馬良鵬，唐靜宜，蔣捷，胡磊，張耕

(武漢市第一醫(yī)院，武漢 430030)

武漢地區(qū)漢族人群纖溶酶原激活物抑制物基因多態(tài)性分析

馬良鵬，唐靜宜，蔣捷，胡磊，張耕

(武漢市第一醫(yī)院，武漢 430030)

目的 分析武漢地區(qū)漢族人群纖溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)基因多態(tài)性。方法 采用熒光染色原位雜交技術(shù)檢測1 533例(男728例、女805例)武漢漢族人群PAI-1-675基因多態(tài)性，并結(jié)合文獻(xiàn)比較不同地區(qū)及種族PAI-1-675位點(diǎn)等位基因、基因型頻率。結(jié)果 武漢地區(qū)漢族人群PAI-1-675位點(diǎn)等位基因及基因型分布不具有性別差異(P>0.05)。武漢地區(qū)漢族人群4G等位基因頻率低于廣州地區(qū)，4G/4G基因型頻率低于廣州、長沙地區(qū)，4G/5G基因型頻率高于廣州、長沙地區(qū)，P均<0.01。武漢漢族人4G等位基因頻率高于加納人、土耳其人、印度人、日本人、南非人；4G/4G基因型頻率高于加納人、土耳其人、印度人、馬其頓人、日本人、南非人；4G/5G基因型頻率高于加納人、土耳其人、印度人、日本人、南非人，低于馬其頓人；P均<0.01。結(jié)論 武漢地區(qū)漢族人群PAI-1基因多態(tài)性有地區(qū)、種族差異，但無性別差異。

纖溶酶原激活物抑制物-1；武漢市；漢族；基因多態(tài)性

靜脈血栓栓塞(VTE)是血栓在形成部位脫落，隨血液流動時(shí)部分或完全堵塞靜脈血管，引起相應(yīng)組織或器官缺血壞死的病理過程。VTE是一種環(huán)境及遺傳因素共同促發(fā)的障礙性疾病，多見于長期臥床、肢體制動、大手術(shù)或創(chuàng)傷后、晚期腫瘤或有遺傳風(fēng)險(xiǎn)因素的患者。遺傳因素促發(fā)VTE約占60%[1]，多項(xiàng)研究指出纖溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)基因多態(tài)性為VTE形成的遺傳風(fēng)險(xiǎn)因素之一[2]。此外，由于基因多態(tài)性分布在不同地區(qū)、種族、性別間可能存在差異，且目前國內(nèi)外尚無關(guān)于PA1-1基因多態(tài)性分布的性別、地區(qū)、種族差異性研究。本研究對武漢地區(qū)漢族人群PAI-1多態(tài)性進(jìn)行分析，并探討不同性別、地區(qū)及種族間的差異，旨在為VTE的遺傳流行病學(xué)研究提供方向。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2016年1～6月來武漢市第一醫(yī)院進(jìn)行PAI-1基因檢測的1 533例漢族人群，男728例，女805例；年齡21～95歲；相互之間無親緣關(guān)系，且籍貫為武漢市戶籍。

1.2 PAI-1-675基因多態(tài)性分析 ①血液采集和處理：靜脈采血2 mL，加至EDTA抗凝管中，并充分混勻，避免凝血或溶血。血液標(biāo)本采集后應(yīng)及時(shí)處理(-20 ℃保存不超過7周)，送檢。②白細(xì)胞提?。喝〕?00 μL混勻全血，分別加入1 mL 1×NH4Cl預(yù)處理液，顛倒混勻，室溫靜置5 min，隔2～3 min混勻1次，至液體顏色為橙清紅色。3 300 r/min離心5 min，棄上清，以1×NH4Cl小心洗滌沉淀，棄上清，加入30 μL PHARM-GENE 01 SNP分析保存液，渦旋震蕩10 s至混勻。③加入耀金分：取1.5 μL白細(xì)胞樣本，加入相應(yīng)的耀金分基因分析檢測試劑中，混勻。④上機(jī)雜交：雙擊“Microseq”檢測程序，選擇標(biāo)本放置的管口及檢測位點(diǎn)后運(yùn)行檢測程序，待檢測完成后儀器在結(jié)果欄自動給出檢測結(jié)果的基因類型。⑤結(jié)果分析：PAI-1-675位點(diǎn)多態(tài)性分為5G/5G(野生型)、5G/4G(突變雜合型)、4G/4G(突變純合型)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件。等位基因、基因型頻率用%表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)及PAI-1-675位點(diǎn)等位基因、基因型分布 本研究對收集到的漢族人群PAI-1基因啟動子區(qū)-675 bp處的檢測數(shù)據(jù)進(jìn)行Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗(yàn)，計(jì)算檢驗(yàn)結(jié)果P=0.54，符合Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗(yàn)，樣本具有本區(qū)域群體代表性。武漢地區(qū)漢族人群PAI-1-675 4G、5G等位基因頻率分別為56.72%和43.28%，4G/4G、4G/5G、5G/5G基因型頻率分別為32.55%、48.34%、19.11%。

2.2 不同性別武漢地區(qū)漢族人群PAI-1-675位點(diǎn)等位基因、基因型頻率比較 結(jié)果見表1。由表1可知，不同性別之間的等位基因和基因型頻率比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P均>0.05)。

2.3 不同地區(qū)漢族人群PAI-1-675位點(diǎn)等位基因、

表1 不同性別武漢地區(qū)漢族人群PAI-1-675位點(diǎn)等位基因、基因型分布比較

基因型頻率比較 結(jié)果見表2。由表2可知，武漢地區(qū)漢族人群4G等位基因頻率低于廣州地區(qū)，4G/4G基因型頻率低于廣州、長沙地區(qū)，4G/5G基因型頻率高于廣州、長沙地區(qū)，P均<0.01。

2.4 不同種族人群PAI-1-675位點(diǎn)等位基因、基因型頻率比較 結(jié)果見表3。由表3可致，武漢漢族人4G等位基因頻率高于加納人、土耳其人、印度人、日本人、南非人；4G/4G基因型頻率高于加納人、土耳其人、印度人、馬其頓人、日本人、南非人；4G/5G基因型頻率高于加納人、土耳其人、印度人、日本人、南非人，低于馬其頓人；P均<0.01。

表2 不同地區(qū)漢族人群PAI-1-675位點(diǎn)等位基因、基因型分布比較

表3 不同種族人群PAI-1等位基因、基因型分布比較

3 討論

VTE是多因素參與的常見病、多發(fā)病，病死率高。國外流行病學(xué)資料[16,17]顯示，VTE年發(fā)病率為1/1 000～2/1 000，其高發(fā)病率給患者和國家?guī)砹顺林氐尼t(yī)療負(fù)擔(dān)。PAI-1通過特異性抑制血管纖溶酶原激活物(PA)來調(diào)節(jié)纖溶系統(tǒng)活性，若PAI-1-675位點(diǎn)發(fā)生突變，可能導(dǎo)致PA活性降低，進(jìn)而導(dǎo)致血管內(nèi)纖維蛋白凝塊溶解降低，最終導(dǎo)致VTE發(fā)生[18]。

在遺傳流行病學(xué)領(lǐng)域，基因型的群體變異、種族變異被認(rèn)為是研究遺傳因素和疾病關(guān)系的重要橋梁。由于PAI-1的基因多態(tài)性分布存在明顯的性別、地區(qū)及種族差異，所以本研究對武漢地區(qū)1 533例漢族人群PAI-1-675位點(diǎn)進(jìn)行基因分型，并比較了不同性別、地區(qū)及種族間PAI-1-675位點(diǎn)等位基因及基因型頻數(shù)頻率分布差異，旨在為VTE的流行病學(xué)研究提供遺傳分子基礎(chǔ)。本研究我們發(fā)現(xiàn)，武漢地區(qū)漢族人群PAI-1-675位點(diǎn)等位基因及基因型分布不具有性別差異，提示性別可能不是武漢漢族人PAI-1-675位點(diǎn)4G/5G多態(tài)性分布的影響因素。

本研究還將本文結(jié)果與既往研究數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，我們發(fā)現(xiàn)武漢漢族PAI-1-675位點(diǎn)4G等位基因頻率顯著低于廣州，與青島、石家莊、濰坊、北京、長沙相比無顯著性差別。4G/4G基因型頻率顯著低于廣州、長沙，與青島、石家莊、濰坊、北京地區(qū)無顯著性差異；4G/5G基因型頻率顯著高于廣州、長沙，與青島、石家莊、濰坊、北京地區(qū)無顯著性差異。以上結(jié)果提示地區(qū)可能是PAI-1-675位點(diǎn)4G/5G多態(tài)性分布的影響因素，華中華北地區(qū)可能具有相似的PAI-1-675位點(diǎn)遺傳背景，而華南地區(qū)PAI-1-675位點(diǎn)遺傳多態(tài)性可能有自己的獨(dú)特性。

由于我國幅員遼闊民族多樣，導(dǎo)致遺傳背景可能存在差別，又由于本研究所采用的樣本量較大，有一定的代表性，因此我們選擇以武漢漢族人代表中國人與其他種族進(jìn)行比較。通過比較我們發(fā)現(xiàn)，武漢漢族人4G等位基因頻率顯著高于加納人、土耳其人、印度人、日本人、南非人，與荷蘭人、馬其頓人無顯著性差異；4G/4G基因型頻率高于加納人、土耳其人、印度人、馬其頓人、日本人、南非人；4G/5G基因型頻率高于加納人、土耳其人、印度人、日本人、南非人，低于馬其頓人，與荷蘭人無顯著性差異。以上結(jié)果提示種族可能是PAI-1-675位點(diǎn)遺傳多態(tài)性的影響因素。

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張耕(E-mail： 370924938@qq.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.31.031

R968

B

1002-266X(2017)31-0098-03

2017-03-13)