劉雯　　龔玲　　曹偉　　俞瑩　　應(yīng)筱雯　　鮑彩麗　　杜山青

[摘要] 目的 對(duì)免疫透射比濁法測(cè)定血清胱抑素C的方法學(xué)性能行初步評(píng)價(jià)，并與免疫散射比濁法進(jìn)行比較。 方法 應(yīng)用Rohe Modular P全自動(dòng)生化分析儀與SIEMENS BN ProSpec特定蛋白儀分別對(duì)血清胱抑素C進(jìn)行初步的方法學(xué)評(píng)價(jià)，包括精密度、線性回歸試驗(yàn)、回收試驗(yàn)、干擾試驗(yàn)。 結(jié)果 免疫透射比濁法和免疫散射比濁法無(wú)論是批內(nèi)還是批間精密度均符合要求，CV均<4.5%；2種方法從低檢測(cè)范圍到高檢測(cè)范圍，均有著良好的線性回歸，斜率均接近于1，截距均接近于0，R2均>0.95；免疫透射比濁法與免疫散射比濁法的回收率均>96%；干擾物試驗(yàn)結(jié)果顯示血紅蛋白、三酰甘油及膽紅素均對(duì)測(cè)定無(wú)明顯影響。 結(jié)論 免疫透射檢驗(yàn)的靈敏度較高，檢測(cè)范圍廣，與免疫散射試驗(yàn)的結(jié)果基本一致，系統(tǒng)誤差小、抗干擾能力強(qiáng)，且更加快速、實(shí)用和便利。

[關(guān)鍵詞] 免疫透射比濁法；免疫散射比濁法；血清胱抑素C；方法學(xué)；檢驗(yàn)

[中圖分類(lèi)號(hào)] R446.6 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701（2017）21-0096-03

Methodological comparison of transmitted immunoturbidimetric assay and scatter turbidimetric assay in the determination of serum cystatin C

LIU Wen GONG Ling CAO Wei YU Ying YING Xiaowen BAO Caili DU Shanqing

Clinical Laboratory， Yangpu Hospital Affiliated to Tongji University， Shanghai 200093， China

[Abstract] Objective To initially evaluate the methodological properties of serum cystatin C by transmitted immunoturbidimetric assay and compare it with scatter turbidimetric assay. Methods Methodological evaluation was carried out for the serum cystatin C by Rohe Modular P automatic biochemical analyzer and SIEMENS BN ProSpec specific protein instrument， including precision， linear regression test， recovery test and interference test. Results Transmitted immunoturbidimetric assay and scatter turbidimetric assay both conformed to the requirements of intra-or inter-batch precision， and CV was <4.5%； the two methods had good linear regression from the low detection range to the high detection range， the slope was both close to 1， the intercept was both close to 0， and R2 was both>0.95； the recovery rates of transmitted immunoturbidimetric assay and scatter turbidimetric assay were both>96%； interferent test results showed that hemoglobin， triglyceride and bilirubin had no significant effects on the determination. Conclusion The sensitivity of immune transmission test is high， the detection range is wide， which is consistent with the result of scatter turbidimetric assay. The system error is small， the anti-interference ability is strong， and it is more rapid， practical and convenient.

[Key words] Transmitted immunoturbidimetric assay； Scatter turbidimetric assay； Serum cystatin C； Methodology； Test

胱抑素C（CysC）又稱(chēng)為半胱氨酸蛋白酶抑制劑C。近年來(lái)，由于高血壓、糖尿病發(fā)病率的上升，其作為理想的反映腎小球?yàn)V過(guò)率的靈敏指標(biāo)日益受到臨床重視，國(guó)外對(duì)CysC的臨床應(yīng)用報(bào)道較多，認(rèn)為其血濃度能夠較準(zhǔn)確地反映GFR[1-3]。目前已建立的多種測(cè)定方法，包括免疫熒光測(cè)定（FIA）、酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）、免疫透射比濁法（PETIA）與免疫散射比濁法（PENIA），我們應(yīng)用Rohe Modular P全自動(dòng)生化分析儀與SIEMENS BN ProSpec特定蛋白儀對(duì)CysC進(jìn)行了初步的方法學(xué)比較[4-5]，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器

免疫透射比濁法使用Rohe Modular P全自動(dòng)生化分析儀、免疫散射比濁法使用SIEMENS BN ProSpec特定蛋白儀。

1.2 試劑

均為儀器配套試劑，其中BN-P的質(zhì)控品來(lái)源于配套試劑盒；Modular P的質(zhì)控品來(lái)源于上海市臨床檢驗(yàn)中心。羅氏與西門(mén)子的CysC校準(zhǔn)品值可溯源至ERM-DA472。

1.3 標(biāo)本來(lái)源

標(biāo)本均來(lái)自2016年1～10月的我院住院患者標(biāo)本。

1.4 方法

1.4.1 兩種方法的批內(nèi)精密度測(cè)定 將Modular P生化分析儀上的CysC低值、高值質(zhì)控品及BN ProSpec特定蛋白儀上的CysC低值、高值質(zhì)控品連續(xù)測(cè)定20次用于計(jì)算批內(nèi)精密度。

1.4.2 兩種方法的批間精密度測(cè)定 將Modular P生化分析儀上的CysC低值、高值質(zhì)控品以及BN ProSpec特定蛋白儀上的CysC低值、高值質(zhì)控品每天測(cè)定5次，每次間隔>1 h，連續(xù)測(cè)定4 d用于計(jì)算批間精密度。

1.4.3 兩種方法的線性分析 取2種不同方法的低濃度（接近于檢測(cè)下限）和高濃度標(biāo)本，按5/5 L+0/5 H、4/5 L+1/5 H、3/5 L+2/5 H、2/5 L+1/5 H、1/5 L+4/5 H、0/5 L+5/5 H的比例配置樣本，對(duì)樣本進(jìn)行檢測(cè)，每個(gè)樣本檢測(cè)3次，取均值作為最終結(jié)果。根據(jù)配置關(guān)系計(jì)算預(yù)期樣本量，并以之為橫軸，實(shí)際平均值為縱軸制作回歸分析模型。

1.4.4 兩種方法的回收試驗(yàn) 取混合血清樣本加入等體積、不同濃度的CysC標(biāo)準(zhǔn)液，加入標(biāo)準(zhǔn)液濃度分別為1/2原標(biāo)準(zhǔn)液濃度，計(jì)算回收率。

1.4.5 兩種方法的干擾試驗(yàn) 采用新鮮全血配置成干擾物，分為5.0 g/L、10.0 g/L兩種血紅蛋白濃度；膽紅素干擾物直接使用羅氏Cfas凍干標(biāo)準(zhǔn)品；三酰甘油酯干擾物直接使用脂肪注射液，用0.9%NACL直接配制成濃度為4.7 mmol/L和9.5 mmol/L干擾物，分別用免疫透射比濁法和免疫散射比濁法進(jìn)行干擾試驗(yàn)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

使用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，采用描述性分析，偏態(tài)分布計(jì)量資料用中位數(shù)表示，計(jì)數(shù)資料用%表示，兩種檢驗(yàn)方案分別采用CysC線性試驗(yàn)分析并繪制線形圖，檢驗(yàn)值α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 免疫透射比濁法和免疫散射比濁法的批內(nèi)精密度評(píng)價(jià)

批內(nèi)對(duì)比顯示，散射比濁法的低值質(zhì)控品和高值質(zhì)控品的CV值均略高于透射比濁法，但兩組對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

2.2 免疫透射比濁法和免疫散射比濁法的批間精密度比較

批間對(duì)比顯示，散射比濁法的低值質(zhì)控品和高值質(zhì)控品的CV值均略高于透射比濁法，但兩組對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

2.3 免疫散射比濁法檢測(cè)CysC線性試驗(yàn)分析

散射比濁法的CysC線性試驗(yàn)R2=0.99197，透射比濁法的CysC線性試驗(yàn)R2=0.99231

2.4 回收試驗(yàn)（免疫散射比濁法）

取混合血清標(biāo)本（CysC濃度為1.12 mg/L）加入0.176 mg/L、0.885 mg/L、1.764 mg/L、濃度的標(biāo)準(zhǔn)液，并加入50%濃度的標(biāo)準(zhǔn)液，平均回收率為97.0%。

2.5 回收試驗(yàn)（免疫透射比濁法）

取混合血清標(biāo)本（CysC濃度為0.966 mg/L）加入0.377 mg/L、1.510 mg/L、3.525 mg/L濃度的標(biāo)準(zhǔn)液，并加入50%濃度的標(biāo)準(zhǔn)液，平均回收率為98.2%。

2.6 干擾試驗(yàn)

3 討論

散射比濁法和透射比濁法的原理有所差異，前者是利用光線被液體粒子折射后的偏轉(zhuǎn)角度來(lái)判斷相關(guān)成分的含量，而后者則主要是檢測(cè)復(fù)合物成分對(duì)光線的吸收率來(lái)分析成分[6-7]。以往認(rèn)為免疫透射檢驗(yàn)雖然具有一定優(yōu)勢(shì)，但存在檢驗(yàn)范圍狹窄、靈敏度較低的缺陷，主要是由于檢驗(yàn)復(fù)合物并不能完全阻擋光線的通過(guò)或復(fù)合物過(guò)少導(dǎo)致濁度變化難以體現(xiàn)。近年來(lái)，隨著檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的日趨發(fā)展，全自動(dòng)生化儀目前的技術(shù)已非常成熟[8-9]。

以往普遍認(rèn)為免疫透射比濁法的靈敏度不夠理想，檢測(cè)范圍不夠?qū)?，原因是免疫?fù)合物顆粒太小阻擋不了光線的通過(guò)；或是免疫復(fù)合物的數(shù)量太少，其濁度變化對(duì)光通量的透過(guò)影響不大，特別是在低濃度時(shí)更加明顯[10-11]。而在抗原過(guò)量情況下，透射比濁法易出現(xiàn)鉤狀效應(yīng)而導(dǎo)致結(jié)果偏低。而在速率散射比濁法檢測(cè)時(shí)，儀器設(shè)計(jì)有抗原過(guò)量檢測(cè)系統(tǒng)，抗原過(guò)量時(shí)會(huì)提示樣本稀釋?zhuān)瑥亩_(dá)到檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和精密度[12-13]。由此，在比較實(shí)驗(yàn)中，速率散射比濁法在低濃度和高濃度測(cè)定中可以得到較為準(zhǔn)確的結(jié)果。但是，在基層醫(yī)療單位，常常沒(méi)有條件滿足使用散射比濁法測(cè)定特定蛋白，應(yīng)用免疫透射比濁法檢測(cè)就顯得更加重要。其次，隨著檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的日趨發(fā)展，檢驗(yàn)質(zhì)量管理已規(guī)范化，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)重視不同檢測(cè)方法之間檢測(cè)結(jié)果是否存在一致性的問(wèn)題[14]。從本文數(shù)據(jù)來(lái)看，可以看出免疫透射比濁法與免疫散射比濁法的相關(guān)性好，R2>0.95。其回歸方程，斜率均接近于1，截距均接近于0；免疫透射比濁法無(wú)論是批內(nèi)精密度還是批間精密度都非常好，CV均<5%。

以往認(rèn)為，由于免疫透射比濁法所采用的全自動(dòng)生化分析儀，可聯(lián)合應(yīng)用雙波長(zhǎng)檢測(cè)、樣本自動(dòng)稀釋?zhuān)c樣本空白對(duì)照檢測(cè)，有助于最小化干擾因素對(duì)檢測(cè)的影響，并且本研究選擇的試劑廠商，提供了全面詳細(xì)的技術(shù)參數(shù)設(shè)置，在使用以上特定蛋白檢測(cè)參數(shù)時(shí)，已經(jīng)充分運(yùn)用儀器的各項(xiàng)技術(shù)條件，使臨床上常見(jiàn)的干擾物所能引起的干擾降到了最小。而免疫散射比濁法對(duì)較大顆粒的CH，嚴(yán)重溶血時(shí)的Hb干擾等，儀器本身可能就存在不足，在檢測(cè)試劑和儀器參數(shù)設(shè)置等方面，也未充分提高臨床抗干擾物的實(shí)踐能力[15]。因此，免疫散射比濁法的抗干擾能力較弱，但還是符合臨床檢測(cè)要求。但從本次研究的干擾試驗(yàn)的結(jié)果可知溶血、黃疸、脂血對(duì)2種方法的測(cè)定干擾均很小。

免疫透射比濁法還有其他一些優(yōu)點(diǎn)，如儀器投資成本低，不需要另配專(zhuān)用的特定蛋白分析儀；患者收費(fèi)低；由于可以和生化樣本合并，故可以降低采血管的成本；生化分析儀的檢測(cè)速度快，檢驗(yàn)報(bào)告時(shí)間短[16]。

因此，與免疫散射比濁法比較，免疫透射比濁法具有優(yōu)良的精密度，相似的分析靈敏度和檢測(cè)范圍，良好的相關(guān)性，抗干擾能力小，系統(tǒng)誤差小，且更加實(shí)用和方便。

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（收稿日期：2017-04-12）