章穎　陳曉萌　祝一鳴

摘要 采用菌絲生長速率法測定了7種不同殺菌劑對降香黃檀和油茶炭疽病菌的室內(nèi)毒力效果。結(jié)果表明，98%溴菌腈對降香黃檀和油茶炭疽病菌菌絲生長的抑制作用最強(qiáng)，EC50值分別為0.019 5 mg/mL和0.001 1 mg/mL；其次是97%吡唑醚菌酯和96.8%苯醚甲環(huán)唑；81%氨基寡糖素在供試濃度下幾乎無任何抑制活性。

關(guān)鍵詞 降香黃檀；油茶；炭疽病菌；殺菌劑；毒力測定

中圖分類號 S481+.1 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 1007-5739（2017）14-0099-02

Abstract The mycelium growth rate method was used to determine inhibitory effect of the seven different fungicides against Colletotrichun gloeosporioides from Dalbergia odorifera and Camellia oleifera.The results showed that bromoxynil（98%，w） had the strongest inhibitory activity on Colletotrichun gloeosporioides，and the EC50 values were 0.019 5 mg/mL and 0.001 1 mg/mL，respectively.Pyraclostrobine（97%，w） and difenoconazole（96.8%，w） also showed good antifungal activities on the Colletotrichun gloeosporioides.While the amino-oligosaccharin（81%，w） didn′t show any inhibitory activities under the test concentration.

Key words Dalbergia odorifera；Camellia oleifera；Colletotrichun gloeosporioides；fungicide；toxicity measurement

降香黃檀（Dalbergia odorifera L.），俗稱黃花梨，為豆科蝶形花亞科黃檀屬植物，海南特產(chǎn)，瀕危樹種，所產(chǎn)木材為上等家具良材，其芯材可生產(chǎn)著名中藥材降香，是我國華南地區(qū)的珍貴樹種，具有極高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值[1-5]。油茶（Camellia oleifera Abel.）又名茶子樹、茶油樹，是我國南方重要的經(jīng)濟(jì)林樹種，與油棕、油橄欖和椰子并稱“世界四大木本食用油料樹種”[6-7]，其種子所制茶油中不飽和脂肪酸含量高，對預(yù)防冠心病和動脈粥樣硬化均有良好的作用[8-9]。

炭疽病是廣泛分布在熱帶、亞熱帶甚至溫帶等地區(qū)的一類病害，由炭疽菌屬（Colletotrichum）的多種真菌誘發(fā)，已確認(rèn)包括糧食、蔬菜、果樹、花卉等在內(nèi)600多種植物遭受其危害[10]。炭疽病是降香黃檀和油茶最主要的病害，其病原均為膠孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides）[11-13]。降香黃檀感病后可導(dǎo)致葉片逐漸干枯或穿孔，直至脫落，嚴(yán)重影響植株光合作用以及芯材的形成，且常大面積暴發(fā)，對于降香黃檀行業(yè)的可持續(xù)發(fā)展十分不利[5]。而炭疽病危害油茶后可引起嚴(yán)重落果、落蕾、枝梢枯死，甚至整株衰亡，在油茶栽培區(qū)大面積發(fā)生，造成重大經(jīng)濟(jì)損失[12，14]。本研究采用菌絲生長速率法測定了不同殺菌劑對降香黃檀和油茶炭疽病菌的室內(nèi)毒力效果，以期篩選出有效的殺菌劑，為降香黃檀和油茶炭疽病防治提供重要的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 供試菌種。油茶炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporio-ides Penz.）和降香黃檀炭疽病菌[Colletotrichum gloeospori-oides（Penz.） Sacc]均由華南農(nóng)業(yè)大學(xué)森林保護(hù)教研室提供。上述植物病原真菌菌株長期保存在 4 ℃條件，在活性測定前，需要在PDA平板上對供試真菌進(jìn)行活化培養(yǎng)（25 ℃，暗培養(yǎng)）5～10 d，然后繼代培養(yǎng)1～2次，即可用于活性測定。

1.1.2 供試藥劑。98%嘧菌酯、95%啶酰菌胺、98%溴菌腈、96.8%苯醚甲環(huán)唑、97%吡唑醚菌酯、81%氨基寡糖素、98%福美雙和80%多菌靈，以上藥劑均購自中國農(nóng)科院植保所廊坊農(nóng)藥中試廠，4 ℃避光保存，備用。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 含殺菌劑PDA培養(yǎng)基的制備。用30% DMSO配制7種殺菌劑，制成24.000、12.000、6.000、3.000、1.500、0.750、0.375 mg/mL 7個濃度梯度的母液。用移液槍取1 mL母液注入滅菌后冷卻至約60 ℃的29 mL PDA 培養(yǎng)基中，輕輕搖勻，均勻倒入3個培養(yǎng)皿中，制成含毒平板。其終濃度依次為0.800 0、0.400 0、0.200 0、0.100 0、0.050 0、0.025 0、0.012 5 mg/mL。

1.2.2 供試化學(xué)藥劑對炭疽菌菌絲室內(nèi)毒力的測定。采用菌絲生長速率法中的含毒介質(zhì)培養(yǎng)法[15]，用直徑7 mm的打孔器移取在25 ℃光照培養(yǎng)箱中生長6 d的較為一致的菌落邊緣，使菌絲面朝下接種于經(jīng)不同藥劑處理的含毒培養(yǎng)平板中，每個處理3次重復(fù)，倒置于25 ℃光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。以加入無菌水的培養(yǎng)基為空白對照，以加入30% DMSO為陰性對照，以市場常見商品80%多菌靈為陽性對照，每組對照3次重復(fù)。待生長7 d后，即空白對照菌落生長至培養(yǎng)皿面積2/3時，采用十字交叉法測量不同處理菌落生長直徑，并求出各種化學(xué)藥劑的抑菌率。endprint

計(jì)算公式如下：

抑菌率（%）=（陰性對照純生長量-處理純生長量）/陰性對照純生長量×100；

純生長量=菌落平均直徑-菌餅直徑。

1.2.3 毒力分析，建立毒力回歸方程。計(jì)算出不同濃度下殺菌劑的抑菌率，并將抑菌率根據(jù)生物統(tǒng)計(jì)幾率值換算表換算為幾率值，以殺菌劑濃度的對數(shù)值為橫坐標(biāo)，以抑菌率幾率值為縱坐標(biāo)在Excel中做XY散點(diǎn)圖，并添加趨勢圖，得出毒力回歸方程以及r，并計(jì)算出抑菌中濃度EC50（mg/mL），以此表示殺菌劑對降香黃檀和油茶炭疽病菌抑制作用的強(qiáng)弱[16]。

2 結(jié)果與分析

2.1 對降香黃檀炭疽菌菌絲的室內(nèi)毒力測定

不同供試藥劑對降香黃檀炭疽病菌的抑制效果見圖1、表1?？梢钥闯?，98%溴菌腈對降香黃檀炭疽病菌的抑制作用最強(qiáng)，其EC50值為0.019 5 mg/mL；97%吡唑醚菌酯次之，EC50值為0.025 6 mg/mL；81%氨基寡糖素對降香黃檀炭疽病菌抑制作用最差，EC50值>5 mg/mL。

2.2 對油茶炭疽菌菌絲的室內(nèi)毒力測定

不同供試藥劑對降香黃檀炭疽病菌的抑制效果見圖2、表2?？梢钥闯?，98%溴菌腈對油茶炭疽病菌的抑制作用最強(qiáng)，其EC50值為0.001 1 mg/mL；96.8%苯醚甲環(huán)唑和97%吡唑醚菌酯次之，EC50值分別為0.004 2 mg/mL和0.004 3 mg/mL；81%氨基寡糖素對降香黃檀炭疽病菌抑制作用最差，EC50值>5 mg/mL。

3 結(jié)論與討論

試驗(yàn)結(jié)果表明，7種供試殺菌劑中，除81%氨基寡糖素外，其他6種供試殺菌劑對降香黃檀和油茶炭疽病菌的生長均有抑制作用，但抑菌效果均不如陽性對照80%多菌靈。7種供試殺菌劑對降香黃檀和油茶炭疽病菌的抑制作用具有相似性，其中抑制作用最強(qiáng)的均是98%溴菌腈，EC50值分別為0.019 5 mg/mL和0.001 1 mg/mL；其次是97%吡唑醚菌酯和96.8%苯醚甲環(huán)唑，而81%氨基寡糖素對2種炭疽病菌幾乎無抑制作用。

目前，對于炭疽菌屬真菌的研究報(bào)道較多[17]，但是不同殺菌劑對降香黃檀和油茶炭疽病菌的室內(nèi)毒力測定研究還較少。本研究結(jié)果表明，溴菌腈、苯醚甲環(huán)唑和吡唑醚菌酯等供試藥劑具有極強(qiáng)的抑菌效果，這與楊成德等[18]、韋文添[19]對其他種炭疽菌的研究結(jié)果類似。溴菌腈又名炭特靈，能抑制和鏟除細(xì)菌、真菌及藻類的生長，在國內(nèi)主要應(yīng)用于農(nóng)作物病害的防治和魚塘滅藻及工業(yè)廢水處理，是目前國內(nèi)殺菌劑中防治各類作物炭疽病的特效藥劑[20]。而苯醚甲環(huán)唑又稱噁醚唑，為三唑類殺菌劑，通過抑制真菌和細(xì)菌的細(xì)胞麥角甾醇（是構(gòu)成細(xì)胞膜的重要成分，對細(xì)胞膜的理化性質(zhì)滲透性起重要作用）的生物合成，破壞細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)與功能，從而達(dá)到殺菌目的[21]。炭疽病的防治是一項(xiàng)系統(tǒng)工程，應(yīng)貫徹“防重于治”的方針，以營林措施為基礎(chǔ)，輔之以化學(xué)防治，采用綜合治理的方針。合理使用殺菌劑只是其中的一種手段，本文的研究結(jié)果為以后降香黃檀和油茶炭疽病的防治提供了重要的理論依據(jù)。

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