高田原，田瓊，劉文麗，穆欣，張鍵

（西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院，西安 710061）

·論著·

系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者高密度脂蛋白抗氧化能力和亞型分布及對(duì)氧磷酶1活性分析

高田原，田瓊，劉文麗，穆欣，張鍵

（西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院，西安 710061）

目的 探討系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）患者高密度脂蛋白（HDL）抗氧化能力和亞型分布及對(duì)氧磷酶1（PON1）活性的相關(guān)性。方法 采用常規(guī)方法檢測(cè)50例SLE和50例健康對(duì)照組紅細(xì)胞沉降率（ESR）、血清載脂蛋白A1（ApoA1）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、白細(xì)胞介素（IL）-6、MCP-1、SAA等多種SLE相關(guān)標(biāo)志物；采用分光光度法檢測(cè)總HDL抗氧化能力；用lipoprintsystem分析HDL亞型；以酶水解底物對(duì)氧磷法和乙酸乙酯法檢測(cè)PON1對(duì)氧磷酶活性及其芳香酯酶活性。結(jié)果 與健康對(duì)照組比，SLE組HDL-C（P=0．012）和ApoA1（P=0．003）濃度顯著下降；SLE組總HDL抗氧化能力（P=0．002）、HDL亞型（P＜0．05）濃度、PON1芳香酯酶活性（P=0．001）顯著低于對(duì)照組；SLE組hsCRP、ESR、IL-6、MCP-1、SAA顯著增加（P＜0．05）。SLE組HDL-C和總HDL抗氧化能力與PON1芳香酯酶活性及PON1對(duì)氧磷酶活性成正相關(guān)（P＜0．05），與ESR、hsCRP、IL-6、MCP-1、SAA呈負(fù)相關(guān)（P＜0．05），其中PON1芳香酯酶活性和ESR與總HDL抗氧化能力最具相關(guān)性。結(jié)論 HDL抗氧化能力及PON1活性降低、HDL亞型改變、系統(tǒng)性炎癥增加等多因素可能導(dǎo)致SLE患者動(dòng)脈粥樣硬化風(fēng)險(xiǎn)的增加。

系統(tǒng)性紅斑狼瘡；高密度脂蛋白抗氧化能力；高密度脂蛋白亞型；對(duì)氧磷酶1

系統(tǒng)性紅斑狼瘡（Systemic lupus erythematosus, SLE）是一種好發(fā)于育齡期女性，可累及全身任何臟器的慢性炎癥性自身免疫性疾病。SLE患者的心血管疾病發(fā)病率和死亡率較高[1]。研究表明，SLE患者體內(nèi)常見(jiàn)高水平的甘油三酯（TG）、高水平的低密度脂蛋白（LDL）、低水平的高密度脂蛋白（HDL）等血脂異?，F(xiàn)象，血脂異常增加了SLE患者早期心血管疾病尤其是動(dòng)脈粥樣硬化的危險(xiǎn)[2]。但是，目前研究?jī)H探討SLE患者體內(nèi)血脂代謝物、對(duì)氧磷酶1（PON1）及炎癥標(biāo)志物濃度與SLE疾病的關(guān)聯(lián)性[3-4]，未闡明這些因素、亞型或活性對(duì)SLE的影響。因此，本研究收集50例SLE患者標(biāo)本，檢測(cè)分析SLE患者HDL抗氧化能力、HDL亞型分布、PON1活性以及炎癥標(biāo)志物濃度，探討HDL抗氧化能力和亞型分布、PON1活性及炎癥標(biāo)志物對(duì)SLE的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集我院2013年1月—2015年12月SLE患者50例和健康體檢者50例全血。所有SLE患者診斷均符合1997年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)（ACR）制訂的SLE的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]。伴有其他系統(tǒng)疾病，如腎衰竭[GFR＜60mL/mi n（1．73m2）]、糖尿病等，引起血脂代謝異常的SLE者，或服用口服避孕藥或他汀類藥物等影響血脂水平的SLE者排除在外。入選的SLE患者男7例，女43例，平均年齡（32．5±8．4）歲，系統(tǒng)性紅斑狼瘡疾病活動(dòng)指數(shù)（SLEDAI）評(píng)估SLE活動(dòng)度[6]；對(duì)照組為我院保健科體檢者，身體健康，無(wú)明顯器質(zhì)性病變，其中男8例，女42例，平均年齡（31．8±9．9）歲。對(duì)照組與SLE組患者的年齡、性別和身體質(zhì)量指數(shù)（BMI）差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本研究獲醫(yī)院倫理委員會(huì)審批，且患者或家屬簽署知情同意書(shū)。

1.2 研究方法 所有研究對(duì)象均取晨空腹肘靜脈血按常規(guī)方法檢測(cè)血細(xì)胞數(shù)、血糖、紅細(xì)胞沉降率（ESR）、肝功能、腎功能。血清中高敏C反應(yīng)蛋白（hs-CRP）、血清載脂蛋白A1（ApoA1）、載脂蛋白B（ApoB）、脂蛋白（a）[LP（a）]濃度采用免疫比濁法檢測(cè)。總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）采用酶法檢測(cè)。用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)SLE自身免疫抗體、抗磷脂綜合征各類抗體（a-dsDNA，a-Sm，a-SSA，a-SSB；a-CL IgA，a-CL IgG，a-CL IgM，a-B2 IgA，a-B2 IgG，a-B2 IgM）、免疫球蛋白（IgA、IgG、IgM）、C3和C4補(bǔ)體、免疫復(fù)合物濃度、細(xì)胞因子、急性期標(biāo)志物、氧化型低密度脂蛋白（oxLDL）、MCP-1。SLE患者疾病活動(dòng)用SLEDAI作為評(píng)價(jià)依據(jù)，SLEDAI評(píng)分＞5分判定為疾病活動(dòng)[6]。HDL抗氧化活性檢測(cè)參考Gaál等[7]報(bào)道的方法。采用酶學(xué)動(dòng)力學(xué)方法[8]以對(duì)氧磷作為底物檢測(cè)PON1的磷酯酶活性；根據(jù)Eckerson等[9]的方法以乙酸苯酯作為底物檢測(cè) PON1的芳香酯酶活性。用lipoprintsystem分析HDL亞型，其中大密度HDL包括HDL1-HDL3，中等密度HDL包括HDL4-HDL7，小密度HDL包括HDL8-HDL10。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 17．0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。所有計(jì)量資料采用Kolmogorov-Smirnov進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)。其中正態(tài)分布的計(jì)量資料用x±s平表示，組間均數(shù)差異采用student’s t檢驗(yàn)，非正態(tài)分布計(jì)量資料用中位數(shù)[四分范圍（IQR）]表示，組間比較采用Mann-Whitney U檢驗(yàn)。采用Pearson或Spearman相關(guān)系數(shù)評(píng)估兩變量之間的相關(guān)性。采用多元回歸（向后剔除法）分析預(yù)測(cè)總HDL抗氧化活性與多因素的相關(guān)性。P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般資料 SLE組及健康對(duì)照組臨床資料、實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果（包括脂蛋白濃度等）SLE患者組平均病程為（6．25±5．62）年，SLEDAI評(píng)分6．0（2．0～12．0），最低SLEDAI評(píng)分0，最高SLEDAI評(píng)分38。SLE組HDL和ApoA1顯著低于健康對(duì)照組，而TG和ApoB100顯著高于健康對(duì)照組，見(jiàn)表1。

表1 研究對(duì)象臨床特征及實(shí)驗(yàn)室檢查資料

2.2 SLE患者HDL抗氧化能力、PON1活性、炎癥標(biāo)志物分析 與健康對(duì)照組比較，SLE組PON1活性低于對(duì)照組但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；SLE組PON1芳香酯酶活性顯著低于對(duì)照組。由于PON1活性與HDL密切相關(guān)，SLE組PON1活性的減弱可能與SLE組HDL濃度降低有關(guān)，本研究采用PON1酶活性/HDL比值評(píng)價(jià)PON1酶活性，結(jié)果表明SLE組PON1對(duì)氧磷酶活性/HDL、PON1芳香酯酶活性/ HDL均顯著高于對(duì)照組。SLE組總HDL抗氧化能力顯著低于對(duì)照組。與對(duì)照組比較，SLE組炎癥標(biāo)志物及炎癥因子濃度（包括hsCRP、ESR、IL-6、MCP-1、SAA）顯著增加（P＜0．05），見(jiàn)表2。

2.3 SLE患者HDL亞型比較分析 采用lipoprint system比較分析2組研究對(duì)象血清HDL亞型，結(jié)果發(fā)現(xiàn)SLE組大、中、小密度HDL濃度均顯著低于對(duì)照組（P＜0．05），但SLE組三者HDL在總HDL所占比例與對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表3。

2.4 SLE患者HDL、PON1活性和炎癥標(biāo)志物相關(guān)性分析 SLE組HDL-C和總HDL抗氧化能力均與PON1芳香酯酶活性、PON1對(duì)氧磷酶活性、ESR、hsCRP、IL-6、MCP-1、SAA相關(guān)，見(jiàn)表4。其中，SLE組HDL-C和總HDL抗氧化能力均與PON1芳香酯酶活性及PON1對(duì)氧磷酶活性成正相關(guān)（P＜0．05），與ESR、hsCRP、IL-6、MCP-1、SAA呈負(fù)相關(guān)（P＜0．05）。此外，SLE組總HDL抗氧化能力與免疫復(fù)合物也呈負(fù)相關(guān)性（r=-0．575，P＜0．001），但是SLE疾病活動(dòng)度與ApoA1、HDL-C和總HDL抗氧化能力不相關(guān)（結(jié)果未顯示）。

SLE組PON1對(duì)氧磷酶活性與大密度HDL濃度（r=0．354，P=0．019）及其占總HDL的比例（r= 0．345，P=0．021）及呈正相關(guān)，卻與中等密度HDL占總HDL比例呈負(fù)相關(guān)（r=-0．318，P=0．017）。SLE組PON1芳香酯酶活性與小密度HDL亞型呈正相關(guān)（r=0．380，P=0．003），與anti-SBB呈負(fù)相關(guān)（r=-0．331，P=0．011）。對(duì)照組PON1對(duì)氧磷酶活性及PON1芳香酯酶活性與各組份HDL無(wú)相關(guān)性。此外，SLE疾病活動(dòng)度（SLEDAI評(píng)分）與OxLDL呈正相關(guān)（r=0．371，P=0．013）。SLE患者OxLDL濃度與SAA濃度（r=0．321，P=0．033）、ESR（r=0．305，P= 0．037）、hsCRP濃度（r=0．293，P=0．048）呈正相關(guān)性。

表2 2組HDL抗氧化能力、PON1活性及炎癥標(biāo)志物比較

表3 2組HDL亞型比較

表4 SLE患者HDL及其總抗氧化能力與PON1活性和炎癥標(biāo)志物相關(guān)性分析

多元回歸（向后剔除法）進(jìn)一步分析SLE患者IL-6、hsCRP、MCP-1、SAA、ESR、PON1芳香酯酶活性共6個(gè)因素對(duì)總HDL抗氧化能力的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：PON1芳香酯酶活性（P=0．029，beta=0．358）和ESR（P=0．008，beta=0．59）與總HDL抗氧化能力與最具相關(guān)性。

3 討論

SLE是一種多臟器受累的慢性免疫復(fù)合物介導(dǎo)的炎性疾病。SLE患者體內(nèi)常見(jiàn)高水平的TG和LDL、低水平的HDL的血脂異?！袄钳徸V”[2]。本研究50例SLE患者大部分處于SLE疾病活動(dòng)期，SLE組TG升高、HDL降低，符合SLE“狼瘡譜”特征。HDL水平降低已成為SLE臨床特征之一。HDL參與體內(nèi)膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)，將外周細(xì)胞內(nèi)的膽固醇脂逆向轉(zhuǎn)運(yùn)至肝臟，因而具有抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用[10]。此外，HDL具有抗氧化作用，能保護(hù)LDL不被氧化，減輕或阻止LDL對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的破壞。因此，HDL降低將增加SLE患者患動(dòng)脈粥樣硬化的風(fēng)險(xiǎn)。

ApoA1是HDL一個(gè)主要的組成部分，參與HDL抗氧化作用。ApoA1濃度或結(jié)構(gòu)的改變會(huì)導(dǎo)致HDL功能缺陷。本研究發(fā)現(xiàn)SLE組ApoA1顯著降低，提示SLE患者HDL抗氧化能力可能因此受到影響。另外，HDL的抗氧化功能依賴ApoA1在多種酶如PON1的作用下，阻止LDL的氧化、減弱其氧化活性。PON1是一種由肝臟合成，存在于血液和肝臟的水解脂酶，能夠水解脂質(zhì)過(guò)氧化物，防止低密度脂蛋白被氧化修飾，從而阻止動(dòng)脈粥樣硬化病的發(fā)生。由此，本研究后續(xù)比較了SLE患者總HDL抗氧化能力和PON1活性的變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)SLE患者總HDL抗氧化能力和PON1活性（尤其是PON1芳香酯酶活性）顯著降低，說(shuō)明總HDL抗氧化能力和PON1活性可能是SLE早發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化的原因之一。Ahmed等[4]研究發(fā)現(xiàn)SLE患者PON1對(duì)氧磷酶活性顯著下降，與本研究結(jié)果類似。本研究PON1對(duì)氧磷酶活性低于對(duì)照組但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這可能的與檢測(cè)方法和樣本量大小有關(guān)。

HDL是一類功能、組成、密度、顆粒大小極不均一的脂蛋白。根據(jù)雙向電泳免疫印跡法可將HDL分為多種亞型。HDL各亞型所含ApoA1量差異較大，在代謝綜合征、肥胖、高脂血癥等情況下HDL各亞型的分布發(fā)生改變，HDL亞型分布的改變可能參與了動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病過(guò)程[11]。因此本研究分析了SLE患者HDL亞型分布，結(jié)果發(fā)現(xiàn)SLE組大、中、小密度HDL濃度均顯著低于對(duì)照組。不同亞型HDL可攜帶不同的酶及結(jié)構(gòu)蛋白從而導(dǎo)致HDL亞型功能差異。小密度HDL顆粒主要攜帶抗氧化作用的酶，如PON1，它們也是膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程中發(fā)揮重要作用的脂質(zhì)受體。本研究SLE患者小密度HDL下降且與PON1芳香酯酶活性呈正相關(guān)，進(jìn)一步說(shuō)明HDL亞型分布可能也影響SLE患者動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)展。

炎癥反應(yīng)是系統(tǒng)性紅斑狼瘡的標(biāo)志，許多研究已經(jīng)證實(shí)在系統(tǒng)性紅斑狼瘡中IL-6、MCP-1、γ-干擾素和急性期蛋白均增加[12]。本研究證實(shí)SLE患者h(yuǎn)sCRP、IL-6、MCP-1、SAA顯著升高，且與HDL-C和總HDL抗氧化能力呈負(fù)相關(guān)，說(shuō)明炎癥反應(yīng)可能也影響HDL抗氧化功能。此外，ESR是反映免疫和炎癥性疾病活動(dòng)程度的指標(biāo)，在一些疾病如腫瘤、SLE、結(jié)核及感染性疾病中，ESR往往顯著升高。ESR水平可以作為判斷SLE病情活動(dòng)程度的重要參考指標(biāo)[13]。本研究證實(shí)SLE患者ESR顯著升高，與文獻(xiàn)報(bào)道一致[14]。經(jīng)多元回歸分析發(fā)現(xiàn)PON1芳香酯酶活性和ESR與總HDL抗氧化能力與最具相關(guān)性，進(jìn)一步說(shuō)明HDL抗氧化能力與PON1芳香酯酶活性和ESR密切相關(guān)，也與SLE患者動(dòng)脈粥硬化發(fā)生相關(guān)。

綜上所述，SLE患者HDL抗氧化能力及PON1活性降低、HDL亞型改變、系統(tǒng)性炎癥增加，這些因素可能與SLE患者動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生密切相關(guān)。早期檢查SLE患者HDL抗氧化能力及亞型分布將有利于早期防治SLE動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生。

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High Density Lipoprotein Antioxidant Capacity and Subtype Distribution and Analysis of Paraoxonase-1 Activity in Patientsw ith System ic Lupus Erythematosus

Gao Tianyuan,Tian Qiong,LiuWenli,Mu Xin,Zhang Jian
The FirstAffiliated HospitalofXi'an Jiaotong University,Xi'an 710061,China

Objective In order to investigate the relationship between systemic lupuserythematosus（SLE）and high-density lipoprotein （HDL）antioxidant capacity,HDL subfractions,paraoxonase-1 （PON1）activity．M ethods Several factors, including ESR,ApoA1,HDL-C,IL-6,MCP-1 and SAA were determined by normalmethods in 50 SLE patients and 50 healthy controls．HDL antioxidant capacity was determined spectrophotometricalmethod．Lipoprint system was used for HDL subfraction analysis．PON1 paraoxonase activity and arylesterase activity analyzed using paraoxon and phenylacetate as the substrate．Results Compared with healthy controls,HDL-C （P=0．012）and ApoA1 （P=0．003）concentrations decreased significantly in SLE subjects．TotalHDL antioxidantcapacity（P=0．002）,HDL subfractions（P＜0．05）a nd PON1 arylesterase activity （P=0．001）were significantly reduced in SLE patients．The levels of hsCRP,ESR,IL-6,MCP-1 and SAA were significantly elevated in SLE patients（P＜0．05）．HDL-Cand totalHDL antioxidantcapacity correlated positivelywith PON1 paraoxonase activity and arylesterase activity,and negatively with hsCRP,ESR,IL-6,MCP-1 and SAA,respectively．PON1 aryl esterase activity and ESR were independent predictors of total HDL antioxidant capacity．Conclusion Reduction of HDL antioxidantand PON1 activity,alteration of subfractions distribution and inflammationmay contribute to the increased atherosclerosis risk ofSLE patients．

Systemic lupus erythematosus;High density lipoprotein antioxidant capacity;High density lipoprotein subpopulation;High density lipoprotein subfractions;Paraoxonase-1

R593．24+1

A

1672-0709（2017）01-0016-04

2016-07-12）

陜西省科技攻關(guān)項(xiàng)目（編號(hào)：2014K11-02-03-13）

張鍵，E-mail：yiiling10@163.com