趙 瓊 劉曉云 江蘇省丹陽市動物疫病控制中心 212300周 凱 江蘇省丹陽市司徒鎮(zhèn)動物防疫站 212331

某豬場豬沙門氏菌病的診斷和藥敏試驗(yàn)

趙 瓊 劉曉云 江蘇省丹陽市動物疫病控制中心 212300周 凱 江蘇省丹陽市司徒鎮(zhèn)動物防疫站 212331

豬沙門氏菌病又名豬副傷寒，是由豬霍亂沙門氏菌引起的仔豬傳染病。某豬場共飼養(yǎng)168頭豬，有32頭發(fā)病，先后死亡9頭。臨床上主要表現(xiàn)為體溫明顯升高（40～41.5℃），精神沉郁，生長停滯，貧血，腹瀉不止，排出黃綠色惡臭水樣物，后軀粘有灰褐色糞便。初步診斷為豬沙門氏菌病。對分離細(xì)菌進(jìn)行生化試驗(yàn)，進(jìn)一步確診為豬沙門氏菌病。進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)豬沙門氏菌對土霉素、強(qiáng)力霉素和呋喃制劑有較強(qiáng)的敏感性。

豬沙門氏菌??；診斷；藥敏試驗(yàn)

某豬場共飼養(yǎng)100頭豬，有30頭豬發(fā)病，先后死亡8頭，通過臨床癥狀及剖檢初步診斷為豬沙門氏菌病。對分離細(xì)菌進(jìn)行生化試驗(yàn)，進(jìn)一步確診為豬沙門氏菌病。對沙門氏菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，根據(jù)藥物敏感性的判定標(biāo)準(zhǔn)得知，對豬沙門氏菌有較強(qiáng)敏感性的藥物是土霉素、強(qiáng)力霉素和呋喃制劑，中度敏感的藥物有卡那霉素、多粘菌素E和青霉素，不敏感的藥物有鏈霉素、磺胺制劑和氯霉素。

1 發(fā)病情況

2016年6月，丹陽市某豬場共飼養(yǎng)168頭豬，已接種過豬瘟、高致病性藍(lán)耳和口蹄疫疫苗。其中發(fā)病32頭，先后死亡9頭。畜主口述治療3天未見效，病豬主要集中在75～85日齡。

2 臨床癥狀

病豬體溫明顯升高，達(dá)40～41.5℃。精神沉郁，生長停滯，貧血，腹瀉不止，排出黃綠色惡臭水樣物，后軀粘有灰褐色糞便[1]。

3 病理解剖

腸道特別是回腸和大腸黏膜有纖維素性壞死性滲出物，病變突出于腸黏膜，表面粗糙，被覆有柔軟的糠麩樣偽膜，除去偽膜發(fā)現(xiàn)潰瘍。肝有輕微腫大[2]。

4 實(shí)驗(yàn)室診斷

（1）細(xì)菌分離與培養(yǎng)。材料：病料來自臨診時疑似沙門氏菌病的病死豬。對病死豬進(jìn)行解剖，無菌采取肝臟、肺臟作為病原分離材料，根據(jù)需要剪取適當(dāng)大小的組織塊，盛于無菌的容器(如平皿)內(nèi)，在4℃下存放。培養(yǎng)基為麥康凱瓊脂。將各種成分加入蒸餾水中均勻混合制成，pH7.3±0.2。三糖瓊脂。除酚紅指示劑外，將各成分加熱溶解，調(diào)至pH7.4，然后加入酚紅指示劑，分裝試管，121℃高壓滅菌15分鐘，制成分層較厚的斜面。

沙門氏菌增菌液(四硫磺酸鹽煌綠增菌液)。具體制備方法如下：

基礎(chǔ)液。除碳酸鈣外，將各成分加入蒸餾水中，攪混均勻，靜置約10分鐘，加熱煮沸至完全溶解，再加入碳酸鈣，調(diào)至pH7.0±0.1，高壓滅菌20分鐘。

硫代硫酸鈉溶液。硫代硫酸鈉(含5個結(jié)晶水)，將蒸餾水加至100mL，高壓滅菌20分鐘。

碘溶液。將碘化鉀充分溶解于少量蒸餾水中，再投入碘片，搖動玻瓶至碘片完全溶解為止，然后加蒸餾水至規(guī)定的總量，存于褐色瓶內(nèi)，塞緊瓶塞備用。

煌綠水溶液。將煌綠放入蒸餾水中，充分溶解后存放于暗處1天，使其自然滅菌。

牛膽鹽溶液。將牛膽鹽放入蒸餾水中，加熱煮沸至完全溶解，高壓滅菌20分鐘。

制備。臨用前按上列順序無菌操作依次加入基礎(chǔ)液中，每加入一種成分搖勻，然后再加入另一種成分。最后分裝于滅菌玻璃瓶內(nèi)，每瓶100mL或25mL。

方法。細(xì)菌分離。接種時先用燒灼滅菌的手術(shù)刀片燒烙組織表面滅菌，然后在燒烙處用燒灼滅菌的手術(shù)刀片切開組織，并取一塊組織直接放入沙門氏菌增菌液中，37℃恒溫需氧培養(yǎng)18～24小時。用燒灼滅菌的接種環(huán)挑取增菌培養(yǎng)物,劃線接種麥康凱瓊脂平板。連續(xù)劃線法。右手按接種環(huán)，通過火焰滅菌，冷卻后挑取標(biāo)本少許。左手持起培養(yǎng)基平板，先將標(biāo)本涂于瓊脂平板的一角，然后用接種環(huán)從涂布部位開始，向左向右并逐漸向下移動，連續(xù)劃出若干條分散的平行線。劃線完畢后倒置(瓊脂平板的低部向上)，37℃恒溫需氧培養(yǎng)18～24小時，取出觀察細(xì)菌生長情況。

細(xì)菌的純培養(yǎng)。取出上述接種的麥康凱瓊脂平板，選擇典型灰白色菌落做純培養(yǎng)。用燒灼滅菌的接種環(huán)小心挑取單個菌落移種于麥康凱瓊脂平板，用接種環(huán)先將培養(yǎng)物涂布在平板第一區(qū)并作數(shù)次劃線，再在二、三、四區(qū)依次用接種環(huán)劃線，每劃一個區(qū)域，將接種環(huán)燒灼1次，待冷卻后再劃下一個區(qū)域，每一區(qū)域的劃線應(yīng)接觸上一區(qū)域的接種線2～3次，使菌量逐漸減少，以形成單個菌落。劃線完畢后倒置，37℃恒溫需氧培養(yǎng)18～24小時后，于4℃條件下存放。

結(jié)果與分析。共分離6株疑似沙門氏菌，在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上37℃培養(yǎng)24小時，均形成圓形、光滑、邊緣整齊、稍隆起、濕潤的菌落。革蘭氏染色鏡檢，可見兩端鈍圓、中等大小的直桿菌，革蘭氏陰性菌無夾膜、不形成芽孢、有鞭毛、能運(yùn)動。

（2）生化試驗(yàn)。材料：葡萄糖、麥芽糖、甘露醇、乳糖、蔗糖微量生化管，購自于長沙佳格生物技術(shù)有限公司。方法：糖（苷、醇）類發(fā)酵實(shí)驗(yàn)原理。不同細(xì)菌含有不同發(fā)酵糖類的酶，分解糖的能力各不相同，產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物也隨細(xì)菌種類而異。觀察細(xì)菌能否分解各類單糖（葡萄糖）、雙糖（麥芽糖、乳糖、蔗糖）和醇類（甘露醇），是否產(chǎn)酸或產(chǎn)氣。

實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果判定。無菌操作，用接種針取純培養(yǎng)的待檢菌接種于各糖類微量發(fā)酵管，倒置于37℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)18～24小時觀察結(jié)果。如細(xì)菌能分解此種糖類產(chǎn)酸，則指示劑呈酸性變化，發(fā)酵管中顏色發(fā)生改變；不分解此種糖類，則無顏色變化；產(chǎn)氣可見倒置的小管內(nèi)出現(xiàn)氣泡。

5 結(jié)果與分析

表1 生化實(shí)驗(yàn)結(jié)果

糖類及醇測驗(yàn)結(jié)果見表1。6株均產(chǎn)酸產(chǎn)氣，符合沙門氏菌的生化特征。

（3）吲哚實(shí)驗(yàn)。方法：有些細(xì)菌如大腸桿菌、沙門氏菌等具有色氨酸酶，能分解培養(yǎng)基中蛋白胨中的色氨酸，生成丙酮酸、靛基質(zhì)(吲哚)、氨等并產(chǎn)生能量。靛基質(zhì)與試劑中的對二甲氨基苯甲醛發(fā)生作用，生成玫瑰吲哚而呈紅色，為陽性。

取待檢菌純培養(yǎng)物接種至5mL蛋白胨水培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)3～5天。先加少量乙醚，搖動試管以萃取和濃縮吲哚，待其浮出培養(yǎng)液表面后，再沿管壁徐徐加入歐-波二氏試劑數(shù)滴，查看反應(yīng)結(jié)果。

結(jié)果與分析。試管的接觸面呈紅色為陽性反應(yīng)，可以更加準(zhǔn)確地確定6株均為沙門氏菌。

（4）藥敏試驗(yàn)。材料：土霉素、氯霉素、鏈霉素、卡那霉素、強(qiáng)力霉素、磺胺制劑等藥敏紙片，購自于杭州微生物試劑有限公司。方法：沙門氏菌對抗菌類藥物（抗菌素、磺胺類及中藥等）的敏感性各異，而且在抗菌藥物使用不當(dāng)時，常導(dǎo)致抗藥性的產(chǎn)生，對抗體反而造成不良作用。所以在對沙門氏菌（其他細(xì)菌也如此）疾病的防治過程中，如能對分離的菌株做藥敏實(shí)驗(yàn)，選用具有高度抑制能力的藥物則可明顯提高治療效果。

實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果判定。于純培養(yǎng)平板上，將待測菌液或挑取單個菌落均勻涂布于普通營養(yǎng)瓊脂平板內(nèi)，用無菌小鑷子夾取各種藥敏試片，平貼于瓊脂表面。然后倒置并37℃培養(yǎng)24小時平板，取出后仔細(xì)觀察在藥敏紙片周圍有無抑菌圈形成，按抑菌圈直徑的大小可判定菌株對各藥敏紙片的敏感性。

結(jié)果與分析。豬沙門氏菌藥物敏感性見表2。

表2 藥敏實(shí)驗(yàn)的菌落抑制直徑

根據(jù)藥物敏感性的判定標(biāo)準(zhǔn)得知，對豬沙門氏菌有較強(qiáng)敏感性藥物有土霉素、強(qiáng)力霉素、呋喃制劑，中度敏感的藥物有卡那霉素、多粘菌素E、青霉素，低度敏感的藥物有鏈霉素、磺胺制劑、氯霉素。

6 討論

（1）預(yù)防。豬沙門氏菌病防治的重要環(huán)節(jié)在于加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，消除發(fā)病誘因。要讓初生仔豬早吃初乳。斷奶分群時不要突然改變環(huán)境，豬群可盡量分小一些。在斷奶前后（1個月以上）應(yīng)給仔豬口服仔豬副傷寒凍干疫苗。仔豬副傷寒菌苗口服一般沒有反應(yīng)或反應(yīng)很小，可將仔豬副傷寒凍干弱毒菌苗用20%氫氧化鋁稀釋，肌肉注射1mL，免疫期達(dá)9個月。注射免疫后有的豬出現(xiàn)減食、體溫升高、局部腫脹及嘔吐和腹瀉等癥狀，一般1～2日即可自行恢復(fù)，嚴(yán)重者需注射腎上腺素急救。以應(yīng)用本群和從當(dāng)?shù)胤蛛x的菌株制成的單價滅活疫苗效果為好，而應(yīng)用滅活多價苗效果不理想。在該病流行地區(qū)，應(yīng)定期給仔豬進(jìn)行接種。

發(fā)生該病后，要將病豬隔離治療，對污染的豬舍徹底消毒。耐過的豬多數(shù)帶菌，應(yīng)隔離肥育或予以淘汰。病死的豬不準(zhǔn)食用，以防食物中毒。

（2）藥物治療。豬沙門氏菌病對抗菌類藥物(抗菌素、磺胺類及中藥等)的敏感程度各異，而且在抗菌藥物使用不當(dāng)時，常導(dǎo)致抗藥性的產(chǎn)生，對抗體反而造成不良作用。所以在沙門氏菌病的防治過程中，如能對分離的菌株做藥敏實(shí)驗(yàn)，選用具有高度抑制能力的藥物則可明顯提高治療效果。通過此次豬沙門氏菌病的藥敏測試得到如下結(jié)果，即對該豬場患豬的藥物治療，應(yīng)選用對豬沙門氏菌病有較強(qiáng)敏感的藥物土霉素、強(qiáng)力霉素、呋喃制劑；對中度敏感的藥物卡那霉素、多粘菌素E、青霉素，可以適當(dāng)選用；對不敏感的藥物氯霉素、磺胺制劑、鏈霉素則不能使用。

[1]賈玉梅,梁玉發(fā),梁明偉.豬沙門氏菌病的臨床診治[J].河南畜牧獸醫(yī),2004,12:41.

[2]李國徽,田兵.豬沙門氏菌病的診斷與防治[J].畜牧獸醫(yī)科技信息,2011,11:69.