陳甜甜，馬 銘，王鋒祥，鄭福山

（1.萊蕪職業(yè)技術(shù)學(xué)院，山東 萊蕪 271100；2.山東興水水利科技產(chǎn)業(yè)有限公司，山東 濟(jì)南 250013；3.山東江河濕地生態(tài)研究院，山東 萊蕪 271100）

玉玲花高效快繁技術(shù)研究

陳甜甜1，馬 銘2，王鋒祥1，鄭福山3

（1.萊蕪職業(yè)技術(shù)學(xué)院，山東 萊蕪 271100；2.山東興水水利科技產(chǎn)業(yè)有限公司，山東 濟(jì)南 250013；3.山東江河濕地生態(tài)研究院，山東 萊蕪 271100）

以玉玲花莖段作外植體進(jìn)行組培快繁，研究外源激素6-BA和NAA對(duì)玉玲花高效快繁的影響，找出玉玲花不定芽誘導(dǎo)、腋芽增殖和生根培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基配方。結(jié)果表明：玉玲花腋芽增殖最佳培養(yǎng)基配方為MS+6-BA2mg· L-1+NAA0.1mg·L-1，腋芽增殖數(shù)及增殖系數(shù)分別為478和3.19。腋芽增殖最佳培養(yǎng)基配方為MS+6-BA2mg·L-1+ NAA0.1mg·L-1，腋芽增殖數(shù)及增殖系數(shù)分別為478和3.19。生根培養(yǎng)最佳培養(yǎng)基配方為MS+6-BA0.4mg·L-1+NAA1.2mg· L-1，生根數(shù)、生根率和平均根長(zhǎng)分別為39、86.67%和1.25。

玉玲花；高效快繁；不定芽誘導(dǎo)；腋芽增殖；生根誘導(dǎo)

玉玲花屬野茉莉科，野茉莉?qū)俟嗄净蛐棠?，主要分布于山東、浙江、江蘇和安徽等地，是城市及庭院綠化的主要樹種之一，市場(chǎng)需求量不斷擴(kuò)大，但該樹種子外殼致密堅(jiān)硬不易發(fā)芽，育苗難度大，限制了苗木供應(yīng)，滿足不了市場(chǎng)需求。但是當(dāng)前國(guó)內(nèi)有關(guān)玉玲花莖段做外植體進(jìn)行高效快繁的技術(shù)研究尚未見報(bào)道，因此，本試驗(yàn)通過配比不同濃度外源激素研究其對(duì)玉玲花帶節(jié)莖段不定芽誘導(dǎo)、腋芽增殖和生根培養(yǎng)的影響，重在探究不定芽誘導(dǎo)、腋芽增殖和生根培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基配方，以期為玉玲花的高效快繁提供數(shù)據(jù)參考，為玉玲花的規(guī)?；绾徒M織培養(yǎng)提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試材料取自萊蕪職業(yè)技術(shù)學(xué)院試驗(yàn)基地健壯無(wú)病植株，選取1年生玉玲花植株莖段。

1.2 試驗(yàn)方法

（1）外植體滅菌。將長(zhǎng)勢(shì)健壯、無(wú)病蟲害的玉玲花枝條浸泡于加有幾滴濃度0.02%的洗潔精溶液中10min，用自來水沖洗枝條10min，無(wú)菌濾紙吸干表面水分，75%的醫(yī)用酒精中浸泡30s，無(wú)菌水沖洗2～3次。以莖節(jié)為中心剪下長(zhǎng)月1cm的莖段，用0.1%的HgCl2溶液消毒2～3min，無(wú)菌水沖洗2～3次。在超凈臺(tái)上用75%酒精消毒30s，無(wú)菌水沖洗2～3次，無(wú)菌濾紙吸干表明水分后接種備用。

（2）不定芽分化誘導(dǎo)試驗(yàn)設(shè)計(jì)。以MS作基本培養(yǎng)基，添加不同濃度的6-BA和NAA，研究外源激素對(duì)玉玲花不定芽分化誘導(dǎo)的影響。每瓶接種3個(gè)莖段，每處理接種30瓶。接種后放置于光照箱進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：光照時(shí)間12h/d，光照強(qiáng)度2000lx，溫度（25±2）℃，pH值5.5～5.8（如表1所示）。

表1 不同濃度6-BA和NAA對(duì)不定芽誘導(dǎo)分化影響的試驗(yàn)設(shè)計(jì)

（3）腋芽增殖試驗(yàn)設(shè)計(jì)。選取長(zhǎng)勢(shì)健壯、高度基本一致的腋芽，接種到添加有不同濃度NAA和6-BA的MS培養(yǎng)基中，每瓶接種5個(gè)芽，每處理接種30瓶，60d后測(cè)定腋芽增殖數(shù)與增殖倍數(shù)，觀察生長(zhǎng)勢(shì)。接種后放置于光照箱進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件同上（如表2所示）。

表2 不同濃度6-BA和NAA對(duì)腋芽增殖影響的試驗(yàn)設(shè)計(jì)

（4）生根培養(yǎng)試驗(yàn)設(shè)計(jì)。選取高2～3cm、長(zhǎng)勢(shì)一致的小苗，將其接種在生根培養(yǎng)中進(jìn)行生根培養(yǎng)，每瓶接種3棵小苗，每處理接種15瓶，培養(yǎng)40d后測(cè)定生根數(shù)、生根率和平均根長(zhǎng)。接種后放置于光照箱進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件同上。生根率=（生根的苗數(shù)/接種苗數(shù)）×100%；平均根長(zhǎng)=根長(zhǎng)之和/根數(shù)（如表3所示）。

表3 不同濃度6-BA和 NAA對(duì)生根培養(yǎng)影響的試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.3 結(jié)果觀察及統(tǒng)計(jì)分析

記錄觀察結(jié)果，并運(yùn)用Microsoft excel 2003軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

（1）不同培養(yǎng)基與激素處理對(duì)不定芽誘導(dǎo)分化的影響。接種后每天觀察記錄外植體生長(zhǎng)情況，14d后每2d觀察記錄1次。在接種后發(fā)現(xiàn)隨時(shí)間的增加，部分培養(yǎng)基中玉玲花莖段葉腋位置有淺綠色突起，隨后各處理外植體均陸續(xù)誘導(dǎo)出腋芽。培養(yǎng)60d后，6個(gè)處理均能使外植體誘導(dǎo)產(chǎn)生不定芽，但芽數(shù)和誘導(dǎo)率差異顯著，說明不同濃度和配比的6-BA和NAA對(duì)玉玲花莖段出芽誘導(dǎo)影響存在差異。由表4可知，在NAA濃度不變時(shí)，不定芽數(shù)量和誘導(dǎo)率在6-BA濃度0.5-1.5mg·L-1范圍內(nèi)，隨其濃度的增加而增加，且以6-BA1.5mg·L-1+NAA0. 5mg·L-1處理下最高，分別為78.59和87.33%。在6-BA濃度一定時(shí)，不定芽誘導(dǎo)效果以NAA濃度0.5mg·L-1好于1.0mg· L-1?？梢姡窳峄ㄇo段作外植體進(jìn)行不定芽誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基配方為MS+6-BA1.5mg·L-1+NAA0.5mg·L-1。

表4 不同培養(yǎng)基與激素配比對(duì)不定芽誘導(dǎo)分化的影響

（2）不同濃度激素配比玉玲花腋芽增殖的影響。由表5可以看出，6-BA與NAA的配比有利于玉玲花腋芽增殖。在6-BA濃度相同時(shí)，高濃度的NAA較低濃度的不利于腋芽增殖；在1-3mg·L-1范圍內(nèi)，腋芽增殖數(shù)及增殖系數(shù)隨6-BA濃度的增加呈現(xiàn)逐漸增加的趨勢(shì)，在6-BA濃度3 mg·L-1時(shí)，NAA3mg·L-1+NAA0.1mg·L-1處理腋芽增殖數(shù)及增殖系數(shù)分別為646和4.31，NAA3mg·L-1+NAA0.5mg·L-1分別為 593和3.96，雖然此時(shí)兩處理腋芽增殖數(shù)及增殖系數(shù)高于其他處理，但此時(shí)兩處理的莖尖有一半以上發(fā)生玻璃化現(xiàn)象，可見高濃度的 6-BA（3mg·L-1） 并不是最佳的腋芽增殖濃度。MS+6-BA2mg·L-1+NAA0.1mg·L-1處理下，腋芽生長(zhǎng)健壯，簇生致密。綜合比較可知，玉玲花腋芽增殖的最佳培養(yǎng)基配方為MS+6-BA2mg·L-1+NAA0.1mg·L-1，腋芽增殖數(shù)及增殖系數(shù)分別為478和3.19。

表5 不同濃度激素配比對(duì)玉玲花腋芽增殖的影響

（3）不同濃度6-BA和NAA配比對(duì)組培苗生根效果的影響。由表6可知，不同激素濃度配比對(duì)玉玲花組培苗生根誘導(dǎo)效果影響不同，根條數(shù)在33～39，生根率在73.33%～86.67%，平均根長(zhǎng)在0.75～1.25cm。6-BA濃度0.4mg·L-1的3個(gè)處理根條數(shù)、生根率和平均根長(zhǎng)均對(duì)應(yīng)高于6-BA濃度0.2mg·L-1的3個(gè)處理，說明6-BA濃度0.2-0.4mg·L-1是適宜玉玲花生根培養(yǎng)的濃度范圍；隨NAA濃度由0.4增加1.2mg·L-1時(shí)，根條數(shù)、生根率和平均根長(zhǎng)同樣呈現(xiàn)逐漸上升的趨勢(shì)，說明在NAA濃度0.4-1.2mg·L-1是適宜玉玲花生根培養(yǎng)的濃度范圍。綜合表現(xiàn)以處理下，生根培養(yǎng)效果最好，所以玉玲花生根培養(yǎng)最佳培養(yǎng)基配方為MS+6-BA0.4mg·L-1+NAA1.2mg·L-1，生根數(shù)、生根率和平均根長(zhǎng)分別為39、86.67%和1.25。

表6 不同濃度激素對(duì)組培苗生根效果的影響

3 結(jié)論與討論

細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素的濃度及配比對(duì)培養(yǎng)基中外植體芽的誘導(dǎo)和分化起決定作用。本研究認(rèn)為，玉玲花莖段作外植體進(jìn)行不定芽誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基配方為MS+6-BA1.5mg·L-1+NAA0.5mg·L-1。洪森榮等研究認(rèn)為，可通過調(diào)控細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素的濃度及比值來調(diào)控分化為芽或根，細(xì)胞分裂素/生長(zhǎng)素的比值大時(shí)有利于芽的形成，本試驗(yàn)不定芽誘導(dǎo)最佳激素配比的6-BA/NAA值較其他處理大，證實(shí)了這一論斷。

腋芽增殖是短時(shí)間獲取大量組培苗的有效途徑，而影響其增殖效果的關(guān)鍵因素是培養(yǎng)基中外源激素的濃度和配比。本研究結(jié)果表明，玉玲花腋芽增殖的最佳培養(yǎng)基配方為MS+6-BA2mg·L-1+NAA0.1mg·L-1。

遺傳基因決定植株生根能力，但外源激素和外界環(huán)境刺激可以通過影響其控制系統(tǒng)對(duì)生根能力產(chǎn)生影響。生長(zhǎng)素的種類和濃度對(duì)植株的生根效果影響顯著。陸飛等研究認(rèn)為在羅漢果生根誘導(dǎo)方面IBA優(yōu)于NAA，并認(rèn)為二者組合會(huì)增強(qiáng)生根誘導(dǎo)的生理功效。蔣小滿等對(duì)矮生一品紅組培苗生根誘導(dǎo)時(shí)，得出IBA0.2mg·L-1+NAA0.05mg·L-1可使生根率達(dá)到100%，且發(fā)根質(zhì)量好。本研究認(rèn)為，玉玲花生根效果最好的培養(yǎng)基配方為MS+6-BA0.4mg·L-1+NAA1.2mg·L-1，在該配方下發(fā)生快，根系健壯?？梢姡庠醇に乜墒共煌参锂a(chǎn)生不同的生根效果，這可能是因?yàn)橥庠醇に卮碳ち酥参矬w內(nèi)與生根有關(guān)酶的活性，或者是直接刺激了生根基因的表達(dá)。

［1］洪森榮，肖波，江靜.KT和NAA對(duì)鐵皮石解帶芽草段生長(zhǎng)發(fā)育的影響［J］.江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，（1）：55-56.

［2］陸飛，唐燕梅，韋鵬宵，等.不同激素組合對(duì)羅漢果‘桂青1號(hào)’生根誘導(dǎo)的影響［J］.中國(guó)園藝文摘，2013，（7）：3-5.

［3］蔣小滿，柏新富，趙建萍，等.矮生一品紅組培苗的生根誘導(dǎo)研究［J］.北方園藝，2003，（6）：62-63.

Study on High Efficiency and Rapid Propagation Technology of Yuling Flowers

CHEN Tian-tian1，MA M ing2，WANG Feng-xiang1，ZHENG Fu-shan3
（1.Laiwu Vocational and Technical College，Laiwu，Shandong 271100，China；2.Shandong Xingshui Water Conservancy Technology Industry Co.，Ltd.，Jinan，Shandong 250013，China；3.Shandong Rivers and Wetlands Ecology Research Institute，Laiwu，Shandong 271100，China）

The effects of exogenous hormones 6-BA and NAA on the rapid propagation of Yuling flowers were studied by using theexplantsofYuling flowersasexplants，whichaimsto findouttheoptimummedium formulaofadventitiousbudsinduction，axillary budsand rooting cultureofYuling flowers.The resultsshowed thattheoptimal medium for the proliferation of axillary buds was MS+ 6-BA2mgo L-1+NAA0.1mgo L-1，thenumberofaxillarybudsand themultiplication coefficientswere478and 3.19 respectively.The optimummedium foraxillarybud proliferationwasMS+6-BA2mgo L-1+NAA0.1mgo L-1，and thenumberofaxillarybudsand proliferation were 478 and 3.19 respectively.The optimum medium for rooting culture was MS+6-BA0.4 mg o L-1+NAA1.2 mg o L-1，rooting rate，rootingrateandaverage rootlengthwere39，86.67%and1.25 respectively.

Yuling flowers；efficient and rapid propagation；adventitious bud induction；axillary bud proliferation；rooting induction

S685.99

A

2095-980X（2017）06-0109-02

2016-05-14

萊蕪職業(yè)技術(shù)學(xué)院博士基金，萊蕪市現(xiàn)代農(nóng)業(yè)發(fā)展資金2015-96號(hào)。

陳甜甜（1982-），女，博士，講師，主要從事分析化學(xué)研究工作。