丁 毅，楊 欣

糖尿病頸動脈粥樣硬化患者內(nèi)皮祖細(xì)胞變化特點

丁 毅1，楊 欣2

（1.桂林市人民醫(yī)院內(nèi)分泌科，廣西桂林 541002；2.桂林市人民醫(yī)院重癥科，廣西桂林 541002）

目的 探討2型糖尿病與糖尿病頸動脈粥樣硬化患者內(nèi)皮祖細(xì)胞（EPCs）的數(shù)量變化及特點。方法 32例健康成年人為對照組，104例確診糖尿病患者，將其通過多普勒超聲測量頸動脈分為單純糖尿病組（DM）56例和糖尿病粥樣硬化組48例，采集受試者血壓、血糖、胰島素、甘油三脂（TG）、總膽固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL-C）、低密度脂蛋白（LDL-C）、極低密度脂蛋白（VLDL-C）等臨床指標(biāo)，采集糖尿病粥樣硬化組的頸動脈內(nèi)膜中層厚度（IMT），并測試三組的內(nèi)皮祖細(xì)胞（EPCs）進(jìn)行分析對比。結(jié)果 糖尿病頸動脈硬化組的EPCs、HOMA胰島素抵抗指數(shù)均高于DM組和對照組，且EPCs與IMT、HOMA胰島素抵抗負(fù)相關(guān)關(guān)系。結(jié)論 糖尿病早期即對內(nèi)皮功能有所影響，胰島素抵抗是影響內(nèi)皮功能的重要因素。

糖尿病；頸動脈粥樣硬化；內(nèi)皮祖細(xì)胞

糖尿病所導(dǎo)致的心腦血管疾病嚴(yán)重威脅著人類健康。頸動脈粥樣硬化反應(yīng)了全身動脈硬化負(fù)荷，預(yù)見了心腦血管疾病發(fā)生。檢測內(nèi)皮細(xì)胞功能對判斷動脈粥樣硬化發(fā)展和預(yù)后均有重要意義。內(nèi)皮祖細(xì)胞不僅參與了胚胎期的血管發(fā)育，也在動脈粥樣硬化中有重要影響。本研究就糖尿病頸動脈粥樣硬化患者的內(nèi)皮祖細(xì)胞進(jìn)行探討。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇桂林市人民醫(yī)院2012年1月—2013年12月期間的體檢中心的健康正常人和內(nèi)分泌科住院的糖尿病患者，應(yīng)用多普勒超聲測量糖尿病患者的頸動脈，將其分為單純糖尿病組和糖尿病粥樣硬化組，將健康正常人作為對照組。其中對照組共32例，其中男性16例，女性16例，平均年齡（42.3±10.8）歲，單純糖尿病組（DM）共56例，男性35例，女性21例，平均年齡（64.8±11.4）歲，糖尿病粥樣硬化組48例，男性27例，女性21例，平均年齡（66.6±7.71）歲。對所有研究對象的年齡、性別、血壓、體重指數(shù)（BMI）進(jìn)行詳細(xì)詢問和采集，并在次日清晨予患者抽血，應(yīng)用全自動生化分析儀測定，檢測糖化血紅蛋白（HbA1c）、空腹血糖（FPG）、餐后兩小時血糖（2H PPG）、甘油三脂（TG）、總膽固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL-C）、低密度脂蛋白（LDL-C）、極低密度脂蛋白（VLDL-C），空腹胰島素（FINs），餐后2 h胰島素（INS）指標(biāo)，BMI=體重/身高2；HMOA胰島素抵抗指數(shù)（HOMAIR）=（FBG×FINS）/22.5。

1.2 頸動脈測量

使用儀器512型超聲診斷儀，使用專用頸動脈探頭，頻率為5-12MHz。測定左右兩側(cè)頸動脈指標(biāo)。研究對象平臥，頭轉(zhuǎn)向?qū)?cè)，暴露需要檢查的頸總動脈，在B超聲下定位。測定項目：內(nèi)膜中層厚度（IMT）：頸總動脈IMT和距離頸動脈竇口1 cm為檢查點，測定IMT；如在頸部暴露的頸動脈可視范圍內(nèi)發(fā)現(xiàn)內(nèi)膜中層明顯增厚，則測量記錄其為最厚IMT。

1.3 EPCs 檢測

流式細(xì)胞儀檢測EPCs受檢者空腹取肘靜脈血2 TIll于EDTA-K：抗凝管中，輕輕搖勻以充分抗凝，加入PBS緩沖液2 mL混勻，然后緩慢加入6 mL人淋巴細(xì)胞分離液中，室溫下2 400 r/min離心 20 min，離心后吸取中間白膜層，經(jīng)PBS緩沖液反復(fù)清洗，吹打混勻，室溫重復(fù)離心，得到單個核細(xì)胞。取100 mL以分離洗滌好的單個核細(xì)胞用FITC標(biāo)記的 抗體CDl33、CDM（Sigma公司）避光孵育10 min，同型抗體作陰性對照，加入0.5%BSA緩沖液混勻，室溫1 500 r/min離心后加入0.5%BSA緩沖液充分混勻、過濾，流式細(xì)胞儀（BD公司）分析200 000個細(xì)胞。

1.4 排除標(biāo)準(zhǔn)

各組患有妊娠糖尿病，肝功能不全，感染性疾病，激素治療，腎功能不全、甲狀腺功能異常等均排除，對照組均無高血壓、高血脂、心、肺、肝、腎、血液及內(nèi)分泌系疾病。所有對象資料不全均剔除。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件數(shù)據(jù)包，計量資料數(shù)據(jù)用x±s表示。三組間計量治療如方差齊用單因素方差檢驗，兩變量間相關(guān)性Spearman 相關(guān)系數(shù)，以P＜0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 臨床資料比較

三組間年齡，F(xiàn)PG，2HPPG，F(xiàn)INS，PINS，HOMAIR，IMT，ECPs有明顯的差異（P＜0.05），且糖尿病頸動脈硬化組FPG，2HPPG，F(xiàn)INS，PINS，HOMA-IR，IMT，均高于對照組和糖尿病組，EPCs明顯低于對照組和糖尿病組。余年齡、BMI、甘油三酯（TG）、膽固醇（TC）、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）均無明顯差異（P＜0.05）。

2.2 胰島素抵抗指數(shù)與內(nèi)皮祖細(xì)胞指標(biāo)之間比較

見表1，EPCs與HOMA呈負(fù)相關(guān)關(guān)系（r=-0.824，P＜0.01），在糖尿病頸動脈硬化組中，EPCs與IMT呈負(fù)相關(guān)關(guān)系（r=-0.718，P＜0.01）。

表1 直線相關(guān)分析結(jié)果

3 討論

內(nèi)皮祖細(xì)胞是骨髓的多功能干細(xì)胞，具有在一定條件下能分化出造血干細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的特性[1-2]，在成年人機體中參與血管再生，維持血管的完整性，并參與血管內(nèi)皮修復(fù)，促進(jìn)側(cè)枝循環(huán)的建立和血管新生[3-4]。糖尿病動脈硬化疾病是發(fā)病早、進(jìn)展快的慢性疾病。糖尿病動脈硬化疾病引起嚴(yán)重的心腦血管疾病并發(fā)癥的發(fā)生，是糖尿病病死率和患病率主因之一。糖尿病血管病變的機制尚未闡明。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，血管內(nèi)皮依賴性舒張功能失調(diào)在明顯的動脈粥樣硬化形成之前就可以出現(xiàn)血管內(nèi)皮功能異常是動脈粥樣硬化的早期病理改變[5-6]，研究EPCs與糖尿病動脈硬化疾病的關(guān)系具有潛在而重要的臨床意義。

本研究發(fā)現(xiàn)已發(fā)生頸動脈硬化的患者胰島素抵抗高于未發(fā)生動脈硬化的入組人選，且糖耐量抵抗指數(shù)越高，血糖控制不佳，EPCs在外周數(shù)量越少，動脈硬化程度越嚴(yán)重。這可能是在糖尿病患者機體中，高胰島素抵抗、高血糖引起的大量糖基化終末產(chǎn)物蓄積、脂質(zhì)代謝紊亂、腎素一血管緊張素系統(tǒng)的激活、各種炎癥因子及氧化應(yīng)激等多因素干擾引起干擾調(diào)控EPCs 動員的信號減少，表達(dá)的 CXCR4和CD18 減少[7-9]，內(nèi)皮細(xì)胞聚集和增值明顯減弱；EPC表達(dá)CD14，CD64明顯增高，分化為成熟內(nèi)皮細(xì)胞能力障礙，導(dǎo)致內(nèi)皮修復(fù)功能明顯降低，粥樣斑塊破裂出現(xiàn)，從而導(dǎo)致動脈僵硬、狹窄甚至閉塞[10]。

研究EPCs進(jìn)一步了解糖尿病外周動脈硬化的機制，胰島素抵抗是影響內(nèi)皮功能的重要因素之一。因其自身內(nèi)皮生長修復(fù)和保持血管內(nèi)皮完整的功能，應(yīng)用EPCs治療外周血管疾病，延遲動脈粥樣硬化進(jìn)展成為可能[11]。

[1] Takahashi T， Kalka C， Masuda H，et al.Ischemiaand cytokine-induced mobilization of bone marrow-derived endothelial progenitor cells for neovascularization[J]. Nat Med，1999（5）：434-438.

[2] G?owinska-Olszewska B， Moniuszko M， Hryniewicz A，et al.Relationship between circulating endothelial progenitor cells and endothelial dysfunction in children with type 1 diabetes： a novel paradigm of early atherosclerosis in high-risk young patients[J]. Eur J Endocrinol，2013 ，168（2）：153-161.

[3] Asahara T，Murohara T，Sullivan A，et al. Isolation of putative progenitor endothelial cells for angiogtnesis[J].Science，1997，275（5302）：964-967.

[4] Peichev M，Naiyer AJ，Pereira D，et al.Expresssion of VEGFR-2 and AC133 by circulating human CD43（+） cells identifies a population of fuctional endothelial precursors[J].Blood，2000，95（3）：92-958.

[5] CeremajerDS，SorensenKE，GoochNM，et al. Noninvasivedetec-tionofendothelialdysfunction in children nad adultat risk of atherosclemsis[J]．Lancet，1992，340（6）：1111.

[6] Fadini GP， Miorin M， Facco M， et al.Circulating endothelial progenitor cells are reduced in peripheral vascular complications of type 2 diabetes mellitus. J Am Coll Cardiol，2005.45（9）： 1449-1457.

[7] Avogaro A，Toffolo G， Kiwanuka E，et al. L-argininenitric oxide kinetics in normal and type 2 diabetic subjects：a stable-labelled 15N arginine approach[J]. Diabetes，2003，52（3）： 795-802.

[8] Avogaro A，Pagnin E，Calo L.Monocyte NADPH oxidase subunitp22（phox） and inducible hemeoxygenase-1 gene expressions are increased in typeII diabetic patients： relationship with oxidative stress[J].J Clin Endocrinol Metab，2003，88（4）：1753-1759.

[9] Pagnin E， Fadini G，de Toni R， et al. Diabetes induces p66shc gene expression in human peripheral blood mononuclear cells： relationship to oxidative stress[J]. J Clin Endocrinol Metab，2005，90（2）：1130-1136.

[10] Zhao Gang， Song Mingbao， Huang Lan，et al.the effect of macrophages on the biological functions of epcs under high glucose conditions and its possible mechanism. Heart[J]，2012（98）： E75.

[11] Castejon R1， Jimenez-Ortiz C， Valero-Gonzalez S，et al.Decreased circulating endothelial progenitor cells as an early risk factor of subclinical atherosclerosis in systemic lupus erythematosus[J]. Rheumatology（Oxford），2013，22.[Epub ahead of print].

Characteristics of Endothelial Progenitor Cells in Patients with Diabetic Carotid Atherosclerosis

Ding Yi1，Yang Xin2
（1.Department of Endocrinology，Guilin People's Hospital，Guilin Guangxi 541002，China；2.Guilin People's Hospital，Department of critical care，Guilin Guangxi 541002，China）

Objective to explore the number’s differences and characteristics of endothelial progenitorcells（EPCs）of type 2 diabetes patients and diabetic patients with carotid atherosclerosis. Methods 32 healthy adults is a control group.104 patients diagnosed with diabetes，divided into DM group（56 examples）and diabetes with carotid atherosclerosis group（48 samples）divided by Doppler ultrasoundto measure. Blood samples are collected，glucose，insulin，triglycerides（TG），total cholesterol（TC），high densitylipoprotein（HDL-C），low densitylipoprotein（LDL-C），very low densitylipoprotein（VLDL-C）and so on. collected carotidintima-media thickness（IMT），and tested three group sofendothelial progenitorcells（EPCs）collected in diabetes with atherosclerosis group are analysised and comparisoned. Results EPC scarotid atherosclerosisin diabeticgroup，HOMAinsulin resistance indexwere higher thanDMgroup and control group，EPCsandIMT，HOMAinsulin resistancenegative correlation. Conclusion diabetes have an impact on endothelial function early，insulin resistanceis an important factoraffectingendothelial function.

diabetes；carotidatherosclerosis；endothelial progenitor cells

課題項目：廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生廳科研課題（編號：Z2013452）

丁毅，本科，副主任醫(yī)師，主要研究方向：2型糖尿病及相關(guān)并發(fā)癥。