肖蒙蒙，王 燕，趙 德，鄧 君

(1.西南大學(xué)藥學(xué)院，重慶 400716；2. 重慶桑禾動(dòng)物藥業(yè)有限公司，重慶 401519)

瑪卡抗骨質(zhì)疏松的有效部位篩選

肖蒙蒙1，王 燕1，趙 德2，鄧 君1

(1.西南大學(xué)藥學(xué)院，重慶 400716；2. 重慶桑禾動(dòng)物藥業(yè)有限公司，重慶 401519)

瑪卡(Lepidiummeyemii)是十字花科獨(dú)行菜屬的一年生草本植物根莖，原產(chǎn)于秘魯海拔3 500米以上的高原地區(qū)[1]。本文旨在探索云南產(chǎn)黃瑪卡對(duì)骨質(zhì)疏松的治療作用，并進(jìn)一步篩選瑪卡抗骨質(zhì)疏松的有效部位。

1 材料與方法

1.1試劑與儀器云南鶴慶產(chǎn)黃色瑪卡；維甲酸、依替磷酸鈉(大連美侖生物公司)；血清鈣試劑盒、堿性磷酸酶(alkaline phosphatase, AKP)試劑盒、抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase, TRAP)試劑盒(南京建成生物工程研究所)。全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀(伯樂生命醫(yī)學(xué)公司)；紫外可見分光光度計(jì)UV-1800(上海美普達(dá)公司)；熒光顯微鏡ECLIPSE(尼康公司)；原子吸收分光光度計(jì)Z-5000(日立)。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物3月齡昆明小鼠，♀，體質(zhì)量28 g～35 g，SPF級(jí)。購(gòu)于重慶市中藥研究院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào)：SYXK(渝)2009-0002。

1.3方法80只昆明小鼠隨機(jī)分組，10只為空白組(Normal)，每天僅灌胃生理鹽水。其他70只上午灌胃維甲酸100 mg·kg-1，連續(xù)58 d。d 31，70只小鼠分為7組，下午分別灌胃生理鹽水、依替磷酸鈉60 mg·kg-1、瑪卡乙醇浸膏(ethanolic extract, EE)、瑪卡水溶部位(aqueous extract, AE)、正丁醇部位(n-butanol soluble part, BP)、乙酸乙酯部位(ethyl acetate soluble, EAP)、石油醚部位(petroleum ether soluble part, PEP)，瑪卡治療組給藥劑量相當(dāng)于瑪卡干粉2 g·kg-1。灌胃生理鹽水作為模型組(negative congtrol, NCK)，灌胃依替磷酸鈉作為陽性組(positive control, PCK)。測(cè)定血清鈣、TRAP、AKP含量，肝、脾、心、卵巢等器官的臟器系數(shù)，骨磷骨鈣含量和骨顯微結(jié)構(gòu)[2]。

2 結(jié)果

2.1瑪卡提取物對(duì)小鼠臟器系數(shù)的影響NCK組小鼠的脾臟系數(shù)明顯高于Normal(P<0.01)，卵巢系數(shù)明顯低于Normal(P<0.05)，PCK能改善維甲酸所致卵巢萎縮，但對(duì)其他臟器無明顯影響。AE可以明顯改善維甲酸所致脾腫大和卵巢萎縮(P<0.05)，BP能明顯改善維甲酸所致脾腫大(P<0.05)，其他瑪卡提取物對(duì)臟器系數(shù)無明顯改善作用。

2.2瑪卡提取物對(duì)小鼠血清生化指標(biāo)的影響與Normal組相比，NCK的血清鈣、AKP、TRAP差異都有顯著性(P<0.05)。EE能明顯升高模型動(dòng)物的血清鈣水平，降低模型動(dòng)物的AKP水平(P<0.05)。AE能明顯改善模型動(dòng)物的血清鈣、AKP和TRAP的水平(P<0.05)，其他瑪卡提取組對(duì)模型動(dòng)物的血清鈣、AKP和TRAP水平未見明顯影響。見Tab 1。

Tab 1 Effects of different extracts of Maca on serumbiochemistry parameters in osteoporotic mice(±s,n=10)

#P<0.05vsnormal;*P<0.05vsNCK

2.3瑪卡提取物對(duì)小鼠骨鈣和骨磷的影響Tab 2結(jié)果顯示，NCK小鼠的骨鈣和骨磷含量明顯低于Normal。而PCK能明顯增高模型小鼠的骨磷含量，但對(duì)骨鈣的作用不明顯。EE、AE和EAP能明顯提高模型小鼠的骨鈣水平，EE和BP對(duì)模型小鼠的骨磷含量有明顯提高(P<0.05)。

2.4瑪卡提取物對(duì)小鼠microCT指標(biāo)的影響與Normal相比，NCK的股骨骨密度、骨小梁數(shù)目和骨小梁厚度明顯降低，而骨小梁間距明顯增大，證明維甲酸確能致小鼠骨質(zhì)疏松。AE可明顯提高模型小鼠的骨密度、骨小梁數(shù)目和厚度，且減小骨間距；BP能明顯提高骨小梁數(shù)目(P<0.05)。

Tab 2 Effects of different extracts of Maca on femur calciumand phosphorus contents in osteoporotic mice(±s,n=10)

#P<0.05,##P<0.01vsnormal;*P<0.05vsNCK

3 討論

結(jié)果顯示，EE可以提高骨質(zhì)疏松模型小鼠的血清鈣、AKP水平、骨鈣和骨磷含量。而AE可改善模型小鼠的脾臟和卵巢系數(shù)、血清指標(biāo)、腰椎顯微結(jié)構(gòu)、骨鈣含量、骨密度。BP可明顯改善模型小鼠的脾臟系數(shù)、骨顯微結(jié)構(gòu)、骨磷含量。EAP能明顯提高骨鈣含量；PEP對(duì)維甲酸所致骨質(zhì)疏松癥狀沒有明顯改善作用。AE對(duì)骨質(zhì)疏松癥狀的改善效果最好，表明瑪卡中抗骨質(zhì)疏松的有效成分是高極性成分，主要集中在水溶性部位。

植物多酚和甾醇[3-4]曾被提出是抗骨質(zhì)疏松的有效成分，但植物甾醇屬于低極性成分，主要存在于石油醚部位，故不是瑪卡的抗骨質(zhì)疏松有效成分。有人提出多酚類化合物通過降低骨吸收、增加成骨細(xì)胞活性而發(fā)揮骨保護(hù)作用[5]，故本文支持多酚是瑪卡抗骨質(zhì)疏松的有效成分，但尚需進(jìn)一步研究。

[1] 周嚴(yán)嚴(yán), 趙海譽(yù), 司 南,等. 藥用植物瑪咖研究新進(jìn)展[J]. 中國(guó)中藥雜志, 2015,40(23): 4521-30.

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Screeningofanti-osteoporosispartsofLepidiummeyemii

XIAO Meng-meng1, WANG Yan1, ZHAO De2, DENG Jun1

(1.CollegeofPharmaceuticalSciences,SouthwestUniversity,Chongqing400716,China; 2.ChongqingHonoroadAnimalHealthCo.Ltd,Chongqing401519,China)

瑪卡；十字花科；有效部位；骨質(zhì)疏松；水溶性部位；

Maca; Brassicaceae; effective part; osteoporosis; aqueous extract; mice

時(shí)間：2017-8-20 16:47 網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20170820.1647.056.html

2017-05-14，

2017-06-29

肖蒙蒙(1990-)，女，碩士生，研究方向：中藥化學(xué)及天然產(chǎn)物，E-mail: mengxiao02@163.com； 鄧 君(1971-)，女，博士，副教授，研究方向：天然藥物化學(xué)及中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，通訊作者，E-mail: dengjcq@163.com

10.3969/j.issn.1001-1978.2017.09.028

A

：1001-1978(2017)09-1331-02

R-332；R282.71；R284.1；R681.053.1

小鼠