丁 昊 王 燦

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EGFR基因突變與非小細(xì)胞肺癌臨床病理特征的關(guān)系

丁 昊 王 燦

目的 研究臨床病理特征及相關(guān)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指標(biāo)與非小細(xì)胞肺癌患者外科手術(shù)治療預(yù)后的關(guān)系。方法手術(shù)切除的非小細(xì)胞肺癌患者標(biāo)本一共190例，采用實(shí)時(shí)熒光PCR法，檢測(cè)EGFR 基因第 18、19、20 和 21 號(hào)外顯子的突變情況。分析EGFR基因突變與其臨床病理關(guān)系、EGFR基因突變豐度和臨床特征的關(guān)系。結(jié)果 EGFR基因突變的影響因素包括：性別、吸煙史、病理分型，高危因素包括：女性、吸煙者、腺癌。190例 NSCLC 患者腫瘤組織中，成功檢測(cè)出90例存在 EGFR 基因突變，EGFR 突變豐度與性別(P=0.962)、吸煙史(P=0.809)無相關(guān)性；EGFR突變豐度與病理分型相關(guān)。和非腺癌對(duì)比，腺癌患者EGFR基因突變豐度明顯更高，(χ2=14.110，P=0.000)。術(shù)前腺癌血清VEGF水平明顯低于非腺癌組，P<0.05；術(shù)后腺癌血清CD44v6明顯高于非腺癌患者，P<0.05；術(shù)后Ⅲ～Ⅳ期組血清VEGF、CD44v6水平明顯高于Ⅰ～Ⅱ期患者，P<0.05。結(jié)論 非小細(xì)胞肺癌EGFR基因突變的高危因素為吸煙者、女性、腺癌，與年齡、性別、腫瘤分期、吸煙史無明顯相關(guān)性。

臨床病理特征；實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指標(biāo)；非小細(xì)胞肺癌；外科手術(shù)；預(yù)后

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:1233～1236)

目前，肺癌的發(fā)病率和病死率位居全球惡性腫瘤之首，并且正在逐年增長(zhǎng)，尤其在在發(fā)展中國(guó)家[1]。非小細(xì)胞肺癌在肺癌總病例中占比高達(dá)80%，但是絕大多數(shù)患者發(fā)現(xiàn)患病時(shí)為時(shí)已晚，導(dǎo)致病灶轉(zhuǎn)移，以失去手術(shù)切除治療的時(shí)機(jī)[2]。目前，多種新型的抗腫瘤藥物誕生，并且有效地延長(zhǎng)晚期非小細(xì)胞肺癌患者的疾病進(jìn)展生存期，例如紫杉烷類、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、吉西他濱等等[3-4]。根據(jù)國(guó)外研究結(jié)果，晚期非小細(xì)胞肺癌患者表皮生長(zhǎng)因子受體基因突變陽性對(duì)吉非替尼存在高度敏感性[5]。以EGFR為靶點(diǎn)的分子靶向治療通過對(duì)EGFR酪氨酸激酶磷酸化產(chǎn)生抑制的作用，并借助于下游信號(hào)的傳導(dǎo)，以對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖、轉(zhuǎn)移、侵襲、凋亡產(chǎn)生反應(yīng)?，F(xiàn)有研究證明，EGFR 基因突變和多方面影響因素有關(guān)，包括性別、吸煙史、病理分型[6-7]。本研究采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)對(duì)190例NSCLC患者進(jìn)行檢測(cè)，分析術(shù)后標(biāo)本中EGFR基因突變、突變豐度和血清VEGF、CD44v6水平、臨床病理特征之間的關(guān)系，為臨床治療方案的制定和預(yù)后的評(píng)價(jià)提供可靠的依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 一般資料

2013年1月至2015年12月手術(shù)切除的非小細(xì)胞肺癌患者標(biāo)本一共190例，年齡(59.1±2.9)歲；96例男性、94例女性。對(duì)所有標(biāo)本進(jìn)行病理學(xué)檢查，包括：甲醛固定、石蠟包埋、HE染色等等，由病理醫(yī)師判定結(jié)果，并評(píng)估腫瘤細(xì)胞含量后進(jìn)行檢測(cè)。

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1 EGFR基因檢測(cè) 采用實(shí)時(shí)熒光PCR法，使用人EGFR基因突變定性檢測(cè)試劑盒(北京雅康博生物科技有限公司)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行EGFR基因檢測(cè)，檢測(cè)的外顯因子包括：EGFR基因第18、19、20和21號(hào)外顯子。嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。經(jīng)歷40個(gè)循環(huán)，其中包括：95 ℃ 10 min；95 ℃ 15 s，60 ℃1 min。反應(yīng)時(shí)間為1.5 h，對(duì)各反應(yīng)孔擴(kuò)增曲線進(jìn)行分析，并判讀結(jié)果。樣本突變結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn)：當(dāng)突變點(diǎn)擴(kuò)增，Ct值≤35，則判定為陽性；當(dāng)無擴(kuò)增出現(xiàn)，或Ct值>38，則判定為陰性；當(dāng)Ct值>35但≤38，則判定為疑似陽性，可重復(fù)試驗(yàn)加以確定。樣本突變豐度判定標(biāo)準(zhǔn)：當(dāng)突變量超過20%，則判定為高豐度突變；當(dāng)突變量≤20%，則判定為低豐度突變。

1.2.2 血清VEGF、CD44v6檢測(cè) 術(shù)前一周和術(shù)后一周采集患者清晨空腹靜脈血，5 ml，室溫放置30 min，離心處理(5 000 r/min，10 min)，取其血清300 μl，放置于-20 ℃冷凍以備用。采用酶聯(lián)免疫吸附方法檢測(cè)血清VEGF、CD44v6，嚴(yán)格按照血清VEGF、CD44v6試劑盒說明書操作，在酶標(biāo)儀讀取光密度值，并計(jì)算血清VEGF、CD44v6的相對(duì)含量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 EGFR基因突變與NSCLC臨床病理的關(guān)系

EGFR基因突變的影響因素包括：性別、吸煙史、病理分型；高危因素包括：女性、吸煙者、腺癌。

表1 EGFR基因突變與NSCLC臨床病理的關(guān)系/例

2.2 EGFR基因突變豐度與NSCLC臨床特征的關(guān)系

190例 NSCLC 患者中，成功檢測(cè)出90例存在 EGFR 基因突變，EGFR 突變豐度與性別(P=0.962)、吸煙史(P=0.809)無相關(guān)性；EGFR突變豐度與病理類型有相關(guān)性。 與非腺癌對(duì)比，腺癌患者EGFR基因突變豐度明顯更高(χ2=14.110，P=0.000)。

表2 EGFR基因突變豐度與NSCLC臨床特征的關(guān)系/例

2.3 血清VEGF、CD44v6水平與肺癌臨床病理特征的關(guān)系(表3)

術(shù)前腺癌患者血清VEGF水平明顯低于非腺癌者，P<0.05；術(shù)后腺癌患者血清CD44v6水平明顯高于非腺癌患者，P<0.05；術(shù)后Ⅲ～Ⅳ期患者血清VEGF、CD44v6水平明顯高于Ⅰ～Ⅱ期患者，P<0.05。

3 討論

3.1 EGFR基因與肺癌臨床病理、術(shù)后預(yù)后關(guān)系

目前，肺癌發(fā)病率正處于上升的趨勢(shì)，并且越來越顯示出年輕化的特點(diǎn)[9-10]。高達(dá)80%肺癌患者確診患病病情已經(jīng)出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，難以通過手術(shù)進(jìn)行根治，近能夠通過化療進(jìn)行治療，以延長(zhǎng)生存期。目前，臨床標(biāo)準(zhǔn)的化療方案為含鉑雙聯(lián)化療，雖然應(yīng)用廣泛，但是療效已經(jīng)達(dá)到平臺(tái)。目前，吉非替尼作為以EGFR 分子為靶標(biāo)，是臨床常用的靶向藥物，在全世界范圍內(nèi)得到廣泛的應(yīng)用。根據(jù)早期研究結(jié)果，EGFR 異?；罨瘯?huì)導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生惡性生物學(xué)行為，二者密切相關(guān)，EGFR 基因突變陽性的非小細(xì)胞肺癌對(duì)吉非替尼具有高度敏感性。經(jīng)過深入研究，吉非替尼在 EGFR 基因敏感突變的非小細(xì)胞肺癌中，療效確切，可有效地延長(zhǎng)患者的生存期和提高患者的生存質(zhì)量。預(yù)示著EGFR第18-21號(hào)外顯子突變是 EGFR-TKIs療效預(yù)測(cè)因子[11-12]。

表3 血清VEGF、CD44v6與肺癌臨床病理特征的關(guān)系

注：*為與非腺癌比較，P<0.05；#為與Ⅰ～Ⅱ期比較，P<0.05。

本研究顯示，EGFR基因突變和性別、吸煙史、病理分型具有顯著的分型，女性、吸煙者、腺癌具有明顯更高的EGFR基因突變風(fēng)險(xiǎn)。190例NSCLC 患者腫瘤組織中，成功檢測(cè)出90例存在 EGFR 基因突變，EGFR 突變豐度與性別(P=0.962)、吸煙史(P=0.809)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；EGFR突變豐度與病理分型差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。和非腺癌對(duì)比，腺癌患者EGFR基因突變豐度明顯更高(χ2=14.110，P=0.000)。由此可見，和非腺癌患者對(duì)比，腺癌EGFR基因突變率明顯更高，但非腺癌患者依然存在EGFR基因突變的風(fēng)險(xiǎn)。根據(jù)相關(guān)研究結(jié)果[13-14]，和非腺癌患者對(duì)比，腺癌EGFR 突變陽性患者采用吉非替尼進(jìn)行治療療效更為顯著，換言之，吉非替尼更適用于腺癌患者，而非腺癌患者療效相對(duì)較差，但仍然存在一定的臨床有效性。由此預(yù)示著，非腺癌患者并非可以完全杜絕EGFR突變可能性，建議對(duì)非腺癌患者進(jìn)行EGFR突變檢測(cè)，可為臨床治療方案的制定提供更為全面的信息。與此同時(shí)，EGFR 突變豐度狀況影響因素不包括性別、吸煙史、臨床分期。本研究采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR 檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行EGFR突變檢測(cè)，通過熒光基團(tuán)的加入，利用信號(hào)積累，對(duì)整個(gè)檢測(cè)過程進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，操作簡(jiǎn)便、快速、靈敏性，結(jié)果判讀直觀、明確，污染低，費(fèi)用低廉[15-18]?？梢姡瑢?shí)時(shí)熒光定量PCR 檢測(cè)技術(shù)可作為臨床靶向治療預(yù)測(cè)效果的有效方式，有利于提高靶向治療的精確性及準(zhǔn)確性。非小細(xì)胞肺癌患者的個(gè)體化治療目前已經(jīng)成為臨床治療中的重要方案，可有利于優(yōu)化肺癌分子，而EGFR基因突變豐度檢測(cè)是增加治療方案合理程度的關(guān)鍵措施，必須對(duì)EGFR基因突變豐度進(jìn)行更為深入的研究，以延長(zhǎng)NSCLC患者的生存期和改善預(yù)后生活質(zhì)量。

3.2 血清VEGF、CD44v6和肺癌臨床病理、術(shù)后預(yù)后關(guān)系

血清VEGF可對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生特異作用，促進(jìn)血管分裂增殖，有利于新生血管形成，增加腫瘤血管的通透度，促使癌細(xì)胞加快擴(kuò)散，在血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移、血管構(gòu)建中發(fā)揮著重要的作用。本研究顯示，術(shù)前腺癌血清VEGF明顯低于非腺癌組，P<0.05；術(shù)后Ⅲ～Ⅳ期組血清VEGF明顯高于Ⅰ～Ⅱ期組，P<0.05。說明腫瘤病情越嚴(yán)重，分期越高級(jí)，其血清VEGF水平越高，由于血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子過度表達(dá)，預(yù)示著該類患者腫瘤更容易發(fā)生轉(zhuǎn)移。

CD44v6廣泛分布在細(xì)胞表面的跨膜糖蛋白，可在淋巴細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、上皮細(xì)胞表面檢出，具有多方面的生理作用，正常人群的血清CD44v6水平含量非常低。在腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移過程中，會(huì)出現(xiàn)黏附、基底膜降解、遷移等一系列的變化，而血清CD44v6在這個(gè)過程中發(fā)揮著重要的作用。本研究顯示，術(shù)后腺癌血清CD44v6明顯高于非腺癌組，P<0.05；術(shù)后Ⅲ～Ⅳ期組血清CD44v6明顯高于Ⅰ～Ⅱ期組，P<0.05。預(yù)示著腺癌術(shù)后血清CD44v6含量更高，晚期患者血清CD44v6更高，符合相關(guān)研究的結(jié)果：腺癌更容易發(fā)生轉(zhuǎn)移，病理分期越晚，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移越嚴(yán)重，術(shù)后血清CD44v6含量降低不明顯，可見術(shù)后血清CD44v6含量高者更容易發(fā)生轉(zhuǎn)移。

綜上所述，非小細(xì)胞肺癌EGFR基因突變的高危因素在于吸煙者、女性、腺癌，和年齡、性別、腫瘤分期、吸煙史無明顯相關(guān)性。

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(編輯：吳小紅)

Relationship between EGFR Gene Mutation and Clinical Pathological Features ofNon-small Cell Lung Cancer

DING Hao，WANG Can.

Xuancheng Central Hospital,Xuancheng,242000

Objective To study the relationship between EGFR gene mutation and clinical pathological features of non-small cell lung cancer.Methods 190 cases of non-small cell lung cancer specimens treated with surgical resection used real-time fluorescent PCR method，to detect EGFR gene mutation in exon 21 and 18，19，20 sub.Relationship between EGFR gene mutation and clinical pathological characteristics and abundance of mutations in the EGFR gene were analyzed.Results The influence factors of EGFR mutations: gender，smoking history，disease Physical type，risk factors include: women，smokers，adenocarcinoma.In tumor tissues of 190 NSCLC patients，90 cases were successfully detected EGFR gene mutation，EGFR mutation abundance and gender(P=0.962)，smoking history(P=0.809) had no significant difference；EGFR mutation type differences in abundance and pathology statistical significance.Compared with non adenocarcinoma，gland cancer patients with EGFR gene mutation abundance was significantly higher(χ2=14.110，P=0.000).Preoperative adenocarcinoma serum VEGF was significantly lower than non adenocarcinoma group，P<0.05；postoperative cancer serum CD44v6 was significantly higher than non adenocarcinoma group，P<0.05 Ⅲ～Ⅳ group；serum VEGF after operation，CD44v6 was significantly higher than that of Ⅰ～Ⅱ group，P<0.05.Conclusion The risk factors of EGFR gene mutation in non-small cell lung cancer in smokers，female，adenocarcinoma，and age，sex，tumor staging，smoking history obvious correlation.

Clinical pathological characteristics；Laboratory test；Non-small cell lung cancer；Surgery；Prognosis

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.08.004

R734.2

A

1001-5930(2017)08-1233-04

2017-04-13

2017-06-12)