郭穎,連方,孫振高,吳海萃,高海霞,張楠

(1山東中醫(yī)藥大學第一臨床醫(yī)學院，濟南250014；2山東中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院)

時差成像培養(yǎng)系統(tǒng)對IVF/ICSI患者早期受精和胚胎發(fā)育潛能的影響

郭穎1，2,連方2,孫振高2,吳海萃2,高海霞2,張楠2

(1山東中醫(yī)藥大學第一臨床醫(yī)學院，濟南250014；2山東中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院)

目的 觀察時差成像系統(tǒng)對體外受精/卵胞質內單精子顯微注射(IVF/ICSI)患者早期受精和胚胎發(fā)育潛能的影響。方法 回顧性分析104例不孕患者的臨床資料，共行IVF/ICSI治療104個周期。胚胎受精后，40例(觀察組)采用時差成像培養(yǎng)系統(tǒng)進行胚胎培養(yǎng)，采用時間參數(shù)結合形態(tài)學指標篩選胚胎；64例(對照組)采用常規(guī)培養(yǎng)系統(tǒng)進行胚胎培養(yǎng)，采用形態(tài)學指標篩選胚胎。比較兩組的受精率、卵裂數(shù)、可用胚胎率、臨床妊娠率。結果 觀察組受精率82.37%、卵裂率92.80%、可用胚胎率50.21%、臨床妊娠率62.50%，對照組受精率75.85%、卵裂率94.40%、可用胚胎率45.11%、臨床妊娠率50.00%。兩組受精率、卵裂率比較差異均無統(tǒng)計學意義 (P均>0.05)，可用胚胎率、臨床妊娠率比較差異有統(tǒng)計學意義(P均<0.05)。結論 IVF/ICSI患者胚胎受精后采用時差成像培養(yǎng)，對早期受精無明顯影響，但可通過提高胚胎發(fā)育潛能改善臨床結局。

不孕癥；時差成像；體外受精；卵胞質內單精子顯微注射；胚胎篩選；臨床妊娠

隨著國家二孩政策的全面放開，體外受精-胚胎移植 (IVF-ET)作為一項可以治療不孕癥的人類輔助生殖技術受到更多的關注。然而，妊娠率不高仍然是當今輔助生殖技術的發(fā)展瓶頸之一[1]。如何提高胚胎的可利用率，獲得更高的臨床妊娠率成為本領域的研究熱點，如何挑選早期胚胎中具有較高發(fā)育潛能的優(yōu)質胚胎成為胚胎學研究的關鍵。現(xiàn)有常規(guī)培養(yǎng)系統(tǒng)的胚胎評價方法是根據(jù)伊斯坦布爾共識[2]，在特定的時間點對胚胎進行觀察，根據(jù)形態(tài)學參數(shù)及發(fā)育情況對胚胎進行篩選。該法將胚胎發(fā)育這個動態(tài)過程，人為選取特定時間點來進行觀察，本身存在一定的局限性[3]；加之反復開箱，造成胚胎培養(yǎng)環(huán)境的溫度、濕度及氣體含量改變，對胚胎培養(yǎng)環(huán)境產(chǎn)生影響；同時，胚胎評估人員存在主觀因素等原因，使傳統(tǒng)評價體系弊端逐漸暴露。時差成像是一種瞬間曝光連續(xù)拍攝的成像技術，具有極高的分辨率,同時與胚胎培養(yǎng)裝置進行整合，與計算機分析軟件相連構成全新的胚胎評估體系，確保觀察過程中胚胎發(fā)育環(huán)境的穩(wěn)定性[4]。然而，該技術的安全性、分析體系的有效性，尚存在爭議。因此，我們對行IVF/卵胞質內單精子顯微注射(ICSI)的胚胎采用時差成像培養(yǎng)系統(tǒng)培養(yǎng)，旨在探討時差成像培養(yǎng)系統(tǒng)是否為胚胎發(fā)育提供更有利的條件。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 回顧性分析2016年1～5月山東中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院中西醫(yī)結合生殖與遺傳中心收治的104例不孕患者的臨床資料，共行IVF/ICSI治療104個周期；均為女方輸卵管因素、男方因素以及其他因素導致不孕，排除因女方內膜因素(盆腔子宮內膜異位癥、 子宮腺肌癥、 子宮肌瘤等)、反復流產(chǎn)、反復胚胎著床失敗等者。其中，采用時差成像培養(yǎng)系統(tǒng)進行胚胎培養(yǎng)40例(觀察組)，采用常規(guī)培養(yǎng)系統(tǒng)進行胚胎培養(yǎng)64例(對照組)。觀察組年齡(32.08±5.21)歲，BMI(23.42±2.72)kg/m2；原發(fā)性不孕13例、繼發(fā)性不孕27例，不孕年限(3.77±1.56)年；人絨毛膜促性腺激素(hCG)日內膜厚度(10.57±2.14)mm ，每人取卵(12.50±7.07)枚，共取卵500枚；受精方式：IVF 31例，ICSI 9例。對照組年齡(32．75±6.22)歲，BMI (23.79±2.31) kg/m2；原發(fā)性不孕24例、繼發(fā)性不孕40例，不孕年限(3.42±1.40)年；hCG日內膜厚度(11.39±2.05)mm，每人卵數(shù)(13.51±9.67)枚，，共取卵865枚；受精方式：IVF 49例，ICSI 15例。兩組臨床資料具有可比性(P均>0.05)。

1.2 胚胎培養(yǎng)方法 觀察組采用 ESCO Miri TL(ESCO，新加坡)胚胎實時監(jiān)控系統(tǒng)，此系統(tǒng)在傳統(tǒng)培養(yǎng)箱內配置胚胎顯微成像系統(tǒng)，通過數(shù)據(jù)線與培養(yǎng)箱外的控制臺主機相連接，拍照頻率為 10 min/次。觀察組受精后立即將胚胎置于專用 14 孔集合培養(yǎng)皿中，每孔放置1 個胚胎，具有明確的位置標記；使用全程培養(yǎng)液 (CSC,Irvine,美國) 培養(yǎng)胚胎，培養(yǎng)液上覆以礦物油。然后將培養(yǎng)皿放入ESCO Miri TL實時監(jiān)控培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)環(huán)境參數(shù)為5% CO2、5% O2、37 ℃，直至胚胎發(fā)育至第3天。對照組受精后將胚胎放入普通培養(yǎng)皿中，置于Labotect C200(Labotect，德國)培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)液、培養(yǎng)環(huán)境、培養(yǎng)時間同觀察組。

1.3 胚胎的評價、篩選及妊娠判定 兩組分別于授精后16～18 h、67～69 h觀察受精及卵裂情況，計算受精率及卵裂率。觀察組利用ESCO實時監(jiān)控培養(yǎng)箱連接的外部電腦中的ESCO Miri TL Viewer軟件，觀察并獲得胚胎形態(tài)發(fā)生改變的時間資料[5,6]，結合培養(yǎng)第3天伊斯坦布爾共識[2]形態(tài)學標準選擇胚胎移植。對照組培養(yǎng)第3天根據(jù)伊斯坦布爾共識[2]形態(tài)學標準選擇胚胎移植。每例患者選擇可用胚胎2枚進行移植，移植后第14天測血hCG水平，移植后第4～6周經(jīng)陰道B超下出現(xiàn)孕囊和胎心為臨床妊娠。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用 SPSS17.0 統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料以率表示，組間率的比較采用χ2檢驗。P<0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

觀察組受精率82.37%、卵裂率92.80%、可用胚胎率50.21%、臨床妊娠率62.50%，對照組受精率75.85%、卵裂率94.40%、可用胚胎率45.11%、臨床妊娠率50.00%。兩組受精率、卵裂率比較差異均無統(tǒng)計學意義(P均>0.05)，可用胚胎率、臨床妊娠率比較差異有統(tǒng)計學意義(P均<0.05)。

3 討論

隨著輔助生殖技術的不斷發(fā)展，如何更準確地挑選出具有發(fā)育潛能的胚胎進行移植，并獲得良好的臨床妊娠率一直是生殖領域探討的熱門話題。目前，大多選用傳統(tǒng)的形態(tài)學評價體系進行胚胎的篩選[7]，在特定的時間點觀察一系列的靜態(tài)指標，包括卵母細胞的形態(tài)、成熟度，早期原核數(shù)目、大小、對稱程度，胚胎期的細胞數(shù)目、卵裂球的對稱程度、碎片率等以及囊胚期的囊腔分期、內細胞團和滋養(yǎng)層細胞的多少等。

時差成像系統(tǒng)是新興的應用于臨床的胚胎篩選評價方法，其實時監(jiān)控的特點可以對胚胎進行動態(tài)觀察，并可利用形態(tài)動力學參數(shù)將胚胎發(fā)育過程進行量化，使其更加客觀化[8]；拍攝監(jiān)控系統(tǒng)與培養(yǎng)箱相結合，有效減少開箱頻率，保證胚胎環(huán)境的穩(wěn)定性[9]。因此，運用時差成像技術準確預測并篩選出具有發(fā)育潛能的胚胎[10～13]已經(jīng)成為胚胎學家們的研究重點。Meseguer等[14]回顧性分析了時差成像與常規(guī)培養(yǎng)系統(tǒng)進行的7 305個臨床周期, 時差成像培養(yǎng)系統(tǒng)通過Meseguer的等級評分系統(tǒng)結合傳統(tǒng)形態(tài)評估進行胚胎選擇并移植, 而常規(guī)培養(yǎng)系統(tǒng)通過形態(tài)學方法選擇胚胎并進行移植。結果顯示，時差成像培養(yǎng)系統(tǒng)患者的臨床妊娠率較傳統(tǒng)培養(yǎng)系統(tǒng)顯著提高。Rubio等[3]采用隨機對照試驗研究分析比較了時差成像培養(yǎng)系統(tǒng)和常規(guī)培養(yǎng)系統(tǒng),時差成像培養(yǎng)系統(tǒng)中的胚胎評估通過時間參數(shù)與卵裂模式相結合的方式獲得;該研究結果表明, 時差成像培養(yǎng)系統(tǒng)患者的繼續(xù)妊娠率明顯增加,且差異有統(tǒng)計學意義。有研究[14]認為，時差成像培養(yǎng)相對普通培養(yǎng)可以避免培養(yǎng)箱頻繁的開關，保持培養(yǎng)箱內環(huán)境尤其是pH和溫度的穩(wěn)定，有利于獲得高質量的胚胎。Siristatidis等[15]研究顯示，采用時差成像培養(yǎng)技術獲得了比常規(guī)培養(yǎng)更高的臨床妊娠率、繼續(xù)妊娠率和出生率。本研究結果顯示，兩組受精率、卵裂率無統(tǒng)計學差異，而觀察組的可用胚胎率和臨床妊娠率均高于對照組，與前期文獻報道的結果相同[3，14,15]。我們分析時差成像培養(yǎng)系統(tǒng)能顯著提高可用胚胎率和臨床妊娠率的原因包括:①時差成像培養(yǎng)系統(tǒng)采用小箱體單獨培養(yǎng)模式，使得培養(yǎng)環(huán)境更加穩(wěn)定；②減少開箱觀察的頻率，減少室溫下暴露時間，使胚胎避免外界刺激；③動態(tài)監(jiān)測，獲得的信息更加全面；④選擇胚胎的時間參數(shù)標準結合形態(tài)學指標共同篩選胚胎[15，16]。

綜上所述，時差成像培養(yǎng)可以獲得比常規(guī)培養(yǎng)更多的可用胚胎和更高的臨床妊娠率。然而，我們的研究樣本量較少，未來我們將進一步擴大樣本, 增加囊胚形成率、出生率等指標, 以確保該方法的有效性和安全性，更好的提高臨床妊娠率， 縮短患者獲得妊娠的時間。

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國家自然基金資助項目(81273790，81473720)；山東省醫(yī)藥衛(wèi)生科技發(fā)展計劃項目(2015WSB23005)。

連方(E-mail: f_lian@163.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.10.026

R715.5

B

1002-266X(2017)10-0074-03

2016-10-22)