(fā)性腎病綜合征腎組織作為觀察組，按照病例分型可分為MCD型(78例)、MN型(72例)、MsPGN型(75例)及FSGS型(75例)，另選擇同期收治的70例腎母細(xì)胞瘤患兒的正常腎組織作為對照組，采用免疫組化的方法對兩組腎組織中TLR4及TLR7的表達水平進行檢測。結(jié)果 觀察組中的不同病理類型組與對照組相比腎小管組織中TLR4的表達水平較高，不同病理類型組織中MCD型腎小管組織中TLR4的表達水平要明顯高于其他組，依次是MN型、MsPGN型及FSGS型，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(t=4.56～9.23，均P<0.05)。觀察組中的不同病理類型組與對照組相比腎小管組織中TLR7的表達水平較高，不同病理類型組織中MsPGN型腎小管組織中TLR7的表達水平要明顯高于其他組，依次是MN型、MCD型及FSGS型，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(t=4.82～10.25，均P<0.05)。結(jié)論 TLR4及TLR7在兒童原發(fā)性腎病綜合征腎組織中呈現(xiàn)較高的表達水平，且其表達水平在不同病理類型中有一定的差異。

兒童原發(fā)性腎病綜合征；腎組織；Toll樣受體4；Toll樣受體7

Toll樣受體(TLR)作為機體中一類重要的跨膜蛋白，屬于天然的免疫分子，在機體中的主要作用為通過對不同病原微生物相關(guān)分子模式進行有效的識別，從而在免疫功能中發(fā)揮重要的作用[1]。近年來，有研究報道指出，Toll樣受體還可對獲得性免疫提供有效的刺激信號，從而引導(dǎo)一系列的炎癥反應(yīng)[2]。由于兒童原發(fā)性腎病綜合征的發(fā)病機制與T淋巴細(xì)胞功能紊亂相關(guān)，在該病發(fā)生發(fā)展期間多伴隨著各種細(xì)胞因子水平及功能的紊亂，而Toll樣受體的信號通路此時則對感染性與非感染性腎臟疾病產(chǎn)生了介導(dǎo)作用[3]。但目前關(guān)于Toll樣受體在兒童原發(fā)性腎病綜合征中的表達水平的研究較少，現(xiàn)本研究對此展開分析，將結(jié)果報告如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選取陜西省西安市兒童醫(yī)院自2013年7月至2016年7月收治的300例原發(fā)性腎病綜合征患兒腎活檢的腎組織作為觀察組，納入及排除標(biāo)準(zhǔn)：均符合2009年中華醫(yī)學(xué)會兒科學(xué)會腎臟組制定的標(biāo)準(zhǔn)[4]，在穿刺活檢前1個月內(nèi)未出現(xiàn)感染者；排除腎活檢剩余組織較少者，排除合并其他嚴(yán)重心血管疾病者。按照腎病綜合征診治指南與激素耐藥型腎病綜合征診斷標(biāo)準(zhǔn)分型[5]，腎臟病理分型由本院專業(yè)人員完成，分為微小病變(MCD型)共78例；膜性腎病(MN型)共72例；系膜增生性腎小球腎炎(MsPGN型)共75例；局灶性腎小球硬化(FSGS型)共75例。觀察組根據(jù)病理分組進一步分為MCD組、MN組、MsPGN組、FSGS組，另選擇同期收治的70例腎母細(xì)胞瘤患兒的正常腎組織作為對照組，5組一般資料比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，具有可比性。5組患兒家屬均簽署了關(guān)于本次試驗的知情權(quán)同意書，試驗符合醫(yī)學(xué)倫理會審核批準(zhǔn)。

1.2方法

采用免疫組化的方法對觀察組和對照組腎組織中TLR4及TLR7的表達水平進行檢測，檢測所用儀器和試劑盒由上?；蚩萍加邢薰咎峁?。對TLR4及TLR7表達水平采用數(shù)碼顯微圖像分析系統(tǒng)進行觀察分析。

1.3判斷標(biāo)準(zhǔn)

將腎組織中褐色的染色區(qū)域作為判斷陽性的區(qū)域。在每張組化切片中隨機選取10個互相不重疊的腎小球橫切片，計算出每個腎小球陽性面積與整個腎小球面積的比值，采用所計算出來的結(jié)果分別代表TLR4、TLR7的表達水平[6-7]。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法

2結(jié)果

2.1一般資料對比

5組患兒的性別、年齡及病程比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(F值分別為1.23、1.27、1.03，均P>0.05)，見表1。

表1 5組患兒一般資料對比

2.2腎組織中TLR4的表達水平對比

5組腎小球組織中TLR4的表達水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(F=0.92，P>0.05)。觀察組中的不同病理類型組與對照組相比腎小管組織中TLR4的表達水平較高，MCD組腎小管組織中TLR4的表達水平要明顯高于MN組、MsPGN組及FSGS組，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(t=4.56～9.23，均P<0.05)，見表2。

表2 5組腎組織中TLR4的表達水平對比

2.3腎組織中TLR7的表達水平對比

5組腎小球組織中TLR4的表達水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(F=0.78，P>0.05)。觀察組中的不同病理類型組與對照組相比腎小管組織中TLR7的表達水平較高，MsPGN組腎小管組織中TLR7的表達水平要明顯高于MN組、MCD組及FSGS組，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(t=4.82～10.25，均P<0.05)，見表3。

表3 5組腎組織中TLR7的表達水平對比

3討論

3.1 Toll樣受體在人體中的作用機制

TLR主要存在于人體的免疫細(xì)胞中，其主要功能是對病原體的分子模式進行有效的識別，對天然免疫反應(yīng)進行妥善地調(diào)節(jié)，同時能夠發(fā)揮介導(dǎo)炎癥反應(yīng)的作用，對病原微生物的侵襲發(fā)揮充分的抵御效果[8]。近年來，針對Toll樣受體中比較具有代表性的TLR4及TLR7展開的研究發(fā)現(xiàn)，二者在人體中的表達水平與原發(fā)性及感染性腎臟疾病的發(fā)生發(fā)展有密切的相關(guān)性，同時其也可在免疫治療中發(fā)揮較為突出的作用[9]。另外，有專家學(xué)者對Toll樣受體的信號通路在原發(fā)性腎病綜合征中的作用展開研究，一方面發(fā)現(xiàn)機體在發(fā)生感染及損傷的情況下時，可誘導(dǎo)產(chǎn)生Toll樣受體的依賴性炎癥，促進疾病的進展[10]。另一方面發(fā)現(xiàn)Toll樣受體能夠?qū)C體局勢細(xì)胞、NK細(xì)胞等一系列機體固有的免疫細(xì)胞產(chǎn)生明顯的活化作用，對例如核轉(zhuǎn)錄因子(NF-KB)等下游信號分子產(chǎn)生激活的作用，與機體炎癥反應(yīng)的發(fā)生具有一定的關(guān)系，對炎癥因子也可產(chǎn)生激活作用[11]。

3.2不同病理類型下腎組織中的TLR4及TLR7的表達水平及意義

在本次研究中，我們針對不同病理類型下腎組織中的TLR4及TLR7的表達水平進行對比觀察，可見觀察組中的不同病理類型組與對照組相比腎小管組織中TLR4的表達水平較高，不同病理類型組織中MCD型腎小管組織中TLR4的表達水平要明顯高于其他組，依次是MN型、MsPGN型及FSGS型。觀察組中的不同病理類型組與對照組相比腎小管組織中TLR7的表達水平較高，不同病理類型組織中MsPGN型腎小管組織中TLR7的表達水平要明顯高于其他組，依次是MN型、MCD型及FSGS型。可見TLR4及TLR7在兒童原發(fā)性腎病綜合征發(fā)病過程可能起到一定的作用，介導(dǎo)了IgA腎病免疫異常的情況，通過對TLR4及TLR7所識別的主要配體類型進行分析可見，兒童原發(fā)性腎病綜合征的發(fā)生可能與細(xì)菌及病毒感染相關(guān)[12]。另外，有臨床資料顯示，TLR7可通過升高抗RNA抗體的生成，誘導(dǎo)系統(tǒng)性紅斑狼瘡的發(fā)生發(fā)展[13]。

綜上所述，TLR4及TLR7在兒童原發(fā)性腎病綜合征腎組織中呈現(xiàn)出較高的表達水平，且其表達水平在不同病理類型中具有一定的差異。但本次研究尚未對不同病理類型中TLR4及TLR7表達水平的規(guī)律進行探究，仍存在不足，可進一步研究以獲得更精確的結(jié)論，為兒童原發(fā)性腎病綜合征的診斷及治療提供可靠的依據(jù)。

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[專業(yè)責(zé)任編輯：孫 新]

Expression of toll like receptor 4 and 7 in renal tissue of children with primary nephrotic syndrome

CHEN Guo-qiang1, HAO Ya-ning2

(1.DepartmentofNephrology,Xi’anChildren’sHospital,ShaanxiXi’an710003,China; 2.DepartmentofNephrology,FirstAffiliatedHospitalofXi’anJiaotongUniversity,ShaanxiXi’an710061,China)

Objective To probe and analyze the expressions of toll like receptor 4 (TLR4) and TLR7 in renal tissue of children with primary nephrotic syndrome and its clinical significance. Methods Renal tissues of 300 children with primary nephrotic syndrome hospitalized for renal biopsy in Xi’an Children’s Hospital from July 2013 to July 2016 were selected as observation group, and according to case classification divided into MCD type (78 cases), MN type (72 cases), MsPGN type (75 cases) and FSGS type (75 cases). Normal renal tissues of 70 children with nephroblastoma hospitalized at same period were chosen as control group. Immunohistochemical method was used to test the expression level of TLR4 and TLR7 in kidney tissues in two groups. Results Expression level of TLR4 in renal tubule tissue in different pathological type of observation group was higher than that in control group, and among different pathological types, expression level of TLR4 in renal tubule tissue in MCD type was significantly higher than that in other types, with MN type, MsPGN and FSGS type followed in sequence, and difference had statistical significance (tvalue ranged 4.56 to 9.23, allP<0.05). TLR7 expression level in renal tubule tissue in different pathological type of observation group was higher than that in control group, and among different pathological types, TLR7 expression level in renal tubule tissue in MsPGN type was significantly higher than that in other types, with MN type, MCD type and FSGS type followed in sequence, and difference was statistically significant (tvalue ranged 4.82 to 10.25, allP<0.05).Conclusion Expression levels of TLR4 and TLR7 are high in renal tissue of children with primary nephrotic syndrome, and its expression level has a certain difference in different pathological type

children with primary nephrotic syndrome; kidney tissues; toll like receptor 4 (TLR4); toll like receptor 7 (TLR7)

2017-01-20

陳國強(1975—)，男，副主任醫(yī)師，主要從事腎病綜合征方面的工作。

郝亞寧，副主任醫(yī)師。

10.3969/j.issn.1673-5293.2017.08.004

R725.8

A

1673-5293(2017)08-0905-03