何國斌，孫 超，李文浩，虞榮斌，朱中海，李文靜，韓 蓓，程 悅,，曾令霞

(1.西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部公共衛(wèi)生學(xué)院流行病與衛(wèi)生統(tǒng)計學(xué)系，陜西 西安 710061；2.陜西省營養(yǎng)與食品安全工程研究中心，陜西 西安 710061)

抗生素使用對冬春季嬰幼兒腸道菌群內(nèi)部相關(guān)性的影響

何國斌1，孫 超1，李文浩1，虞榮斌1，朱中海1，李文靜1，韓 蓓2，程 悅1,2，曾令霞1

(1.西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部公共衛(wèi)生學(xué)院流行病與衛(wèi)生統(tǒng)計學(xué)系，陜西 西安 710061；2.陜西省營養(yǎng)與食品安全工程研究中心，陜西 西安 710061)

目的 研究抗生素使用對冬春季嬰幼兒腸道菌群內(nèi)部相關(guān)性的影響。方法 采用1:1病例對照研究設(shè)計，選取于陜西省商洛市中心醫(yī)院就診患腹瀉疾病的2歲以下患兒為病例組，同期到該醫(yī)院進行健康體檢或免疫接種的健康嬰幼兒作為對照組。采用二代測序的技術(shù)檢測嬰幼兒樣本糞便中微生物群落的組成結(jié)構(gòu)和多樣性。繪制細菌屬水平相關(guān)性網(wǎng)絡(luò)圖，分析各菌屬之間的相關(guān)性。結(jié)果 本研究共收集糞便樣本120例，最終納入分析的樣本數(shù)為115。在對照組中，擬桿菌屬與其他菌屬存在最多關(guān)聯(lián)，大腸埃希菌/志賀菌屬、不動桿菌屬、芽孢桿菌屬和Lysinibacillus菌屬存在明顯正相關(guān)性(r值分別為0.640、0.945、0.892，均P<0.05)，后3種菌屬數(shù)量上的增加直接影響了擬桿菌數(shù)量的減少，但擬桿菌卻未表現(xiàn)出與大腸埃希菌/志賀菌的負相關(guān)性(r=-0.252，P>0.05)；在腹瀉未使用抗生素組的嬰幼兒中，Akkermansia菌與其他菌屬存在最多的關(guān)聯(lián)，它與普雷沃氏菌屬、Barnesiella菌、地桿菌存在兩兩正相關(guān)性(r值分別為0.735、0.798、0.833，均P<0.05)，Akkermansia菌通過與芽孢桿菌和不動桿菌的正相關(guān)性(r值分別為0.473、0.401，均P<0.05)，影響大腸埃希菌和Lysinibacillus菌屬的數(shù)量，但Akkermansia菌、芽孢桿菌屬卻與大腸埃希菌沒有直接的相關(guān)關(guān)系；在腹瀉使用抗生素組中，地桿菌屬與其他菌屬聯(lián)系最多，并且出現(xiàn)了兩大正相關(guān)集團，一是以地桿菌為中心，表現(xiàn)為地桿菌與不動桿菌、普雷沃氏菌、Barnesiella菌、Lysinibacillus菌和芽孢桿菌屬的正相關(guān)關(guān)系(r值分別為0.622、0.876、0.911、0.435、0.606，均P<0.05)，另一個是以韋榮氏菌為中心，表現(xiàn)為韋榮氏菌與Akkermansia菌、嗜血菌和Megasphaera菌屬存在正相關(guān)關(guān)系(r值分別為0.414、0.773、0.567，均P<0.05)，兩大集團存在拮抗作用，表現(xiàn)為韋榮氏菌和嗜血菌對地桿菌存在負相關(guān)(r=-0.538、-0.380，P<0.05)，并且韋榮氏菌豐度的增加會抑制芽孢桿菌、普雷沃氏菌、地桿菌和Barnesiella菌屬的豐度值，同時腸球菌豐度的增加也會使第一集團菌屬豐度相應(yīng)減少，雙歧桿菌僅對芽孢桿菌存在負相關(guān)作用(r=-0.403，P<0.05)。抗生素的使用增加了腸道菌群在屬水平的內(nèi)部相關(guān)性復(fù)雜程度，并改變了與其他菌屬聯(lián)系最多的菌屬類別。結(jié)論 抗生素的使用導(dǎo)致了嬰幼兒腸道菌群微生態(tài)失衡。

腸道菌群；抗生素；嬰幼兒；內(nèi)部相關(guān)性

人體內(nèi)定植的微生物群與人類的疾病密切相關(guān)，對人體健康有重要影響[1]?，F(xiàn)有研究表明，嬰幼兒腸道菌群的發(fā)育程度和穩(wěn)定性受到多種因素影響，包括早產(chǎn)、分娩方式、喂養(yǎng)方式、抗生素和益生菌的使用等[2]?？股厥悄壳白畛Ｒ姷膬和幏剿幬?，而嬰幼兒期是腸道菌群形成和穩(wěn)定的關(guān)鍵時期，抗生素的使用會改變腸道菌群的組成結(jié)構(gòu)和多樣性，引起菌群微生態(tài)失衡，對嬰幼兒的健康成長造成長遠的不良影響，有關(guān)流行病學(xué)資料甚至表明許多成年疾病與早期抗生素使用相關(guān)[3]。然而，國內(nèi)有關(guān)抗生素使用對嬰幼兒腸道菌群影響作用的研究鮮有報道，且已有研究存在實驗室檢測手段落后，樣本量偏少等問題。本研究利用高通量測序技術(shù)對嬰幼兒的腸道菌群進行了16S rDNA基因測序，在前期探討抗生素使用對嬰幼兒腸道菌群多樣性影響的基礎(chǔ)上，進一步探討嬰幼兒期抗生素的使用對腸道菌群內(nèi)部相關(guān)性的影響。

1對象和方法

1.1研究設(shè)計和對象

采用1:1病例對照研究設(shè)計。研究對象為2013年12月至2014年1月來商洛市中心醫(yī)院就診的患腹瀉疾病的2歲以下患兒為病例組，同期到該醫(yī)院進行健康體檢或免疫接種的健康嬰幼兒作為對照組?？紤]到嬰幼兒的健康狀態(tài)可能會影響其抗生素的使用，故將全部研究對象分為3組，即對照組、腹瀉未使用抗生素組和腹瀉使用抗生素組。

1.2研究對象納入標(biāo)準(zhǔn)

健康嬰幼兒納入標(biāo)準(zhǔn)：近一月內(nèi)未患腹瀉及其他相關(guān)疾病，無出生缺陷。腹瀉嬰幼兒納入標(biāo)準(zhǔn)：符合《嬰幼兒疾病診療指南》[4]中腹瀉診斷的嬰幼兒，糞便性狀改變；排便次數(shù)≥3次/天或比平日增多超過1倍以上。

1.3樣本量的確定

正常2歲以下嬰幼兒腹瀉發(fā)病率為P0=30%[5]，而抗生素相關(guān)性腹瀉發(fā)病率為P1=5%[6]，按照95%的置信度、90%的檢驗效能及病例對照研究設(shè)計，則病例組和對照組各需47例，按照約20%的拒絕率，研究樣本擴大至120例(每組各60例)。為確保研究樣本的代表性，實際樣本采集中按照嬰幼兒月齡分為三層：“0～5月齡”、“6～11月齡”、“12～24月齡”，每層內(nèi)分別采集20例病例及20例對照。

1.4糞便樣本采集

采用一次性無菌離心管由醫(yī)院指定醫(yī)生采集健康及腹瀉嬰幼兒腸道糞便(每人份2～5g)，后凍存于-80℃冰箱。為避免采集過程中糞便遭受污染，所有糞便收集后即刻用75%酒精浸泡滅菌的蠟紙封閉保存。糞便樣本的轉(zhuǎn)移均置于-20℃的冰盒中。

1.5細菌DNA的提取和驗證

購買QIAGEN QIAamp MiniStool Kit(QIAGEN，Hilden，Germany)專用試劑盒提取糞便中的總DNA，提取出的總DNA采用NanoPhotometer TM(IMPLEN，Germany)儀器進行在260nm和280nm吸光度的檢測，用260nm/280nm的吸光度比值檢測提取物中總DNA的濃度，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其比值均在1.7～1.9，證明純度良好可以進行下一步實驗。合成細菌16S rDNA V3～V4區(qū)片段通用引物(由上海生工生物技術(shù)服務(wù)有限公司合成)，引物對為F338/R534[7]，具體序列為F338(5′ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3′)和R534(5′ATTACCGCG￣GCTGCTGG-3′)，PCR擴增提取的總DNA，對PCR產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳分析，以驗證細菌總DNA。

1.6高通量測序

采用Illumina公司的Miseq 250PE測序平臺，對細菌16S rDNA基因V4區(qū)進行高通量測序，并對測序結(jié)果進行生物信息學(xué)分析。該過程委托深圳市千年盛世基因科技有限公司。

1.7質(zhì)量控制

調(diào)查員均經(jīng)過統(tǒng)一培訓(xùn)，現(xiàn)場嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)收取樣本；標(biāo)準(zhǔn)化無污染操作采集糞便，控制糞便的空氣暴露時間，及時凍存糞便樣本；除二代測序以外的實驗操作均在標(biāo)準(zhǔn)化無污染的實驗室中完成，保證糞便不引入環(huán)境中的雜菌。

1.8研究經(jīng)費來源及倫理學(xué)問題

本研究數(shù)據(jù)來自于國家自然科學(xué)基金(編號:81373019)項目。并通過“西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)生物科研倫理學(xué)委員會”審批(倫理學(xué)批件號:2013-093)。所有調(diào)查包括糞便樣品采集均獲得嬰幼兒家長的知情同意。

1.9統(tǒng)計學(xué)方法

流行病學(xué)資料的數(shù)據(jù)采用EPI Data 3.1軟件數(shù)據(jù)錄入，使用SPSS 20.0軟件進行數(shù)據(jù)整理和分析。計數(shù)資料用頻數(shù)、百分比表示，組間差異性比較采用χ2檢驗。實驗室的嬰幼兒腸道菌群信息采用CASAVA v1.8.2和FastQC軟件，按Illumina 標(biāo)準(zhǔn)流程進行base calling及數(shù)據(jù)產(chǎn)出統(tǒng)計，用以檢驗本次實驗精度；按標(biāo)準(zhǔn)原則對數(shù)據(jù)進行過濾，reads雙端merge，按照barcode序列區(qū)分樣本序列，去除barcode及引物序列，分別對每個樣本和所有樣本的數(shù)據(jù)產(chǎn)出和reads長度分布進行統(tǒng)計，得到各樣本可操作分類單元(operational taxonomic unit，OTU)數(shù)。將檢出的序列和Greengenes數(shù)據(jù)庫比對進行樣本物種的確定，計算劃分為特定物種的OTU數(shù)目與各樣本內(nèi)總的OTU數(shù)目的比值，稱為該物種的相對豐度。再利用各菌的相對豐度數(shù)據(jù)進行各菌種之間的相關(guān)性分析。假設(shè)檢驗均采用雙側(cè)檢驗，檢驗水準(zhǔn)為0.05。

2結(jié)果

2.1一般資料

本研究共收集糞便樣本120例，其中有5例經(jīng)篩選后排除，最終納入分析的樣本數(shù)為115，健康對照組59例、腹瀉未使用抗生素組28例和腹瀉使用抗生素組28例。對嬰幼兒的月齡分布進行了組間比較后發(fā)現(xiàn)，3組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=1.932，P=0.748)，排除了月齡因素在各分組間的差異，見表1。

表1 嬰幼兒月齡分布[n(%)]

Table 1 Distribution of infants’ months of age[n (%)]

月齡健康對照組腹瀉未使用抗生素組腹瀉使用抗生素組χ2P0～523(39.0)11(39.3)9(32.1)1.9320.7486～1117(28.8)10(35.7)12(42.9)12～2419(32.2)7(25.0)7(25.0)

2.2菌種測序信息結(jié)果質(zhì)量分析

本次進行16S rDNA V4區(qū)高通量實驗測序的樣本共120例，其中有5例因在提取DNA的過程中有所污染或量不足，導(dǎo)致測序結(jié)果失敗，故最終實際參與測序的樣本共115例。本次實驗構(gòu)建了2個shortgun文庫，其中超過90%的序列堿基質(zhì)量均在Q30以上，平均讀長為328bp，且各文庫的總序列數(shù)均超過100萬條。各樣本在序列接近120 000條時便已達到平臺期。證明此次測序結(jié)果滿足后續(xù)分析要求。

2.3腸道菌群菌種相關(guān)性分析

利用屬水平占比前80%的菌屬豐度信息，篩選其中15種可以明確屬名稱的菌屬進行相關(guān)性分析(見表2～表4)，并繪制重要菌屬相關(guān)性網(wǎng)絡(luò)圖，描述其中具有統(tǒng)計學(xué)意義的菌屬關(guān)系，見圖1。

圖1 重要菌屬相關(guān)性網(wǎng)絡(luò)圖

Fig.1 Network diagram of internal correlation of main bacteria genuses

2.3.1對照組菌屬相關(guān)性分析

在對照組中，與其他菌屬存在最多聯(lián)系關(guān)系的菌屬是擬桿菌屬，大腸埃希菌/志賀菌屬、不動桿菌屬、芽孢桿菌屬和Lysinibacillus菌屬存在明顯正相關(guān)性(r分別為0.640、0.945、0.892，均P<0.05)，后3種菌屬數(shù)量上的增加直接影響了擬桿菌數(shù)量的減少，但擬桿菌卻未表現(xiàn)出與大腸埃希菌/志賀菌的負相關(guān)性(r=-0.252，P>0.05)；Barnesiella菌屬與地桿菌屬和普雷沃氏菌屬存在正相關(guān)性(r分別為0.959、0.867，均P<0.05)；擬桿菌和Akkermansia菌屬存在正相關(guān)性(r=0.395，P<0.05)，鏈球菌屬與嗜血菌屬也存在正相關(guān)性(r=0.329，P<0.05)，見表2。

表2 對照組重點菌屬相關(guān)性分析(r)

注：*按P<0.05檢驗水準(zhǔn)差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.3.2腹瀉未使用抗生素組菌屬相關(guān)性分析

在腹瀉未使用抗生素組的嬰幼兒中，Akkermansia菌與其他菌屬存在最多關(guān)聯(lián)，它與普雷沃氏菌屬、Barnesiella菌、地桿菌存在兩兩正相關(guān)性(r值分別為0.735、0.798、0.833，均P<0.05)，同時Akkermansia菌通過與芽孢桿菌和不動桿菌的正相關(guān)性(r值分別為0.473、0.401，均P<0.05)，還可以影響大腸埃希菌和Lysinibacillus菌屬的數(shù)量，但Akkermansia菌和芽孢桿菌屬卻與大腸埃希菌沒有直接的相關(guān)關(guān)系，雙歧桿菌屬豐度的增加會使腸球菌和Megasphaera菌屬豐度增加，后兩者卻無明顯正相關(guān)關(guān)系；韋榮氏菌屬豐度的上升直接影響了Akkermansia菌、Barnesiella菌和地桿菌屬豐度的增加，但對普雷沃氏菌的影響無統(tǒng)計學(xué)意義，見表3。

2.3.3腹瀉使用抗生素組菌屬相關(guān)性分析

在腹瀉使用抗生素組中，地桿菌屬與其他菌屬聯(lián)系最多。在這組嬰幼兒的腸道內(nèi)出現(xiàn)了兩大正相關(guān)集團，其一是以地桿菌為中心，表現(xiàn)為地桿菌與不動桿菌、普雷沃氏菌、Barnesiella菌、Lysinibacillus菌和芽孢桿菌屬的明顯正相關(guān)關(guān)系(r值分別為0.622、0.876、0.911、0.435、0.606，均P<0.05)，另一個是以韋榮氏菌為中心，與Akkermansia菌、嗜血菌和Megasphaera菌屬存在明顯正相關(guān)關(guān)系(r值分別為0.414、0.773、0.567，均P<0.05)，兩大集團存在拮抗作用，表現(xiàn)為韋榮氏菌和嗜血菌與地桿菌存在負相關(guān)性(r=-0.538、-0.380，P<0.05)，并且韋榮氏菌豐度的增加會抑制芽孢桿菌、普雷沃氏菌、地桿菌和Barnesiella菌屬的豐度值，同時腸球菌豐度的增加也會使第一集團菌屬豐度相應(yīng)減少，雙歧桿菌僅對芽孢桿菌存在負相關(guān)作用(r=-0.403，P<0.05)，見表4。

表3 腹瀉未使用抗生素組重點菌屬相關(guān)性分析(r)

注：*按P<0.05檢驗水準(zhǔn)差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

表4 腹瀉使用抗生素組重點菌屬相關(guān)性分析(r)

注：*按P<0.05檢驗水準(zhǔn)差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3討論

3.1本研究的主要發(fā)現(xiàn)

人類腸道內(nèi)微生物群所表現(xiàn)出來的重要生理功能，如免疫調(diào)節(jié)、代謝、營養(yǎng)和保護作用，都是源于腸道內(nèi)微生物的平衡共生體系[7]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)：隨著抗生素的使用，腸道內(nèi)菌群的相互聯(lián)系變得復(fù)雜，并且起到關(guān)鍵作用的菌種也隨之改變。說明抗生素的使用在一定程度上導(dǎo)致了腸道微生態(tài)失衡。而腸道內(nèi)任何一種微生物功能的變異或扭曲都可能導(dǎo)致一系列疾病的發(fā)生，包括代謝綜合征和肥胖相關(guān)疾病、肝臟疾病、腸易激綜合征，炎癥性腸病和結(jié)腸直腸癌等[1]。當(dāng)前，許多醫(yī)務(wù)人員大量使用抗生素預(yù)防手術(shù)后感染，有研究認為這不僅嚴(yán)重破壞了腸道菌群穩(wěn)態(tài)，同時增強了抗生素耐藥性的傳播[8]，進一步導(dǎo)致腸道菌群健康狀況的惡化。以上均提示醫(yī)療機構(gòu)要規(guī)范化抗生素使用指征，防止抗生素的濫用。

3.2腹瀉和抗生素使用對腸道菌群內(nèi)部相關(guān)性的影響

本研究對照組中與眾細菌聯(lián)系最多的菌為擬桿菌屬，其直接抑制了芽孢桿菌屬、Lysinibacillus菌屬和不動桿菌屬，并間接抑制了與上述3種菌存在正相關(guān)關(guān)系的大腸埃希菌/志賀菌屬。綜合考慮芽孢桿菌屬、Lysinibacillus菌屬、不動桿菌、大腸埃希菌/志賀菌屬的致病菌屬性，本研究認為擬桿菌屬是健康嬰幼兒人群中維持腸道菌群穩(wěn)態(tài)最重要的菌屬，這一結(jié)論與Palmer等于2007年的研究結(jié)果相似。隨著嬰幼兒由健康狀態(tài)轉(zhuǎn)為腹瀉狀態(tài)，關(guān)聯(lián)最多的菌種從擬桿菌屬變?yōu)锳kkermansia菌屬，各菌屬之間的關(guān)系也變得復(fù)雜。這一結(jié)果表明腹瀉和腸道菌群穩(wěn)態(tài)之間有一定的關(guān)聯(lián)，但兩者之間的因果關(guān)系還需要進一步的研究來證實。在腹瀉使用抗生素組中地桿菌屬成為關(guān)聯(lián)最多的菌屬類型，抗生素的加入改變了原來Akkermansia菌屬與韋榮氏菌的負相關(guān)關(guān)系，并且建立起了地桿菌和Lysinibacillus菌屬的相關(guān)通道。說明抗生素的使用可能會改變腸道微生態(tài)環(huán)境，破壞腸道菌群定植抗力，從而促進某些致病菌的定植，這一結(jié)果與黃文獻等的研究結(jié)果一致[9]。在一項最新的研究中，研究人員甚至發(fā)現(xiàn)抗生素通過增加營養(yǎng)物質(zhì)的可獲得性，促進了沙門菌在腸道內(nèi)的茁壯成長[10]。此外，相比于腹瀉未使用抗生素組，腹瀉使用抗生素組的腸道微生態(tài)失調(diào)情況更加嚴(yán)重。這提示給嬰幼兒治療腹瀉時，在不影響臨床治療效果的前提下，抗生素處方的使用應(yīng)當(dāng)充分考慮其對于腸道菌群的影響[11]。

3.3本研究的局限性、特點及主要結(jié)論

日常生活中嬰幼兒抗生素攝入不僅來源于藥品，有研究指出食物中抗生素殘留也會導(dǎo)致腸道菌群紊亂[12]，甚至即使是不同種類的抗生素攝入對腸道菌群的影響差別也非常之大[13]。由于條件所限，本研究未納入以上因素，是局限性所在。但相比于以往實驗室糞便細菌培養(yǎng)得到的腸道菌群數(shù)據(jù)開展分析，本研究采用Illumina二代基因測序技術(shù)，對細菌的測量和分型達到了基因水平，并利用序列拷貝數(shù)進行細菌定量，做到細菌分析的最小誤差水平。同時按不同菌屬分類分析相關(guān)性得到關(guān)系圖網(wǎng)從而實現(xiàn)降維歸類，得出的結(jié)果準(zhǔn)確直觀，能夠較為準(zhǔn)確地反映抗生素使用對腸道菌群內(nèi)部相關(guān)性的影響，為規(guī)范化嬰幼兒抗生素使用提供了科學(xué)依據(jù)。綜上所述，抗生素的使用導(dǎo)致了嬰幼兒腸道菌群微生態(tài)失衡，醫(yī)療機構(gòu)要規(guī)范化抗生素使用指征，在不影響臨床療效的前提下，充分考慮其對腸道菌群的影響，防止抗生素濫用。

有研究發(fā)現(xiàn)人類腸道微生物的初始狀態(tài)能在一定程度上決定抗生素對其的影響，提出監(jiān)測微生物組治療前的初始成分可以幫助預(yù)防一些抗生素或其他治療方法帶來的不利影響[14]，這對于下一步的研究方向有著重要的指導(dǎo)意義?？傊?，建立一個龐大而多樣化的基線隊列來探索和定義嬰幼兒腸道菌群的發(fā)展過程及其影響因素，探討生命早期抗生素使用對腸道微生物結(jié)構(gòu)變化的作用機制，對于預(yù)防和治療小兒腸道微生態(tài)失衡具有十分重要的意義，同時將能在大量實驗證據(jù)的基礎(chǔ)上，為嬰幼兒期抗生素的進一步規(guī)范化使用提供指導(dǎo)性建議。

致謝：感謝陜西省商洛市中心醫(yī)院的支持和幫助，感謝所有配合調(diào)查的家庭及曾經(jīng)參與過項目的學(xué)生！

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[專業(yè)責(zé)任編輯：楊文方]

Effect of antibiotics on internal correlation of intestinal microflora in infants and young children in winter and spring season

HE Guo-bin1, SUN Chao1, LI Wen-hao1, YU Rong-bin1, ZHU Zhong-hai1, LI Wen-jing1, HAN Bei2, CHENG Yue1,2, ZENG Ling-xia1

(1.Department of Epidemiology and Health Statistics, School of Public Health, Health Science Center, Xi’an Jiaotong University, Shaanxi Xi’an 710061, China; 2.Nutrition and Food Safety Engineering Research Center of Shaanxi Province, Shaanxi Xi’an 710061, China)

Objective To explore the effect of antibiotics on internal correlation of intestinal microflora in infants and young children in winter and spring season. Methods A case-control by 1:1 study design was employed in this research. Infants under 2 years old with diarrhea visiting Shangluo Central Hospital of Shaanxi Province were chosen as case group. At the same period, healthy infants coming to the same hospital for health examination or immunization injection were selected as control group. Structure and diversity of microbial communities in feces of infants and young children were detected by second generation sequencing. Bacteria genus correlation network map was drawn and internal correlations of microflora were analyzed. Results Altogether 120 stool samples were collected in this study and finally 115 samples were included in analysis. In control group, bacteroides were most correlated with other bacteria genus. Escherichia coli/Shigella, Acinetobacter, Bacillus had obvious positive correlation with Lysinibacillus (rvalue was 0.640, 0.945 and 0.892, respectively, allP<0.05). Quantity increase in latter three bacteria genuses directly caused quantity decrease in bacteroides, but bacteroides did not show negative correlation with Escherichia coli/Shigella (r=-0.252,P>0.05). In infants with diarrhea not treated with antibiotics, Akkermansia had most correlation with other bacteria genuses. It had pairwise positive correlation with Prevotella, Barnesiella and terrabacter (rvalue was 0.735, 0.798 and 0.833, respectively, allP<0.05). Through positive correlation with bacillus and Acinetobacter (rvalue was 0.473 and 0.401, respectively, bothP<0.05), Akkermansia influenced quantity of Escherichia coli and Lysinibacillus. But Akkermansia and bacillus had no direct correlation with Escherichia coli. In infants with diarrhea treated with antibiotics, terrabacter had most correlation with other bacteria genuses. Two positive correlation groups appeared. One group was centered with terrabacter, showing positive correlation of terrabacter with Acinetobacter, Prevotella, Barnesiella, Lysinibacillus and Bacillus (rvalue was 0.622, 0.876, 0.911, 0.435 and 0.606, respectively, allP<0.05). The other group was centered with Veillonella, showing positive correlation of Veillonella with Akkermansia, hemophilus and Megasphaera (rvalue was 0.414, 0.773 and 0.567, respectively, allP<0.05). There was antagonistic effect between two groups, representing by negative correlation of Veillonella andhemophilus with terrabacter (rvalue was -0.538 and -0.380, respectively, bothP<0.05). Abundance increase in Veillonella inhibited abundance of bacillus, Prevotella, terrabacter and Barnesiella. Meanwhile, abundance increase in enterococcus could cause abundance decrease in first group bacteria genuses. Bacillus bifidus only had negative correlation with bacillus (r=-0.403,P<0.05). Antibiotics usage increased the complexity of internal correlations of intestinal flora at genus level and altered bacteria genus which had most internal correlations with other bacteria. Conclusion Antibiotics usage induces dysbiosis of intestinal microflora communities in infants and young children.

intestinal microflora; antibiotics; infants and young children; internal correlation

2017-03-20

國家自然科學(xué)基金資助項目(編號:81373019)

何國斌(1993-)，男，在讀碩士研究生，主要從事婦幼保健及人群健康評價的研究；

孫 超(1990-)，男，醫(yī)師，碩士，主要從事婦幼健康及人群健康評價研究(并列第一作者)。

曾令霞，副教授/博士生導(dǎo)師。

10.3969/j.issn.1673-5293.2017.07.002

R725

A

1673-5293(2017)07-0753-05