馬敏怡，王建軍，張文兵

（新疆兵團(tuán)第六師奇臺(tái)醫(yī)院，新疆 昌吉 831800）

解毒祛痰濃縮丸中丹皮酚含量測(cè)定

馬敏怡，王建軍，張文兵

（新疆兵團(tuán)第六師奇臺(tái)醫(yī)院，新疆 昌吉 831800）

目的 建立HPLC法測(cè)定解毒祛痰濃縮丸中丹皮酚的方法。方法 采用高效液相色譜法測(cè)定制劑中的丹皮酚的含量。結(jié)果 丹皮酚在9.52～152.32 μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。結(jié)論 該方法操作簡(jiǎn)便、靈敏度高、專(zhuān)屬性強(qiáng)，適用于解毒祛痰濃縮丸中丹皮酚含量測(cè)定。

解毒祛痰濃縮丸；丹皮酚含量測(cè)定

解毒祛痰平艾方臨床用于治療獲得性免疫缺陷綜合征毒感染屬熱毒內(nèi)蘊(yùn)，痰熱郁肺證候的患者。丹皮酚為牡丹皮的主要有效成分，可以提高機(jī)體免疫力且無(wú)明顯副作用等作用[1]。

1 試驗(yàn)材料

1.1 儀器

Waters2489高效液相色譜儀；電子天平0.01 mg（規(guī)格：AG-135廠(chǎng)家：瑞士）；超純水儀（規(guī)格：Direct-QTM5廠(chǎng)家：MilliPore）；離心機(jī)（規(guī)格：KDC-40廠(chǎng)家：ΜSTC CHMANGXIN CO.，LTD）。

1.2 試劑與樣品

丹皮酚對(duì)照品（生產(chǎn)批號(hào)：110708-200506，供含量測(cè)定用）；乙腈、甲醇為色譜純；甲醇、無(wú)水乙醇、甲酸、冰醋酸、為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱SYMMETRY C18，流動(dòng)相甲醇-1%冰醋酸（55:45），柱溫30℃，進(jìn)樣量10 μL，流速1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為274 nm。

2.2 丹皮酚對(duì)照品溶液的制備

于25 mL容量瓶中精密稱(chēng)取丹皮酚的對(duì)照品7.0 mg，加甲醇至容量瓶刻度處，制成1 mL含0.28 mg的溶液，作為儲(chǔ)備液，精密吸取上述儲(chǔ)備液17 mL，置25 mL容量瓶中1.904，加甲醇至刻度，制成1 mL含0.1904 mg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

精密稱(chēng)取本品細(xì)粉1g，置于50 mL錐形瓶中，加入60%甲醇10 mL，超聲20 min，放冷，用60%甲醇補(bǔ)足減失重量，濾過(guò)。濾液用0.45 μm的微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得。

結(jié)果表明，丹皮酚與相鄰色譜峰的分離度大于1.5，以丹皮酚的峰面積計(jì)算，其理論塔板數(shù)符合要求，且保留時(shí)間適中。丹皮酚對(duì)照品和供試品的色譜圖見(jiàn)圖1-2。

圖1 對(duì)照品HPLC圖

圖2 供試品HPLC圖

2.4 陰性對(duì)照溶液的制備

按解毒祛痰濃縮丸處方量，精密稱(chēng)取除牡丹皮以外的其余，制成陰性樣品。稱(chēng)取陰性樣品細(xì)粉1.0g，制成陰性對(duì)照溶液，結(jié)果示陰性無(wú)干擾，牡丹皮陰性對(duì)照品色譜圖見(jiàn)圖3。

圖3 陰性對(duì)照品HPLC圖

2.5 丹皮酚線(xiàn)性范圍的考察

分別精密吸取“2.2”項(xiàng)下丹皮酚對(duì)照品溶液0.25 mL、0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL、4.0 mL，置于5 mL容量瓶中，甲醇定容，用微孔濾膜過(guò)濾后，分別取10μL注入高效液相色譜儀，記錄丹皮酚峰面積，以丹皮酚濃度（C）對(duì)其峰面積值（A）進(jìn)行回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程：A=45730592 C-37441；r=0.9998。以上結(jié)果表明：在9.52～152.32 μg/mL范圍內(nèi)，丹皮酚峰面積值（A）與濃度（C）線(xiàn)性關(guān)系良好的。

2.6 精密度考察

稱(chēng)取供試品1份，按“2.3”制備供試品溶液1份，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄丹皮酚的峰面積，結(jié)果示丹皮酚峰面積的RSD值為1.59%，表明本實(shí)驗(yàn)所使用的儀器有良好的精密度。

2.7 穩(wěn)定性考察

精密吸取供試品溶液1份，分別在0、8、16、36、72 h進(jìn)樣，逐一記錄各自的峰面積，結(jié)果示丹皮酚峰面積的RSD值為0.47%，表明供試品在48 h內(nèi)穩(wěn)定性佳。

2.8 牡丹皮加樣回收率試驗(yàn)

取已知丹皮酚含量的供試品溶液，分別精密加入適量的丹皮酚的對(duì)照品，進(jìn)行含量測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果示丹皮酚加樣回收率為95.52%，RSD為0.22%，表明分析方法準(zhǔn)確。

3 討 論

采用HPLC法測(cè)定丹皮酚的相關(guān)報(bào)道較多，所以，本試驗(yàn)先根據(jù)《中國(guó)藥典》2010年版一部牡丹皮項(xiàng)下的HPLC條件進(jìn)行試驗(yàn)，以甲醇-水（45:55）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為274 nm，但在此流動(dòng)相下，峰形不對(duì)稱(chēng)，有拖尾，分離度不理想，出峰時(shí)間較長(zhǎng)。因此，本文參考文獻(xiàn)報(bào)道[2]，并結(jié)合本制劑處方的特點(diǎn)，經(jīng)反復(fù)實(shí)驗(yàn)探索，結(jié)果表明，以甲醇一1%冰醋酸（55:45）作為流動(dòng)相，各組分的峰形和分離度均很好，陰性干擾，積分準(zhǔn)確，精密度高，目標(biāo)峰出峰時(shí)間合適，經(jīng)方法學(xué)考察各項(xiàng)指標(biāo)均符合含量測(cè)定的要求。

本文通過(guò)高效液相色譜法對(duì)解毒祛痰濃縮丸中丹皮酚的含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明該方法操作簡(jiǎn)便、靈敏度高、專(zhuān)屬性強(qiáng)。

[1] Kitagawa I,Yoshikawa M, Tani T. Stμdies on Moμtan Cor2tex(ò) on the chemicalcomstitμents.Shoyakμgakμ zasshi,1979,21:147-150.

[2] 馮傳平.HPLC法測(cè)定桂枝茯苓丸中桂皮酸、桂皮醛及丹皮酚的含量[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2009,15(3):76-78.

本文編輯：王雨辰

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ISSN.2095-8242.2017.32.6150.02