方 東

(洛陽市婦女兒童醫(yī)療保健中心生殖醫(yī)學研究所，河南 洛陽 471000)

精子DNA完整率對卵胞漿內(nèi)單精子注射術結局的影響

方 東

(洛陽市婦女兒童醫(yī)療保健中心生殖醫(yī)學研究所，河南 洛陽 471000)

目的 探討精子DNA完整率對卵胞漿內(nèi)單精子注射術(ICSI)結局的影響。方法 選取行ICSI治療的50對不孕不育夫妻，采用DNA吖啶橙染色法(AOT)對精子DNA完整性進行分析。以精子DNA碎片指數(shù)(DFI)<15%者為低DFI組(n=31)，DFI>30%者為高DFI組(n=19)，觀察精子DNA完整率對ICSI結局的影響。結果2組受精率比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，高DFI組早期卵裂率、優(yōu)質(zhì)胚胎率及妊娠率顯著高于低DFI組(P<0.05)。結論 低精子DNA完整率對ICSI的早期卵裂率、胚胎發(fā)育以及妊娠率具有不良的影響，因此在行ICSI術前首先應評估精子DNA完整性。

卵胞漿內(nèi)單精子注射術； 精子； DNA完整率； 胚胎質(zhì)量

精子DNA損傷受多種因素影響，藥物與放化療、生殖道炎癥、睪丸部高溫以及激素水平等均是其常見因素，精子DNA損傷是導致不孕不育發(fā)生的新的影響因素[1]。卵胞漿內(nèi)單精子注射術(ICSI)為患者生育帶來希望，其可通過人工受精提高受精率，使其順利妊娠，但相關研究顯示[2]，目前我國ICSI成功率僅為30%，且治療費用高，術后不良妊娠結局多，從而很大程度上限制了輔助生殖技術的應用，同時臨床僅通過常規(guī)精液分析，并不能對男性生育能力和不育原因做出判斷[3]。因此本研究主要通過ICSI治療的男方精子DNA完整性損傷及精子DNA片段指標的研究，觀察精子DNA完整率情況對ICSI結局的影響，將結果報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年6月至2016年6月于洛陽市婦女兒童醫(yī)療保健中心行ICSI的50對不孕不育夫妻為研究對象。納入標準：1)具有不孕不育情況，男性病理檢查結果顯示少精或無精，女方經(jīng)病理以及B超檢查顯示卵巢功能正常；2)女性年齡≤檢查歲；3)簽訂知情同意書并積極配合者。排除標準：1)不符合上述納入標準者；2)女方無輸卵管積水或其他影響研究結果的疾??；3)不能完整完成本研究者。根據(jù)DNA吖啶橙染色法(AOT)對患者的精子進行檢測，分析精子DNA的相關情況，以DNA碎片指數(shù)(DFI)<15%者為低DFI組(31例)；DFI>30%者為高DFI組(19例)。

1.2 治療方法

1.2.1 精子采集及完整率檢測

2組男性患者均清潔外陰并手淫取精，將精子置于無菌容器內(nèi)，離心取其底部沉淀，加入COOK精子洗滌液3 mL洗滌2次并重新離心，調(diào)整精子密度涂片觀察，將數(shù)滴吖啶橙染液對玻片進行染色5 min，運用40倍熒光顯微鏡觀察精子整體情況并進行分析，正常的雙鏈DNA精子呈綠色熒光，變性或斷裂者為紅色或橙色，統(tǒng)計各種顏色的比例，得出DFI。

1.2.2 ICSI過程

使用促性腺激素促進女方排卵，使用后檢測卵泡發(fā)育，當卵泡直徑>18 cm時取卵并在培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。卵子成熟后進行ICSI操作：去除卵子卵丘結構，選擇MⅡ卵進行顯微注射，觀察受精卵的受精情況、卵裂情況、并選擇性移植優(yōu)質(zhì)胚胎，于移植半月后行尿常規(guī)檢查，結果顯示為陽性者20 d后行B超檢查，觀察子宮內(nèi)是否有孕囊或胎心搏動，觀察妊娠情況。

1.2.3 觀察項目

觀察并記錄2組妊娠數(shù)、受精數(shù)、早期卵裂數(shù)以及優(yōu)質(zhì)胚胎數(shù)。以卵裂球數(shù)≥2為早期卵裂胚，第3天觀察胚胎，卵裂球數(shù)≥胚胎6的Ⅰ級或Ⅱ級為優(yōu)質(zhì)胚胎。其中受精率=受精卵數(shù)/補救ICSI卵數(shù)×100%，卵裂率=卵裂數(shù)/受精總數(shù)×100%，優(yōu)質(zhì)胚胎率=優(yōu)質(zhì)胚胎數(shù)/卵裂數(shù)×100%，妊娠率=妊娠周期數(shù)/總移植周期數(shù)×100%。

1.3 統(tǒng)計學方法

使用SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計、分析，計量資料采用t檢驗；計數(shù)資料采用卡方檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 2組一般資料對比

2組一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表1。

組別n男方年齡/歲女方年齡/歲睪丸體積V/mLFSH/(U·L-1)獲卵數(shù)/個低DFI組3128.56±3.3625.85±3.0531.56±3.597.026±0.11410.15±0.171高DFI組1929.45±3.5226.16±3.1432.12±3.757.152±0.1259.462±0.158t1.2190.4350.8250.2180.587P0.2290.6650.4130.8280.560

2.2 2組ICSI相關結局比較

2組患者的受精率比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，低DFI組早期卵裂率、優(yōu)質(zhì)胚胎率以及妊娠率顯著高于高DFI組(P<0.05)，見表2。

表2 2組ICSI相關結局比較 %(n/n)

3 討論

精子DNA損傷主要表現(xiàn)為DNA雙鏈斷裂以及單鏈形成，其發(fā)生機制與多種因素相關。精子發(fā)生過程中可因凋亡異常啟動異常細胞凋亡程序，或因氧自由基過多導致與DNA結合，使DNA鏈的斷裂[4]。精子DNA損傷是男性不育和女性受孕率降低的重要原因之一[5]。有研究[6]顯示，人類胚胎早期發(fā)育受父本效應影響，其機制是啟動微弱轉錄活性。ICSI主要通過將卵子吸入專業(yè)吸管中進行固定，于顯微鏡下將載有單一精子的空心針插入細胞之中并注射精子，此過程顯示精子DNA損傷對受精的影響不大，但胚胎開始發(fā)育后，胚胎碎片將增多，阻滯卵裂球發(fā)育，導致胚胎發(fā)育不佳，妊娠率較低[7]。

精子DNA完整率是生殖醫(yī)學研究領域的熱點、難點。精子完整率是評價精子功能狀態(tài)的重要指標，相比傳統(tǒng)的精液常規(guī)、精子形態(tài)檢查等更為穩(wěn)定[8]。本研究結果顯示，2組受精率差異不大，但低DFI組早期卵裂率、優(yōu)質(zhì)胚胎率、妊娠率均明顯高于高DFI組(P<0.05)，提示精子DNA完整率與ICSI結局聯(lián)系密切，當DFI>30%時妊娠率將大大降低，妊娠結局也受到一定影響，提示DNA碎片可影響胚胎發(fā)育，選取DFI較低者進行人工受精，可有效提高臨床妊娠成功率。

但由于本研究受資料、地域環(huán)境、方法、操作過程等條件限制，可能會存在統(tǒng)計數(shù)據(jù)不準確或片面性等不足，還需進行大型專業(yè)研究來佐證。

[1] 何泳志,李大文,肖鑫,等.精子DNA完整率和精子頂體完整率及反應率對卵胞漿內(nèi)單精子注射術結局的影響[J].廣東醫(yī)學,2015,53(5):729-731.

[2] 陸金春.精子DNA損傷的相關因素研究進展[J].中華男科學雜志,2015,21(8):675-680.

[3] Wu Y,Kang X,Zheng H,et al.Effect of paternal age on reproductive outcomes of intracytoplasmic sperm injection[J].PLoS One,2016,11(2):e0149867.

[4] 徐秀民,于德新,張志強,等.男性不育患者精子DNA損傷與非整倍體精子的研究[J].安徽醫(yī)科大學學報,2013,56(11):1355-1359.

[5] Ni K,Spiess A N,Schuppe H C,et al.The impact of sperm protamine deficiency and sperm DNA damage on human male fertility:a systematic review and meta-analysis[J].Andrology,2016,4(5):789-799.

[6] 何泳志,李大文,成俊萍,等.精子DNA完整率、精子頂體完整率及反應率對補救卵泡漿內(nèi)單精子注射術的影響[J].南方醫(yī)科大學學報,2016,36(1):140-144.

[7] 肖鑫,李大文,馮剛,等.精子質(zhì)量對不孕不育患者輔助生殖技術選擇的指導作用[J].山東醫(yī)藥,2016,60(4):19-21.[8] Razi M,Sadrkhanloo R A,Malekinejad H,et al.Varicocele time-dependently affects DNA integrity of sperm cells:evidence for lower in vitro fertilization rate in varicocele-positive rats[J].Int J Fertil Steril,2011,5(3):174-185.

(責任編輯：羅芳)

2017-01-12

R714.8

A

1009-8194(2017)07-0055-02

10.13764/j.cnki.lcsy.2017.07.021