白紅妍，付明磊，羅琴，周先麗，黃曉，蘇小建，程柳，李遠(yuǎn)遠(yuǎn)，梁成欽，*

（1.桂林醫(yī)學(xué)院廣西高校生藥學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西桂林541004；2.廣西師范大學(xué)環(huán)境與資源學(xué)院，廣西桂林541004；3.中國(guó)有色桂林礦產(chǎn)地質(zhì)研究院有限公司，廣西桂林541004）

氣-質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定羅漢果中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留

白紅妍1，付明磊1，羅琴1，周先麗1，黃曉1，蘇小建2，程柳3，李遠(yuǎn)遠(yuǎn)1，梁成欽1，*

（1.桂林醫(yī)學(xué)院廣西高校生藥學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西桂林541004；2.廣西師范大學(xué)環(huán)境與資源學(xué)院，廣西桂林541004；3.中國(guó)有色桂林礦產(chǎn)地質(zhì)研究院有限公司，廣西桂林541004）

建立氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（gas chromatography-mass spectrometry，GC-MS）測(cè)定羅漢果中11種常用有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量的方法。樣品經(jīng)石油醚-丙酮（體積比2∶1）超聲提取，提取物通過(guò)活性炭?jī)艋筮x用HP-5MS毛細(xì)管柱對(duì)11種有機(jī)磷農(nóng)藥進(jìn)行分離，GC-MS檢測(cè)，外標(biāo)法計(jì)算含量。11種有機(jī)磷農(nóng)藥在線性范圍內(nèi)（10 μg/L～750 μg/L），相關(guān)系數(shù)均大于 0.999 0，檢出限為 LOD 為 0.432 μg/L～3.901 μg/L。樣品 3 個(gè)加標(biāo)水平（0.125、0.25、0.375 μg/g）下，羅漢果中11種有機(jī)磷農(nóng)藥回收率均在83.3%～112.4%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD，n=6）為1.45%～8.28%。

氣質(zhì)聯(lián)用法；有機(jī)磷農(nóng)藥；羅漢果

作為一種高效的殺蟲(chóng)劑，有機(jī)磷農(nóng)藥（organophosphorus pesticides，OPPs）是我國(guó)使用最多、應(yīng)用最廣的一類(lèi)人工合成的磷酸酯類(lèi)農(nóng)藥[1]，在農(nóng)作物種植和中藥材栽培過(guò)程中廣泛使用。這類(lèi)農(nóng)藥品種多、藥效高、用途廣、易分解，大量使用會(huì)在農(nóng)作物中產(chǎn)生蓄積作用，對(duì)人畜造成潛在的健康威脅的同時(shí)也會(huì)污染環(huán)境。隨著綠色產(chǎn)品的關(guān)注，產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留越來(lái)越受到人們的重視，美國(guó)和歐盟等國(guó)家對(duì)產(chǎn)品中有機(jī)磷殘留提出較高的限量要求[2]。羅漢果為廣西的特產(chǎn)，主產(chǎn)于廣西永福、臨桂和龍勝等縣，歷史已久，被衛(wèi)生部列為藥食兩用名單中，其性涼味甘，具有清熱涼血、祛火止咳、潤(rùn)腸通便、抗炎鎮(zhèn)痛、抑菌等功效[3]。羅漢果以?xún)?yōu)良品質(zhì)和產(chǎn)量大而成為揚(yáng)名國(guó)內(nèi)外的廣西特產(chǎn)[4]。因此，建立羅漢果中11種常見(jiàn)有機(jī)磷農(nóng)殘分析方法具有重要意義。有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法主要有氣相色譜法[5-6]，液相色譜法[7-8]、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[9-11]、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[12-13]和氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法[14-16]等。對(duì)于羅漢果中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量分析有研究采用氣色譜法[17]。而氣相色譜法雖然靈敏度較高，但易受雜質(zhì)干擾，給定性、定量帶來(lái)一定的困難。氣質(zhì)聯(lián)用法既具有氣相色譜高效分離效果，又具有質(zhì)譜準(zhǔn)確鑒定化合物結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)，可達(dá)到同時(shí)準(zhǔn)確快速測(cè)定樣品中微量的多種殘留農(nóng)藥及其衍生物[18]，因此，氣質(zhì)聯(lián)用法被廣泛應(yīng)用于農(nóng)藥殘留的檢測(cè)。本研究以廣西羅漢果為研究對(duì)象，應(yīng)用GC-MS對(duì)羅漢果中11種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留檢測(cè)的結(jié)果。以期為羅漢果的應(yīng)用研究提供基本的理論依據(jù)。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

GCMS-QP2010氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀、AOC-20i型自動(dòng)進(jìn)樣器：日本島津公司；RE-5298A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器：上海亞榮生化儀器廠；DFY-400高速中藥粉碎機(jī)：溫嶺市林大科技有限公司；B2200S-7臺(tái)式超聲清洗機(jī)：必能信超聲有限公司；BT224S型電子分析天平：北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司；101A-2電熱鼓風(fēng)干燥箱：重慶銀河試驗(yàn)儀器公司。

1.2 試劑

石油醚（60℃～90℃）（分析純）、丙酮（分析純）：西隴化工有限公司，重蒸后使用；水為超純水；活性炭?jī)?chǔ)存于密閉容器中備用。

11種有機(jī)磷農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品為敵敵畏（dichlorvos）、甲胺磷（methamidophos）、甲拌磷（phorate）、氧化樂(lè)果（omethoate）、二嗪農(nóng)（diazinon）、樂(lè)果 dimethoate）、甲基對(duì)硫磷（parathion-methyl）、馬拉硫磷（malathion）、對(duì)硫磷（parathion）、水胺硫磷（isoscarbophos）、喹硫磷（quinalphos）：農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所，質(zhì)量濃度為 50 μg/mL。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

精密量取有機(jī)磷混合標(biāo)準(zhǔn)溶液0.4 mL，置于20 mL容量瓶中，用丙酮定容至刻度，得到對(duì)質(zhì)量濃度為1 μg/mL混合標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液。分別精確吸取一定體積的混合標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液于10 mL容量瓶中，用丙酮稀釋至刻度并搖勻得到 10、50、100、250、500、750 μg/L 的一系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。

1.4 原料

廣西羅漢果：采集地點(diǎn)分別為永福百壽鄉(xiāng)、永福堡里鄉(xiāng)、臨桂中庸鄉(xiāng)、臨桂茶垌鄉(xiāng)、龍勝飄里鄉(xiāng)，經(jīng)廣西中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院劉壽養(yǎng)副教授鑒定為葫蘆科植物羅漢果的成熟果實(shí)，干燥、粉碎，過(guò)80目篩，保存于干燥器中備用。

2 方法與結(jié)果

2.1 GC-MS分析條件

氣相色譜條件：AgilengtHP-5MS石英毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；進(jìn)樣口溫度為 220℃；載氣為He（≥99.999%），流量3mL/min；分流進(jìn)樣，分流比 1∶1；程序升溫：初始溫度150℃，保持6 min，以20℃/min升至200℃，保持4 min，以20℃/min升至220℃，保持 10 min；進(jìn)樣量 1.0 μL；柱流速率為 1.46 mL/min。

質(zhì)譜條件：接口溫度為280℃；EI離子源，電子能量70 eV，離子源溫度230℃；溶劑延遲時(shí)間1.5 min。定量方法為峰面積外標(biāo)法；數(shù)據(jù)采集方式為全掃描模式（Scan），掃描范圍 m/z 45 amu～500 amu，離子選擇強(qiáng)度大、不受干擾的離子為定量離子，選用選擇離子掃描模式（SIM）測(cè)定；各化合物定量離子及定性離子見(jiàn)表1。11種有機(jī)磷農(nóng)藥混合對(duì)照品的總離子流典型色譜圖如圖1。

表1 11種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的保留時(shí)間和特征離子Table 1 The renention time and characteristic ions of 11 organophosphorus pesticides

2.2 樣品溶液的制備

精密稱(chēng)取羅漢果粗粉2.0 g，置100 mL錐形瓶中，加入石油醚-丙酮（體積比為2∶1）20 mL，置冰浴中超聲處理10 min濾過(guò)，濾渣及濾器用石油醚一丙酮（體積比為2∶1）10 mL洗滌，合并濾液，置50 mL燒杯中，加入0.2 g活性炭，放置5 min，振搖數(shù)次，直至顏色變淺，濾過(guò)，用提取溶劑洗滌濾渣及濾器，合并濾液，于40℃水浴上減壓濃縮至近干，丙酮精密定容至10 mL溶解，待GC備用。

圖1 11種有機(jī)磷農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)液（750 μg/L）的總離子流色譜圖Fig.1 Total ion chromatogram of a mixed of 11 organophosphorus pesticides standard solution（750 μg/L）

表2 11種有機(jī)磷農(nóng)藥線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限及定量限Table 2 Linear equations，correlation coefficients，limits of detection（LOD，S/N=3）and limits of quantification（LOQ，S/N=10）of 11 organophosphorus pesticides

表3 樣品中3個(gè)加標(biāo)水平下11種有機(jī)磷農(nóng)藥回收率和精密度（n=3）Table 3 Recoveries and precisions（RSDs）of 11 organophosphorus pesticides spiked at three levels in a sample（n=3）

2.3 線性考察

2.3.1 線性范圍與檢測(cè)限

采用上述條件對(duì)10 μg/L～750 μg/L質(zhì)量濃度范圍的11種有機(jī)磷混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行測(cè)定，每個(gè)濃度平行6次，以2.1的色譜條件分析，進(jìn)樣1 μL，以得到的各農(nóng)藥殘留對(duì)照品定量離子的色譜峰面積為縱坐標(biāo)（Y），對(duì)應(yīng)的農(nóng)藥殘留濃度為橫坐標(biāo)（X，μg/L）作圖，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到線性關(guān)系（見(jiàn)表2）。

由此可見(jiàn)11種有機(jī)磷農(nóng)藥測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)（r）為0.999 1～0.999 9。以樣品中組分在儀器上產(chǎn)生3倍信噪比（S/N）和S/N=10所對(duì)應(yīng)的分析物濃度分別計(jì)為方法的檢出限（LOD）和定量限（LOQ），8 種有機(jī)氯的 LOD 為 0.432 μg/L～3.901 μg/L，LOQ 為 1.441 μg/L～13.001 μg/L?？梢?jiàn)羅漢果中 8種有機(jī)磷農(nóng)藥均有較好的線性關(guān)系及較高的靈敏度。

2.3.2 重復(fù)性試驗(yàn)

準(zhǔn)確稱(chēng)取9份樣品粉末各2.0 g，按照2.2中方法制備所需溶液，2.1中色譜條件進(jìn)行分析。結(jié)果表明，甲胺磷、敵敵畏、氧化樂(lè)果、甲拌磷、樂(lè)果、二嗪農(nóng)、甲基對(duì)硫磷、對(duì)硫磷、馬拉對(duì)硫磷、水胺硫磷和喹硫磷的平均RSD值分別為1.83%、1.54%、1.62%、3.27%、3.41%、3.10%、2.78%、2.70%、2.27%、3.83%和 3.23%，結(jié)果表明方法重現(xiàn)性良好。

2.3.3 加樣回收試驗(yàn)

準(zhǔn)確稱(chēng)取同一樣品18份，分3水平加入混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液，每個(gè)水平平行測(cè)定6次，進(jìn)行回收率和重復(fù)性的測(cè)定。以2.2中方法制備樣品，2.1節(jié)的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表3。

續(xù)表3 樣品中3個(gè)加標(biāo)水平下11種有機(jī)磷農(nóng)藥回收率和精密度（n=3）Continue table 3 Recoveries and precisions（RSDs）of 11 organophosphorus pesticides spiked at three levels in a sample（n=3）

結(jié)果表明，11種有機(jī)磷的加樣平均回收率為83.3%～112.4%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.45%～8.28%。本測(cè)定方法的準(zhǔn)確度和精密度能滿足測(cè)定的需要。

2.3.4 樣品農(nóng)藥殘留量測(cè)定

采用上述方法對(duì)廣西永福百壽鄉(xiāng)、永福堡里鄉(xiāng)、臨桂中庸鄉(xiāng)、臨桂茶垌鄉(xiāng)、龍勝飄里鄉(xiāng)等5個(gè)產(chǎn)地的羅漢果進(jìn)行有機(jī)磷農(nóng)藥含量進(jìn)行測(cè)定。對(duì)羅漢果樣品隨機(jī)分析，結(jié)果均未檢出有機(jī)磷農(nóng)藥殘留。說(shuō)明這5個(gè)地區(qū)的羅漢果均未受到有機(jī)磷農(nóng)藥污染。

3 結(jié)論

該方法的前處理操作簡(jiǎn)便、快速，實(shí)現(xiàn)了羅漢果中11種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的同時(shí)測(cè)定。該方法適合在實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行，可滿足羅漢果中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的檢測(cè)。對(duì)5個(gè)產(chǎn)區(qū)羅漢果樣品中有機(jī)磷農(nóng)藥的檢測(cè)結(jié)果表明，羅漢果種植過(guò)程中，農(nóng)民對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥的使用已經(jīng)得到了重視。同時(shí)加上有機(jī)磷農(nóng)藥化學(xué)結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，易受熱、酸、堿影響而降解，以至于有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量極少以至檢測(cè)不出。該方法可為羅漢果中有機(jī)磷有機(jī)磷農(nóng)藥污染狀況研究提供可靠的檢測(cè)技術(shù)支持。

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Determination of Organophosphorous Pesticide Residues in Siraitiae Fructus by GC-MS

BAI Hong-yan1，F(xiàn)U Ming-lei1，LUO Qin1，ZHOU Xian-li1，HUANG Xiao1，SU Xiao-jian2，CHENG Liu3，LI Yuan-yuan1，LIANG Cheng-qin1，*
（1.Guangxi Key Laboratory of Pharmacognosy in University，Guilin Medical University，Guilin 541004，Guangxi，China；2.College of Environmental&Resources Science，Guangxi Normal University，Guilin 541004，Guangxi，China；3.China Nonferrous Metals（Guilin）Geology and Mining Co.，Ltd.，Guilin 541004，Guangxi，China）

A method for the determination of 11 organophosphorus pesticides in Siraitiae Fructus using gas chromatography-mass spectrometry （GC-MS）was developed.Ultrasonic was used to extract the organophosphorous pesticides by petroleum and acetone （volume ratio=2：1）.After the clean-up with active carbon，the extract was ready for GC-MS analysis with the external standard method.The linear equations were obtained in the concentration range of 10 μg/L-750 μg/L with correlation coefficients greater than 0.999 0.The limits of detection （S/N=3）were 0.432 μg/L-3.901 μg/L.The average recovery at the three spiked levels of 0.125，0.25，0.375 μg/g range from 83.3%to 112.4%with the relative standard deviation（RSD，n=6）from 1.45%to 8.28%.

GC-MS；organophosphoruspesticides；siraitiae fructus

10.3969/j.issn.1005-6521.2017.17.031

2016-12-19

廣西科學(xué)研究與技術(shù)開(kāi)發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目（桂科能14123006-21、桂科能 1598025-18）

白紅妍（1988—），女（漢），助理實(shí)驗(yàn)師，碩士，主要從事有機(jī)污染物的研究。

*通信作者：梁成欽（1977—），男（漢），助理研究員，博士，主要從事天然藥化研究。