陸莉娟，石晶萍，洪麗萍

（揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)有限公司質(zhì)量管理部，江蘇 泰州 225321）

一種摻偽銀杏葉提取物的初步分析鑒定

陸莉娟，石晶萍，洪麗萍

（揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)有限公司質(zhì)量管理部，江蘇 泰州 225321）

目的：建立一種摻偽銀杏葉提取物的初步分析鑒定方法。方法：分別采用薄層色譜法（TLC）與兩種高效液相色譜法（HPLC）進(jìn)行分析鑒別。結(jié)果：TLC、HPLC-ELSD可以初步確定主要成分為銀杏葉提取物；HPLC-UV可以確定主要的摻偽成分為槐角。結(jié)論：根據(jù)各種中藥的性狀、特征成分鑒別試驗(yàn)等，并結(jié)合類似成分中藥的特征，合理利用不同的鑒別方法，科學(xué)地分析、推斷“摻假心理”，可以有效地鑒別其真?zhèn)巍?/p>

薄層色譜法；高效液相色譜法；銀杏葉提取物

銀杏有“植物界的大熊貓”之美稱，是研究古代地球地質(zhì)演變的活化石，又是我國(guó)特有的古老而珍奇的名貴中藥材。江蘇省泰州市素有“銀杏之鄉(xiāng)”美譽(yù)，為全國(guó)重要的銀杏及銀杏制品基地。揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)銀杏葉提取物及銀杏葉片雙雙通過(guò)歐盟GMP認(rèn)證，獲得歐盟GMP認(rèn)證證書(shū)，成為全國(guó)第一家獲得歐盟GMP認(rèn)證的銀杏葉提取物和銀杏葉片生產(chǎn)企業(yè)，因此，嚴(yán)格控制銀杏葉提取物的質(zhì)量至關(guān)重要。送檢原料中發(fā)現(xiàn)一批標(biāo)識(shí)為銀杏葉提取物的樣品，肉眼觀察，外觀為棕褐色粉末，并含有植物種子、種子碎片、植物莖梗殘?jiān)任镔|(zhì)，明顯與《中華人民共和國(guó)藥典》（2015年版）一部銀杏葉提取物性狀描述不相符[1]。為了確保銀杏葉片的質(zhì)量和患者用藥安全、有效，中藥室抽取了部分具有豐富市場(chǎng)打假和中藥分析鑒定經(jīng)驗(yàn)的藥品檢驗(yàn)人員成立了專案小組對(duì)該混合物成分進(jìn)行了初步鑒別，效果較滿意，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

瑞士Mettler Toledo公司XS205電子天平，美國(guó)Agilent公司液相色譜儀1100（配置自動(dòng)進(jìn)樣器，紫外檢測(cè)器，Alltech 2000ES蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，色譜工作站）等。

硅膠G薄層板為青島海洋化工廠生產(chǎn)，銀杏葉對(duì)照提取物、槐角苷對(duì)照品均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，配置流動(dòng)相所用的甲醇、乙腈、正丙醇、四氫呋喃等均為色譜純，水為超純水，其他化學(xué)試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜法（TLC）鑒別

取檢品適量，過(guò)篩，選取不含有植物種子、種子碎片、植物莖梗殘?jiān)任镔|(zhì)的棕褐色粉末適量，稱取0.2 g，加正丁醇15 mL，置水浴中溫浸15 min并時(shí)時(shí)振搖，放冷，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右掖? mL使溶解，作為供試品溶液。另取銀杏葉對(duì)照提取物0.2 g，同法制成對(duì)照提取物溶液。照《中華人民共和國(guó)藥典》（2015年版）一部TLC試驗(yàn)[1]，展開(kāi)、晾干、顯色、檢視。結(jié)果（見(jiàn)圖1），供試品溶液色譜中，在與對(duì)照提取物色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，且供試品色譜與對(duì)照提取物色譜基本一致。結(jié)果初步表明，選取的上述部分粉末含有銀杏葉提取物類似的黃酮類成分，但是，因不同來(lái)源的植物，如金錢(qián)草[2]、天胡荽[3]等藥材中含有這些黃酮類成分，所以該鑒別試驗(yàn)特征性并非唯一，只能用來(lái)初步鑒定黃酮類成分的有無(wú)，而不能確認(rèn)到底是哪種植物歸屬。而正品銀杏葉提取物中應(yīng)該含有白果內(nèi)酯、銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C等萜類內(nèi)酯成分，因此，該樣品的真?zhèn)舞b定需要進(jìn)一步采用專屬性更強(qiáng)的試驗(yàn)方法—高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（HPLC-ELSD）進(jìn)行確認(rèn)。

圖1 供試品與對(duì)照提取物TLC色譜圖

2.2 HPLC-ELSD鑒別

2.2.1 色譜條件 Agilent公司的ZORBAX Eclipse XDBC18色譜柱（4.6 mm×150 mm，5μm）為分析柱，以正丙醇-四氫呋喃-水（1∶15∶84）為流動(dòng)相，流速為1.0 mL/min，用蒸發(fā)光檢測(cè)器檢測(cè)。

2.2.2 試驗(yàn)方法 分別取白果內(nèi)酯對(duì)照品、銀杏內(nèi)酯A對(duì)照品、銀杏內(nèi)酯B對(duì)照品、銀杏內(nèi)酯C對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL各含2 mg，1 mg，1 mg，1 mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。取上述粉末0.15 g，按照《中華人民共和國(guó)藥典》（2015年版）一部萜類內(nèi)酯項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，依HPLC試驗(yàn)[1]。

2.2.3 試驗(yàn)結(jié)果 結(jié)果（見(jiàn)圖2），在此色譜條件下，供試品溶液色譜圖中與對(duì)照品溶液色譜圖中白果內(nèi)酯（bb）、銀杏內(nèi)酯A（ga）、銀杏內(nèi)酯B（gb）、銀杏內(nèi)酯C（gc）對(duì)應(yīng)位置上均出現(xiàn)保留時(shí)間一致的色譜峰。結(jié)果表明，選取的粉末含有銀杏葉提取物一致的萜類內(nèi)酯類成分?，F(xiàn)結(jié)合上述TLC法鑒別結(jié)果，可以推斷出選取的粉末含有銀杏葉提取物。

圖2 HPLC-ELSD色譜圖

2.3 高效液相色譜紫外檢測(cè)（HPLC-UV）

2.3.1 方法選擇背景 上述兩個(gè)鑒別試驗(yàn)方法分別證實(shí)了樣品中含有銀杏葉提取物的兩種最主要功效成分——黃酮類與萜類內(nèi)酯類成分，但是其中摻偽成分尚未知，需要進(jìn)一步推理與證實(shí)。以往，中藥材市場(chǎng)打假常見(jiàn)的現(xiàn)象多是以外觀類似的植物組織部位冒充名貴藥材，達(dá)到“濫竽充數(shù)”、謀取暴利的目的。現(xiàn)今，該樣品外觀形狀與正品有明顯差異，不是簡(jiǎn)單的摻偽現(xiàn)象，而是一種較高級(jí)的疑似“成分造假”的造假行為。充分考慮到“摻假心理”因素，并結(jié)合《中華人民共和國(guó)藥典》（2015年版）一部對(duì)銀杏葉提取物黃酮苷元峰面積比檢查[1]項(xiàng)下的規(guī)定，依HPLC-UV檢查。結(jié)果，槲皮素與山奈素的峰面積比為2.1，超出標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的應(yīng)為0.8～1.2；異鼠李素與槲皮素的峰面積比值為0.09，未達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的應(yīng)大于0.15。摻偽者可能是想添加含有銀杏葉提取物類似的黃酮類成分的植物，以增加樣品中黃酮類成分的含量。結(jié)合摻偽的物質(zhì)的外觀特征，與《中華人民共和國(guó)藥典》（2015年版）一部比較相符[1]，疑似含有黃酮類成分的槐角。

《中華人民共和國(guó)藥典》（2015年版）一部記載，槐角為豆科植物槐（Sophora japonica L.）的干燥成熟果實(shí)，呈連株?duì)?，長(zhǎng)1～6 cm，直徑0.6～1 cm。表面黃綠色或黃褐色，皺縮而粗糙，背縫線一側(cè)呈黃色。質(zhì)柔潤(rùn)，干燥皺縮，易在收縮處折斷，斷面黃綠色，有黏性。種子1～6粒，腎形，長(zhǎng)約8 mm，表面光滑，棕黑色，一側(cè)有灰白色圓形種臍；質(zhì)堅(jiān)硬，子葉2，黃綠色。果肉氣微，味苦，種子嚼之有豆腥氣。

參考《現(xiàn)代實(shí)用中藥鑒別技術(shù)》[4]和《中藥大辭典》[5]，槐角又名槐實(shí)、槐子、槐豆、槐連燈、九連燈等，主要含有黃酮類和異黃酮類化合物，其中有山奈酚糖苷-C、蕓香苷，且蕓香苷含量很高，蕓香苷的酸水解產(chǎn)物為槲皮素，山奈酚糖苷-C的酸水解產(chǎn)物為山奈素，與銀杏葉提取物的酸水解產(chǎn)物槲皮素和山奈素一致。然而，槐角的主要藥理作用是升血糖作用和抗菌作用，同時(shí)含有一種破壞紅細(xì)胞的物質(zhì)，其毒性值得關(guān)注，所以，需要進(jìn)一步確認(rèn)樣品主要摻雜成分是否為槐角。

2.3.2 色譜條件 Agilent公司的ZORBAX Eclipse XDBC18色譜柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）為分析柱，以甲醇-乙腈-0.07%磷酸溶液（12∶20∶68）為流動(dòng)相，流速為1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為260 nm。

2.2.2 試驗(yàn)方法 取槐角苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含40 μg的溶液，作為對(duì)照品溶液。取選取的樣品中的植物種子、種子碎片、植物莖梗殘?jiān)任镔|(zhì)的混合物適量，研碎，稱取2 g，按照《中華人民共和國(guó)藥典》（2015年版）一部含量測(cè)定項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，依HPLC試驗(yàn)[1]。

2.3.3 試驗(yàn)結(jié)果 結(jié)果（見(jiàn)圖3），在此色譜條件下，供試品溶液色譜圖中與對(duì)照品溶液色譜圖中槐角苷對(duì)應(yīng)位置上出現(xiàn)保留時(shí)間一致的色譜峰。結(jié)果表明，選取的植物種子、種子碎片、植物莖梗殘?jiān)任镔|(zhì)的混合物含有槐角的特征性成分槐角苷，現(xiàn)結(jié)合上述性狀描述，證實(shí)該樣品主要摻偽成分為槐角。

圖3 HPLC-UV色譜圖

3 討論

3.1 中藥材摻假或摻偽現(xiàn)象層出不窮，造假方法各異，本文報(bào)道的銀杏葉提取物“不同植物來(lái)源、類似化學(xué)成分摻偽”現(xiàn)象是現(xiàn)今中藥市場(chǎng)出現(xiàn)的一種較新的造假方式，其危害極大。例如，銀杏葉提取物的摻偽成分槐角的主要藥理作用是升血糖和抗菌，同時(shí)含有一種破壞紅細(xì)胞的物質(zhì)，其毒性值得關(guān)注，因此，各級(jí)藥檢工作人員必須綜合、靈活運(yùn)用所學(xué)的中藥學(xué)及相關(guān)專業(yè)知識(shí)，積極主動(dòng)地探索摻假、摻偽中藥的各種的鑒別方法。

3.2 類似摻偽現(xiàn)象或摻假現(xiàn)象花樣翻新，打假工作任重道遠(yuǎn)，建議藥政監(jiān)管部門(mén)積極聯(lián)合并配合工商部門(mén)加強(qiáng)市場(chǎng)抽查、檢查的執(zhí)法與打擊力度，防微杜漸。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(2015年版)一部[S].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2015:296,334,392,393.

[2] 楊念云,段僉廒,李萍,等.金錢(qián)草中黃酮類化合物的分離與結(jié)構(gòu)鑒定[J].中國(guó)藥學(xué)雜志,2006,41(21):1621-1624.

[3] 孫梁燕,許永軍.HPLC法測(cè)定絞股藍(lán)中總槲皮素、山奈素和異鼠李素的含量[J].中國(guó)藥師,2010,13(12):1767-1768.

[4] 張貴君.現(xiàn)代實(shí)用中藥鑒別技術(shù)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2000:798-799.

[5] 南京中醫(yī)藥大學(xué).中藥大辭典[M].上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,2006:2435-2437.

本文編輯：魯守琴

Preliminary Analysis and Identifcation of an Extract from Adulterated Gingko Leaves

Lu Li-juan, Shi Jing-ping, Hong Li-ping
(Department of Quality Management, Yangtze River Pharmaceutical Group, Jiangsu Taizhou 225321, China)

Objective：To develop a method for preliminary analysis and identification of an extract from adulterated gingko leaves. Methods：Thin layer chromatography (TLC) and high performance liquid chromatography (HPLC) were used for the analysis and identification. Results：The major components was confirmed as the extract of gingko leaves by TLC and HPLC-ELSD, while the main adulterated component as sophorae fructus by HPLC-UV. Conclusion：Scientifc analysis and deducation of adulteration mentality according to the property of various traditional Chinese medicines and identity test on characteric components as well as the characters of similar components were benefcial to discerning the false from the genuine medicines.

Thin Layer Chromatography (TLC); High Performance Liquid Chramtography (HPLC); Gingko Leave Extract

TS201.2

A

10.3969/j.issn.2096-3327.2017.06.016

2017 - 02 - 27

陸莉娟，女，助理工程師。研究方向：藥品檢驗(yàn)及藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。E-mail：145488727@qq.com

洪麗萍，女，工程師。研究方向：執(zhí)業(yè)藥師。E-mail：hongliping@yangzijiang.com