楊 濤，王博誠，鄧碧珊，王玲玲，楊鳳鮮，李桂銀，周治德

(桂林電子科技大學 生命與環(huán)境科學學院，廣西 桂林 541004)

木槿提取工藝及抗氧化作用研究

楊 濤，王博誠，鄧碧珊，王玲玲，楊鳳鮮，李桂銀，周治德

(桂林電子科技大學 生命與環(huán)境科學學院，廣西 桂林 541004)

采用超聲提取、過濾、濃縮將木槿葉的有效成分提取,經過大孔樹脂吸附、洗脫、分離純化，通過紫外分光光度法測定總酚含量。采用單因素實驗、正交試驗考察各種因素對總酚提取率的影響。實驗表明：當使用超聲波輔助提取時,木槿葉提取總酚在溫度為70℃、配料比為1:50、乙醇濃度為50%、提取時間為50分鐘時效果最佳；抗氧化作用也隨著總酚濃度的增加而增加,具有很明顯的線性關系，對DPPH自由基清除作用很強。

木槿；黃酮；提取；抗氧化

木槿是落葉灌木,屬錦葵科木槿.木槿葉中含有蒽醌類化合物，包括大黃素甙,大黃素,大黃酚,槲皮素等二十多種成分[1-3]。這些物質能促進腸內肌肉收縮,使腸內細菌分解和活化,加快腸道蠕動,具有通便利尿的作用[4-5]。木槿葉還含有黃酮類化合物，包括槲皮素；這些化合物的抗氧化能力比維生素E的抗氧化能力還要強十倍以上。槲皮素的抗腫瘤活性,比如對Erhlich實體瘤細胞、白血病細胞、HeLa細胞、人乳腺癌細胞、胃癌細胞、人神經膠質瘤細胞和人咽癌細胞等多種惡性腫瘤細胞均具有體外抑制生長作用，主要通過抑制腫瘤細胞增殖、促進腫瘤細胞調亡、抑制腫瘤細胞血管生成、抗氧化和抗自由基、提高機體免疫力等多種途徑來實現(xiàn)[6-8]。

本論文利用乙醇從木槿葉中提取黃酮的效率,建立木槿葉中黃酮的提取方法, 黃酮含量以總酚計，確定提取黃酮的最佳條件組合,測定總酚的含量,進行抗氧化實驗,對木槿葉提取物的體外抗氧化活性進行評價。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

原料試劑：干木槿葉，乙醇、濃鹽酸、氫氧化鈉、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)，二甲基亞砜(DNSO)、沒食子酸、碳酸鈉、福林酚、硫酸亞鐵、水楊酸，分析純。

LX-700B型大孔樹脂儀器：DS-1型高速組織搗碎機，SB-5200D 超聲波清洗機，RE-5213 旋轉蒸發(fā)器，層析柱，75ZN 紫外-可見分光光度計， LG16-WA高速離心機 TMP-2電子天平，HHS 數(shù)顯電熱恒溫水浴鍋。

1.2 木槿葉提取分離工藝[9-10]

前處理→超聲波醇提→DM130大孔樹脂吸附→洗脫→濃縮→干燥→DPPH抗氧化試驗。

1.3 木槿葉提取、抗氧化實驗操作要點

1.3.1 木槿葉提取

取木槿葉粉碎，調節(jié)乙醇濃度，加乙醇水溶液，用超聲波破碎儀超聲(功率100W)輔助提?。挥秒x心機離心，取離心液棄殘渣，得到黃棕色提取液；用旋轉蒸發(fā)儀濃縮，濃縮液用DM130樹脂柱吸附、洗脫；收集洗脫液，濃縮，烘干得到提取物；稱重，檢測，計算提取率和黃酮含量。

通過單因素試驗，確定了溫度、料液比、乙醇濃度和提取時間4個主要影響提取的因素，每個因素選取三個水平,以提取液中總酚的含量作為質量評價標準,制定四因素三水平的L9(34)正交實驗表，因素水平表見表1。

表1 正交試驗因素水平表

1.3.2 DPPH自由基抗氧化試驗[11-12]

取木槿提取物，用DMSO溶解，配制成濃度為3,4.5,6,7.5,9mg/mL的待測液。DPPH用無水乙醇配制成0.16 mmol/L，置于棕色瓶中備用。取5支干凈的比色管分別加入5μL 0.16 mmol/L的DPPH溶液，再取不同濃度的樣品溶液100μL分別加入比色管中，加入4.9mL蒸餾水，反應體系為10mL。加樣后室溫振蕩15 min，用紫外分光光度計在517 nm波長處檢測樣品吸光度(As1、 As2 、As3、 As4 、As5)；取100μL DMSO代替樣品溶液測得空白吸光度(Ao)；以5mL無水乙醇代替DPPH溶液測得樣品本底吸光度(Ac1、Ac2、Ac3、Ac4、Ac5)，計算清除率，繪制趨勢圖。清除率=[A0-(As-Ac)]÷A0×100%

1.4 黃酮(以沒食子酸計)含量測定的原理和步驟[13]

1.4.1 實驗原理：利用福林酚法1.4.2 實驗步驟

取沒食子酸標準品(0.208mg/mL)0,50,100,200,300,400μL于比色管中,加水至2.5mL,再加福林酚2.5mL，反應3min,再加加Na2CO3(100mg/mL)溶液2.5mL,反應5小時,取出。用紫外分光光度計在570nm處測吸光度,吸光度測三次取平均值。

2 實驗數(shù)據與分析

2.1 提取正交實驗

以提取液中黃酮的含量作為質量評價標準,以溫度、料液比、乙醇濃度和時間為4個因素，按照因素水平表1做正交試驗，實驗結果見表2。

表2 正交試驗數(shù)據分析表

從表2中可以看出, A3B2C1D2為最佳組合，即溫度為70℃、料液比為1:50、乙醇濃度為50%、提取時間為50min為木槿葉粉末提取黃酮的最佳組合。按照最佳組合又進行2次平行提取實驗, 黃酮提取率分別為4.27%、4.77%。

2.2 DPPH清除率實驗數(shù)據

采用最佳提取條件，將木槿葉進行提取分離得到木槿提取物，其中黃酮含量為4.77%，按照DPPH自由基抗氧化試驗方案做實驗，DPPH清除率及吸光度表見表3，樣品濃度與DPPH自由基清除率線性關系見圖1。

表3 DPPH清除率及吸光度表

圖1 樣品濃度與DPPH自由基清除率線性圖

由表3和圖1可以看出：木槿黃酮的濃度與自由基的清除率具有良好的線性關系,表明木槿黃酮對DPPH自由基有很強的清除作用。

3 結論

(1)木槿葉提取黃酮，以總酚含量為指標，通過單因素試驗和正交試驗，確定了木槿葉提取的因素和水平，確定工藝參數(shù)，結果表明：木槿提取的最佳條件組合為：溫度70℃、料液比1:50、乙醇濃度50%、提取時間50min。

(2)木槿提取物的抗氧化作用，采用DPPH自由基清除試驗,隨著總酚濃度的上升,自由基清除率上升明顯,清除自由基作用很強。

(3)下一步將用不同的方法純化提取物,提高提取物中黃酮含量。將其他抗氧化物與木槿提取物的抗氧化能力進行比較。利用高效液相等方法探究提取物中的具體成分及含量。

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(本文文獻格式：楊 濤，王博誠，鄧碧珊，等.木槿提取工藝及抗氧化作用研究[J].山東化工，2017，46(12)：24-26.)

Research on Hibiscus Extraction Technology and Antioxidant

YangTao,WangBocheng,DengBishan,WangLingling，YangFengxian,LiGuiyin,ZhouZhide

(School of Life and Environmental Sciences of Guilin University of Electronic Technology，Guilin 541004，China )

The paper by ultrasonic extraction, filtration, concentration of Hibiscus leaf effective components extracted, by macroporous adsorption resin adsorption, elution, the isolated flavonoids. The absorbance was measured by UV spectrophotometer. The total phenolic content and antioxidant capacity were calculated and analyzed. The effects of various factors on the extraction rate of flavonoids were investigated by single factor experiment and orthogonal test. Experiments show that when using ultrasonic assisted extraction and Hibiscus syriacus L.leaves extraction flavonoids in temperature is 70℃, the ratio of raw materials for 1:50, ethanol concentration for 50%, extraction time is 50 minutes best effect; and antioxidant effect also with flavonoids concentration increase and increase, has obvious linear relation; the flavonoids on DPPH free radical scavenging effect strong and on superoxide radical scavenging role generally stronger.

hibiscus; flavonoids; extraction; antioxidant

2017-04-22

廣西科技廳項目(桂科重1598005-3，2016GXNSFAA380011)，大學生創(chuàng)新項目(C66JWA24SM17)廣西代謝性疾病研究重點實驗室開放基金項目(2015-181h-01)

楊 濤(1995—)，研究方向：植物提取;通信作者：周治德(1971—)，高工，研究方向：植物提取與知識產權。

TQ91

A

1008-021X(2017)12-0024-03