劉濤瑞，韓利文

(1.山東省實(shí)驗(yàn)中學(xué)，山東 濟(jì)南 250000；2.山東省科學(xué)院生物研究所，山東 濟(jì)南 250014)

蘋果幼果原花青素抗氧化研究

劉濤瑞1，韓利文2

(1.山東省實(shí)驗(yàn)中學(xué)，山東 濟(jì)南 250000；2.山東省科學(xué)院生物研究所，山東 濟(jì)南 250014)

蘋果幼果;原花青素;抗氧化;自由基

1 儀器與材料

分析天平，電熱恒溫水浴鍋，紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)；DPPH、FeSO4、水楊酸、Tris、鄰苯三酚、無(wú)水乙醇、H2O2、HCl等。

2 DPPH·自由基的清除實(shí)驗(yàn)

2.1 反應(yīng)原理

DPPH·是一種穩(wěn)定的自由基，其孤對(duì)電子在517nm附近有深紫色強(qiáng)吸收。當(dāng)加入自由基清除劑后，孤對(duì)電子被配對(duì)，吸收消失或減弱，因此可以根據(jù)吸收減弱的程度來(lái)評(píng)價(jià)自由基清除劑的活性。

2.2 DPPH·儲(chǔ)備液配制

精密取DPPH 39.8 mg定溶于500 mL 50%乙醇中，充分振搖，完全混勻，配成0.2 mol/mL儲(chǔ)備液，避光4℃保存，用時(shí)稀釋一倍。

2.3 DPPH實(shí)驗(yàn)方法

用50%乙醇配置2 mg/mL的蘋果原花青素溶液，分別吸取0.2,0.3,0.4,0.5,0.6 mL兩組于刻度試管中，50%乙醇補(bǔ)齊至2.0 mL向其中一組加入DPPH溶液至2 mL，搖勻30 min后，用50%的乙醇做參比在517 nm波長(zhǎng)下測(cè)其吸光度，即為Ai；向另一組中加入50%乙醇至2 mL，混合后測(cè)其吸光度，即為Aj；同時(shí)測(cè)定2 mL DPPH溶液與2 mL 50%的乙醇混合后的吸光度，即為A0；根據(jù)下列公式計(jì)算清除率SA：DPPH自由基清除率SA(%)=[1-(Ai-Aj)/A0]×100%

3 ·OH自由基的清除實(shí)驗(yàn)

3.1 反應(yīng)原理

H2O2與Fe2+混合會(huì)產(chǎn)生·OH自由基，但由于·OH具有較高反應(yīng)活點(diǎn)，存活時(shí)間短，因此必須在反應(yīng)體系中加入水楊酸，以便可以有效地捕捉·OH自由基，水楊酸與·OH自由基結(jié)合可以產(chǎn)生有色產(chǎn)物，該產(chǎn)物在510 nm處有強(qiáng)吸收，若加入具有·OH自由基清除劑能力的抗氧化劑后，會(huì)與水楊酸爭(zhēng)奪·OH自由基，從而減少有色產(chǎn)物生成量，造成吸光強(qiáng)度的改變。

3.2 ·OH自由基實(shí)驗(yàn)方法

用50%乙醇配置4 mg/mL的蘋果原花青素溶液，吸取0.2,0.4,0.6,0.8,1.0 mL于刻度試管中，50%乙醇補(bǔ)齊至1.0 mL，分別依次加入6 mmol/L FeSO4溶液1mL、6 mmol/L水楊酸溶液1mL搖勻，最后加入6 mmol/L H2O2溶液1mL，搖勻，37℃水浴反應(yīng)30 min后于510 nm 處測(cè)得不同抗氧化劑濃度下的吸光度Ai；如上操作，用50%乙醇代替H2O2時(shí)測(cè)得蘋果原花青素的本底吸光度Aj；同時(shí)用1mL 50%乙醇代替蘋果原花青素測(cè)得空白對(duì)照吸光度A0；清除率SA(%)=[1-(Ai-Aj)/A0]×100%

4.1 反應(yīng)原理

鄰苯三酚在堿性條件下發(fā)生自氧化反應(yīng)，產(chǎn)生穩(wěn)定濃度的超氧陰離子自由基與中間物，中間物又與超氧陰離子自由基反應(yīng)，得到一種帶有顏色的中間產(chǎn)物，此物在紫外有吸收，引起波長(zhǎng)320 nm處吸光值的線性積累，來(lái)反應(yīng)抗氧化劑的清除能力的大小。

Tris溶液：稱取Tris 1.211 g，用水定容至100 mL，得0.1 mol/L Tris溶液。HCl溶液：量取36% 38% HCl 0.429 mL，用水溶解定容至100 mL，得0.05 mol/L HCl溶液，將其稀釋5倍得10 mmol/L HCl溶液。

Tris-HCl緩沖液：加入50 mL 0.1 mol/L Tris溶液和45 mL 0.05 mol/L HCl溶液,混勻，用0.05 mol/L HCl溶液調(diào)到pH值分別為8.2。

鄰苯三酚溶液：稱取0.0378 g鄰苯三酚，用10 mmol/L HCl溶解定容至100 mL,得3 mmol/L鄰苯三酚溶液。

量取pH值為8.2的Tris-HCl緩沖液5 mL分別加入0.5,1.0,1.5,2.0,2.5 mL的4 mg/mL蘋果原花青素溶液，用雙蒸水補(bǔ)充至9.7 mL，置于10 mL比色管中混均，在25℃水浴中保溫20 min，取出后立即加入在25℃預(yù)熱過(guò)的3 mmol/L鄰苯三酚0.3 mL，迅速搖勻后倒入比色皿中，在320 nm波長(zhǎng)處，每間隔1 min測(cè)吸光值一次，共反應(yīng)9 min，以吸光值A(chǔ)對(duì)反應(yīng)時(shí)間t作線性關(guān)系圖，斜率即為Vt,，計(jì)算出抗氧化劑對(duì)超氧陰離子的清除率(Y)。V0為鄰苯三酚自氧化速率。

5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論

5.1 原花青素DPPH清除試驗(yàn)

圖1 原花青素DPPH清除效果

如圖1所示，蘋果原花青素對(duì)DPPH自由基有很好的清除效果，隨著體系中原花青素濃度的增加，DPPH自由基清除能力逐漸增強(qiáng)，說(shuō)明DPPH的清除能力與樣品的濃度呈現(xiàn)較好的量效關(guān)系。樣品濃度從0.1 mg/mL到0.3 mg/mL對(duì)DPPH自由基的清除率從18.6%增大到61.8%；DPPH抑制曲線y = 2.1720x 0.0634，IC50為0.2594 mg/mL。而0.1 mg/mL VC對(duì)DPPH 自由基的清除即達(dá)95.3%。因此，在相同的濃度范圍蘋果原花青素提取物的DPPH清除率低于VC。

5.2 原花青素·OH自由基清除試驗(yàn)

如圖2所示，在測(cè)試濃度范圍內(nèi)(0.2 1.0 mg/mL)，蘋果原花青素對(duì)(·OH)自由基呈現(xiàn)出較好抑制效果；濃度1.0 mg/mL時(shí)(·OH)自由基清除率可達(dá)到69.1%，但隨著樣品濃度，抑制率逐漸增長(zhǎng)緩慢；對(duì)照品Vc濃度0.2 mg/mL時(shí)(·OH)自由基清除率可達(dá)99.3 %，抑制效果也高于樣品。蘋果原花青素·OH自由基抑制曲線y = 0.5685x 0.1793，IC50為0.5641 mg/mL。

圖2 原花青素·OH自由基清除效果

圖3 原花青素自由基清除效果

6 結(jié)論

[1] 王榮姣, 李昭華, 黃紅林, 等. 北陸花青素的抗氧化作用[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué), 2011 , 39 (12) : 7061-7063．

[2] 曹志超, 顧 翔, 蘇佩清. 黃酮類化合物抗氧化及其作用機(jī)制的研究進(jìn)展[J]. 實(shí)用臨床醫(yī)藥雜志, 2009, 13 (13) : 110-112．[3] 王少朋, 劉海英,楊曉翠,等. 菊花花青素的粗提及其對(duì)DPPH·的清除作用[J]. 西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào), 2010, 19(9): 109-113．

[4] 余 晶, 鮑中英, 徐玉敏, 等. 花青素抗氧化損傷及細(xì)胞凋亡的作用研究[J]. 中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志, 2009 , 19 (1) :24-26.

[5] 徐 芃, 劉東成. 茶多酚抗氧化和抑菌機(jī)制的研究[J]. 中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào), 2008 , 5 (23) :21-22．

[6] 毛麗超, 陳斯, 陳冰. BRA-90 花青素的生物活性研究[J]. 吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院學(xué)報(bào), 2011 , 20 (3) :8-10．

[7] 郭新明, 吳麗君,武寶愛(ài),等. 花青素及運(yùn)動(dòng)對(duì)人體抗氧化能力影響的研究[J]. 搏擊(體育論壇), 2011 ( 12): 79-81.

(本文文獻(xiàn)格式：劉濤瑞，韓利文.蘋果幼果原花青素抗氧化研究[J].山東化工，2017，46(10)：55-56,61.)

Study on Antioxidant Procyanidins in Apple Fruit

LiuTaorui1,HanLiwen2

(1. Shandong Experimental High School,Jinan 250010,China;2. Biological Institute of Shandong Academy of Sciences, Jinan 250010,China)

apple fruit; procyanidins; antioxidant; free radical

2017-04-15

劉濤瑞(2001—)，山東濟(jì)南人， 學(xué)生；通訊作者：韓利文(1980—)，山東濟(jì)南人，副研究員，博士，主要從事斑馬魚藥物篩選評(píng)價(jià)、藥物代謝組學(xué)等研究。

S663.9

A

1008-021X(2017)10-0055-02