龔琳+劉佳+衛(wèi)興國+曹瑩

[摘要] 目的 研究胰島素量與血糖量對1型和2型糖尿病的患者IGF2BP2基因表達(dá)的影響。方法 自白細(xì)胞提取總mRNA，作為模板進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄得到cDNA，以Real-Time PCR方法測定目的基因的表達(dá)量。 結(jié)果 測定了18例Ⅰ型糖尿病患者、25例2型糖尿病患者和20名正常人中的IGF2BP2基因表達(dá)量。 結(jié)論 該研究在Ⅰ型和2型糖尿病的患者、正常人群中測定了IGF2BP2基因的表達(dá)量水平，發(fā)現(xiàn)胰島素值低、血糖高的1型糖尿病組的IGF2BP2基因表達(dá)正常，胰島素與正常組無差異、血糖高的2型糖尿病組IGF2BP2基因高表達(dá)，推測胰島素值、血糖值與IGF2BP2基因無直接聯(lián)系，但是IGF2BP2可能與胰島素抵抗有關(guān)。

[關(guān)鍵詞] IGF2BP2基因；胰島素；血糖

[中圖分類號] R587.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1672-4062（2017）04（b）-0024-02

[Abstract] Objective To research the effect of insulin dose and blood glucose dose on the IGF2BP2 gene expression of type 1 diabetes patients and type 2 diabetes patients. Methods The total mRNA was extracted by white cell as templets for reverse transcription thus obtaining cDNA， and the expression level of target gene was measured by the Real-Time PCR method. Results The IGF2BP2 gene expression levels of 18 cases of patients with type 1 diabetes， 25 cases of patients with type 2 diabetes and 20 cases of normal people were measured. Conclusion The measurement shows that the IGF2BP2 gene expression in the type 1 diabetes group with low insulin value and high blood glucose is normal， and there is no difference in the insulin compared with the normal group thus speculating that the insulin value， blood glucose value have no direct correlation with the IGF2BP2 gene， but the IGF2BP2 may be related to the insulin resistance.

[Key words] IGF2BP2 gene； Insulin； Blood glucose

近年來，隨著平均壽命延長，生活習(xí)慣和飲食結(jié)構(gòu)變化，國人糖尿病的發(fā)病率逐年增加。近10年來，通過常見病與候選基因關(guān)聯(lián)各種研究，研究人員發(fā)現(xiàn)了一些和糖尿病發(fā)病率增加密切相關(guān)的具有多態(tài)性的基因[1]，其中就包括IGF2BP2（胰島素樣生長因子2結(jié)合蛋白2），在不同類型糖尿病患者中，IGF2BP2基因的表達(dá)量有很大差異。因此，在各常見類型糖尿病的患者和正常人中，該研究對IGF2BP2基因的表達(dá)量進(jìn)行測定，研究IGF2BP2基因表達(dá)量水平與胰島素量、血糖量的聯(lián)系，以期在基因水平對各型糖尿病的發(fā)生機制進(jìn)行了探索，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

樣本由長沙市第四醫(yī)院提供，為臨床確診的Ⅰ型、2型糖尿病患者血樣，已征得本人同意。正常人血樣采自非糖尿病的捐獻(xiàn)者。以常規(guī)抽血檢驗的方法檢測的空腹胰島素（FINS） 和空腹血糖量（FPG），核算胰島素抵抗值，胰島素抵抗值計算公式為：HOMA-IR = FPG×FINS/22.5。

1.2 試劑與儀器

PCR產(chǎn)物純化試劑盒、Trizol Reagent、RNase、Oligo dT（Invitrogen公司產(chǎn)品）；Power SYBR Green PCR Master Mix、Taqman Universal PCR Master Mix試劑盒（ABI公司產(chǎn)品）；Sensiscript RT試劑盒（QIAGEN公司產(chǎn)品）；其余反應(yīng)中所用試劑均為分析純。實時熒光定量PCR儀（ABI公司產(chǎn)品）。

1.3 引物和探針設(shè)計

引物為5-CACCGGAAGCCCAGTTCAA-3和 5-CCACCTTTGCCAATCACCC-3；探針序列為5-TGAAGCTGGAAGCGCATATCAGAG-3。引物和探針皆由上海生工生物工程技術(shù)公司合成。

1.4 樣本總RNA提取

取血樣2～3 mL，使用Trizol Reagent提供的方法提取血液中白細(xì)胞的總RNA，提取的RNA含量用紫外分光光度儀進(jìn)行測定，OD260/280在1.8～2.0之間，-80℃保存待使用。

1.5 樣本cDNA合成

取0.2 μg樣本總RNA與Sensiscript RT 試劑盒中逆轉(zhuǎn)錄試劑進(jìn)行反應(yīng)；將反應(yīng)體系都放在37℃孵育60 min，生成的cDNA置于-20℃保存待使用。

1.6 樣本IGF2BP2基因表達(dá)量的檢測

以樣本總cDNA作為模板，按照Taqman Universal PCR Master Mix試劑盒說明備好反應(yīng)體系，在ABI Prism 7300實時熒光PCR儀中進(jìn)行反應(yīng)，測定樣本中IGF2BP2基因表達(dá)量。通過反應(yīng)物梯度稀釋和Real-Time PCR構(gòu)建基因定量標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對樣本中的IGF2BP2基因表達(dá)量進(jìn)行確定。每次測定時，待測基因均與持家基因GAPDH同時進(jìn)行反應(yīng)，以確保數(shù)據(jù)的可信性。

1.7 統(tǒng)計方法

該課題中，以IGF2BP2基因的表達(dá)量/GAPDH的表達(dá)量作為目的基因的表達(dá)量。利用SPSS 10.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行分析，3組數(shù)據(jù)差異的比較采用單因素方差分析；P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

Ⅰ型、2型糖尿病患者數(shù)據(jù)都是與正常對照組比較，Ⅰ型糖尿病組的空腹胰島素值顯著低于正常組（P<0.05），2型糖尿病組均值高于正常組，但是差異無統(tǒng)計學(xué)意義。Ⅰ型、2型糖尿病患者的空腹血糖值顯著高于正常對照組（P<0.05）。利用實時熒光定量PCR方法來測定IGF2BP2基因在樣本中的表達(dá)量，并使用持家基因GAPDH進(jìn)行校正，2型糖尿病組的IGF2BP2基因相對表達(dá)量顯著高于對照組，Ⅰ型糖尿病組未見表達(dá)量增高（見表1）。綜合3組數(shù)據(jù)，可以看出僅2型糖尿病患者IGF2BP2基因表達(dá)量增加，這一現(xiàn)象與胰島素量和血糖量并無直接對應(yīng)關(guān)系。核算了各組的胰島素抵抗值，2型糖尿病組胰島素抵抗值顯著增高于另外兩組，其均值為正常組的2.56倍，IGF2BP2基因相對表達(dá)量也高于Ⅰ型糖尿病組和正常組，推測兩者可能具有相關(guān)性。

3 討論

極少數(shù)特殊類型的糖尿病是單基因疾病，但大部分2型糖尿病是與胰島素抵抗和B細(xì)胞分泌障礙而導(dǎo)致高血糖的復(fù)雜多基因病，其發(fā)病機制至今未完全闡明。遺傳因素在2型糖尿病的產(chǎn)生中起重要作用，但同時還受到諸多環(huán)境因素影響。2型糖尿病是種復(fù)雜多基因疾病，具備多基因病的特點——參與發(fā)病的遺傳因素為多個，每個基因?qū)Πl(fā)病影響大小不同，大多數(shù)基因作用小；疾病的最終發(fā)生是各基因作用的綜合結(jié)果[2]。IGF2BP2也是2型糖尿病的相關(guān)基因之一，經(jīng)過該課題組實驗，2型糖尿病患者的IGF2BP2基因表達(dá)量高于正常對照組，Ⅰ型糖尿病患者的該基因卻表達(dá)不高，經(jīng)過檢測，發(fā)現(xiàn)胰島素值低、血糖高的Ⅰ型糖尿病組IGF2B P2基因表達(dá)正常，胰島素與正常組無差異、血糖高的2型糖尿病組IGF2BP2基因高表達(dá)，推測胰島素值、血糖值與IGF2BP2基因無直接正相關(guān)或者負(fù)相關(guān)，但是不管哪一組，胰島素抵抗值卻和IGF2BP2基因表達(dá)量同升同降，可能存在一定的聯(lián)系。

然而，除了遺傳易感性，環(huán)境因素在2型糖尿病發(fā)病中的作用也不小。很多臨床研究顯示，飲食控制、加強運動、控制體重可以使糖尿病得以預(yù)防或延緩發(fā)展[3]。遺傳因素決定個人的疾病易感性，而環(huán)境因素則可促發(fā)糖尿病。因此，來自臨床的患者在進(jìn)行基因檢驗時無法排除每個人不同環(huán)境因素的影響，課題組擬用可排除環(huán)境因素影響的糖尿病模型動物或者胰島素抵抗的細(xì)胞株進(jìn)一步探索IGF2BP2基因表達(dá)和胰島素的聯(lián)系。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Rong R，Hanson RL，Ortiz D，et al.Association analysis of variation in/near FTO， CDKAL1， SLC30A8， HHEX， EXT2， IGF2BP2， LOC387761， and CDKN2B with type 2 diabetes and related quantitative traits in Pima Indians[J].Diabetes， 2009，58（2）：478-488.

[2] 高靜，段暢，李麗娟.2型糖尿病發(fā)病機制的研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)綜述，2015（21）：3835-3938.

[3] 牛潔，劉銅華，楊麗霞.環(huán)境因素在2型糖尿病發(fā)生中的作用[J].中國慢性病預(yù)防與控制，2008，16（4）：440-442.

（收稿日期：2017-01-19）