譚鵬　張海珠　張定堃　伍珊娜　牛明　王伽伯　肖小河

[摘要]該文嘗試將多指標(biāo)成分同時(shí)定量分析和生物效價(jià)分析方法聯(lián)合使用的模式應(yīng)用于中藥配方顆粒的質(zhì)量評價(jià)，并以大黃配方顆粒為模式藥進(jìn)行了示范性研究。采用超高效液相色譜法同時(shí)測定大黃配方顆粒中蘆薈大黃素8OβD葡萄糖苷等10個(gè)蒽醌類化學(xué)成分的含量；在復(fù)方地芬諾酯片致小鼠便秘模型上，測定不同批次大黃配方顆粒致瀉生物效價(jià)；在體外抗大鼠血小板聚集模型基礎(chǔ)上，測定不同批次大黃配方顆粒的活血生物效價(jià)；采用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件對測定的10個(gè)蒽醌類化學(xué)成分與致瀉、活血生物效價(jià)之間的相關(guān)性進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。多指標(biāo)化學(xué)含量測定結(jié)果顯示10個(gè)批次間大黃配方顆粒的化學(xué)表征差異較大，與此同時(shí)，致瀉、活血生物效價(jià)均存在一定的差異性；相關(guān)性分析結(jié)果顯示大黃配方顆粒的致瀉生物效價(jià)強(qiáng)弱和其含有的結(jié)合型蒽醌糖苷類成分的含量有顯著相關(guān)性（P<001），活血生物效價(jià)的強(qiáng)弱和其含有的游離型蒽醌成分的含量有顯著相關(guān)性（P<001）。綜上，采用多組分化學(xué)表征和生物效價(jià)檢測聯(lián)用的模式可以客觀量化、更全面的反映不同批次大黃配方顆粒的整體質(zhì)量差異。

[關(guān)鍵詞]大黃配方顆粒； 質(zhì)量評價(jià)； 生物效價(jià)； 多組分化學(xué)表征； 相關(guān)性分析

[Abstract]This study attempts to evaluate the quality of Chinese formula granules by combined use of multicomponent simultaneous quantitative analysis and bioassay The rhubarb dispensing granules were used as the model drug for demonstrative study The ultrahigh performance liquid chromatography （UPLC） method was adopted for simultaneously quantitative determination of the 10 anthraquinone derivatives （such as aloe emodin8OβDglucoside） in rhubarb dispensing granules； purgative biopotency of different batches of rhubarb dispensing granules was determined based on compound diphenoxylate tabletsinduced mouse constipation model； blood activating biopotency of different batches of rhubarb dispensing granules was determined based on in vitro rat antiplatelet aggregation model； SPSS 220 statistical software was used for correlation analysis between 10 anthraquinone derivatives and purgative biopotency， blood activating biopotency The results of multicomponents simultaneous quantitative analysisshowed that there was a great difference in chemical characterizationand certain differences inpurgative biopotency and blood activating biopotency among 10 batches of rhubarb dispensing granules The correlation analysis showed that the intensity of purgative biopotency was significantly correlated with the content of conjugated anthraquinone glycosides （P<001）， and the intensity of blood activating biopotency was significantly correlated with the content of free anthraquinone （P<001） In summary， the combined use of multicomponent simultaneous quantitative analysis and bioassay can achieve objective quantification and more comprehensive reflection on overall quality difference among different batches of rhubarb dispensing granules

[Key words]rhubarb dispensing granules； quality evaluation； biopotency； multicomponent simultaneous quantitative analysis； correlation analysis

中藥配方顆粒是按照傳統(tǒng)中藥湯劑煎煮的方式，采用現(xiàn)代制藥技術(shù)將單味中藥飲片經(jīng)提取、濃縮、干燥等工藝制成的單味中藥產(chǎn)品，具有不需煎煮、服用方便等優(yōu)點(diǎn)[1]。但由于存在生產(chǎn)工藝不統(tǒng)一、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與臨床療效脫節(jié)等問題[23]，導(dǎo)致中藥配方顆粒的質(zhì)量良莠不齊，無法保障臨床療效，所以國家目前對中藥配方顆粒僅實(shí)行試點(diǎn)生產(chǎn)，究其主要原因是缺少一些可全面有效地評控中藥配方顆粒的質(zhì)量的評價(jià)方法[45]?，F(xiàn)有文獻(xiàn)顯示[67]，化學(xué)指紋圖譜法是目前中藥配方顆粒的主要評控方法，但是越來越多的藥學(xué)研究者意識到僅僅通過指標(biāo)性成分含量測定或化學(xué)指紋圖譜方法無法全面表征其整體質(zhì)量，也無法關(guān)聯(lián)其臨床療效。

近年來，生物活性評價(jià)方法已逐漸受到國內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注，尤其是2015年FDA發(fā)布的《植物藥研發(fā)行業(yè)指南》對植物藥及制劑的質(zhì)量評控明確提出[8]：在只靠化學(xué)檢驗(yàn)不足以確保質(zhì)量和療效一致性的情況下，應(yīng)在植物藥原料藥和/或藥品放行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和穩(wěn)定性方案中納入生物檢定，并以反映藥物已知或預(yù)期作用機(jī)制的生物檢定為首選。肖小河等指出[910]，生物活性檢測方法聯(lián)合多組分化學(xué)表征將是中藥及中藥相關(guān)產(chǎn)品質(zhì)量評控的重要發(fā)展方向。

根據(jù)2015年版《中國藥典》，大黃配方顆粒的原藥材有3個(gè)基原：蓼科植物掌葉大黃Rheum palmatum L、唐古特大黃R tanguticum Maximex Balf或藥用大黃R officinale Baill的干燥根和根莖[11]，具有瀉下通便、活血化瘀、利濕退黃等多種功效。作為典型的多基原、多功效中藥，如何全面、有效地評價(jià)大黃配方顆粒在不同功效用途中的品質(zhì)優(yōu)劣，將關(guān)乎其臨床療效的有效性和穩(wěn)定性。在課題組前期研究基礎(chǔ)上[1214]，本研究嘗試將多組分化學(xué)表征和生物效價(jià)檢測聯(lián)用模式示范性應(yīng)用于大黃配方顆粒的質(zhì)量評價(jià)，以期為中藥配方顆粒的質(zhì)量評價(jià)提供一種參考研究模式和分析方法。

1材料

11儀器

Waters Acquity超高效液相色譜儀（Waters，USA），配備自動(dòng)進(jìn)樣器，光電二極管陣列檢測器，Empower 2色譜工作站；XS205電子天平（Mettler Toldeo，Switzerland），AL204電子天平（Mettler Toldeo，Switzerland），超聲儀（南京新辰生物科技有限公司，500 W，40 KHz），MilliQ超純水制備系統(tǒng)（Millipore，USA）；Aggram血小板聚集分析儀（Helena，USA）；配備鐳射光學(xué)系統(tǒng)，四通道，鍍硅的硼硅玻璃比色管（767 mm×60 mm）；臺式低速大容量離心機(jī)（L550，湖南湘儀離心機(jī)儀器有限公司），27 mL一次性真空采血管（含有0109 mol·L-1枸櫞酸鈉，美國BD公司）；采血針（批號150809，天津哈娜好醫(yī)材有限公司）。

12動(dòng)物

ICR雄性小鼠，SPF級，體重19～22 g；SD雄性大鼠，SPF級，體重240～260 g，動(dòng)物許可證號：SCXK（軍）20120004，由中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

13試藥

蘆薈大黃素8OβD葡萄糖苷（純度9861%），大黃酸8OβD葡萄糖苷（純度9835%），大黃酚8OβD葡萄糖苷（純度9842%），大黃素8OβD葡萄糖苷（純度9845%），大黃素甲醚8OβD葡萄糖苷（純度9841%），蘆薈大黃素（純度9849%），大黃酸（純度9908%），大黃素（純度9911%），大黃酚（純度9987%），大黃素甲醚（純度9920%），番瀉苷A（純度9901%），均由成都普菲德生物科技有限公司提供。色譜級甲醇、色譜級磷酸（85%，Thermo Fisher Scientific，USA），ACS級Dimethyl sulfoxide （DMSO，AMRESCO）。苯巴比妥鈉（Sigma公司），腺苷二磷酸（ADP，購買于美國Helena Lab，批號215551189）。復(fù)方地芬諾酯片（批號1406001，常州康普藥業(yè)有限公司），10批次大黃配方顆粒由北京康仁堂提供，具體信息見表1。

2方法與結(jié)果

21大黃配方顆粒中10個(gè)蒽醌類化學(xué)成分含量測定[12]

211色譜條件

Waters BEH C18色譜柱 （21 mm×100 mm，17 μm），以甲醇（A）和01%磷酸水溶液（B）的混合溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫（000～500 min，39%～42% A；501～700 min，42%～51% A；701～1200 min，51%～56% A；1201～1500 min，56%～70% A；1501～1700 min，70%～77% A；1701～2100 min，77%～78% A；2101～2500 min，78%～88% A）；體積流量為020 mL·min-1，檢測波

長410 nm，進(jìn)樣量2 μL，柱溫30 ℃，柱平衡時(shí)間 5

min，理論塔板數(shù)以大黃素峰計(jì)算不得低于7 000。

212對照品溶液的制備

精密稱取蘆薈大黃素8OβD葡萄糖苷等10個(gè)對照品適量，置于50 mL棕色量瓶中，先用40 mL DMSO溶解，再用色譜級甲醇稀釋至刻度，配制成濃度為700～3500 mg·L-1的混合對照品溶液，4 ℃儲存?zhèn)溆谩?/p>

213供試品溶液的制備

準(zhǔn)確稱取大黃配方顆粒細(xì)粉（過4號篩）050 g，置于50 mL棕色量瓶中，精密加入甲醇30 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理60 min，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足失重，搖勻，用022 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

214方法學(xué)驗(yàn)證

按照2015年版《中國藥典》四部關(guān)于藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則和國際藥品技術(shù)要求協(xié)調(diào)組織的指導(dǎo)方針（International Conference on Harmonization of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Huaman Use，ICH Q2B）進(jìn)行方法學(xué)考察[1516]。

2141線性關(guān)系考察精密吸取上述混合對照品溶液02，04，08，10，20，40 μL注入超高效液相色譜儀進(jìn)行測定，記錄色譜峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo)（y），進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)（x），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明10個(gè)化學(xué)成分在一定濃度范圍內(nèi)的線性關(guān)系較好，結(jié)果見表2。

表2線性關(guān)系和靈敏度分析

Table 2Linearity and sensitivity of the UPLC analysis

化學(xué)成分線性方程R2線性范圍/mg·L-1檢測限/mg·L-1定量限/mg·L-1

蘆薈大黃素8OβD葡萄糖苷y=53×106x-24 0650999 2400～8000050200

大黃酸8OβD葡萄糖苷y=54×106x-30 7720999 1480～12000060240

大黃酚8OβD葡萄糖苷y=49×106x-2 9840999 3672～8400084336

大黃素8OβD葡萄糖苷y=48×106x-5 6930999 4600～4000100300

大黃素甲醚8OβD葡萄糖苷y=55×106x-4 0190999 1400～4000080200

蘆薈大黃素y=99×106x-9 9730999 6400～4000080200

大黃酸y=89×106x-9 2440999 5400～4000080200

大黃素y=75×106x-5 7120999 4600～7200100300

大黃酚y=10×107x+4091000600～6400103300

大黃素甲醚y=92×106x-1 4371000540～3000090270

2142檢測限和定量限考察檢測限和定量限用來評估方法的靈敏性，本實(shí)驗(yàn)中采用直觀法。用上述已知濃度的對照品溶液不斷稀釋，直至試驗(yàn)出能被可靠地檢測出和定量檢測的最低濃度，結(jié)果見表2。

2143精密度考察取上述混合對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，進(jìn)樣量為2 μL，記錄目標(biāo)化合物的色譜峰面積，計(jì)算RSD。結(jié)果顯示蘆薈大黃素8OβD葡萄糖苷，大黃酸8OβD葡萄糖苷等10個(gè)化學(xué)成分峰面積的RSD為14%，16%，19%，19%，30%，21%，12%，24%，10%，15%，表明儀器的精密度良好。

2144穩(wěn)定性考察取同一供試品溶液，分別于制備后0，2，4，8，16，24 h時(shí)進(jìn)樣測定，記錄各目標(biāo)化合物的峰面積，計(jì)算RSD。結(jié)果顯示，蘆薈大黃素8OβD葡萄糖苷，大黃酸8OβD葡萄糖苷等10個(gè)化學(xué)成分在24 h內(nèi)色譜峰面積的RSD分別為20%，24%，19%，25%，19%，14%，20%，25%，24%，17%，表明在24 h內(nèi)供試品溶液的穩(wěn)定性良好。

2145重復(fù)性考察取同一批次（批號14009802）的大黃配方顆粒粉末，共稱取6份，每份050 g，精密稱定，按照上述方法制備供試品溶液。精確吸取6份供試品溶液各20 μL注入超高效液相色譜儀進(jìn)行測定，平行測定2次，記錄目標(biāo)化合物色譜峰面積，計(jì)算含量。結(jié)果顯示6份供試品中10個(gè)化學(xué)成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)平均值為109，025，326，025，036，022，019，013，049，011 mg·g-1，表明方法的重復(fù)性良好。

2146準(zhǔn)確度考察取同一批次（批號14009802）已知含量的大黃配方顆粒樣品粉末025 g，置于50 mL棕色量瓶中，分別加入相等質(zhì)量的對照品物質(zhì)（以各化合物的對照品單標(biāo)溶液形式加入），最后加入一定量甲醇溶液至總量為25 mL，按照上述法制備供試品溶液，進(jìn)樣測定，計(jì)算含量和回收率，結(jié)果見表3。結(jié)果表明10個(gè)化學(xué)成分的回收率在9613%～1049%；表明方法的準(zhǔn)確性較好。

215供試品溶液的分析

精密吸取對照品溶液和供試品溶液20 μL注入超高效液相色譜儀分析，記錄色譜峰面積，按照外標(biāo)法計(jì)算各目標(biāo)化學(xué)成分的含量。典型UPLCUV見圖1，測定結(jié)果見表4。

22大黃配方顆粒致瀉效價(jià)的測定[1213]

221參照物溶液的制備

準(zhǔn)確稱取番瀉苷A對照品130 mg，準(zhǔn)確加入溫度為37 ℃的01%NaHCO3熱水52 mL溶解備用，保持藥液溫度37 ℃，給藥時(shí)搖勻。

222供試品溶液的制備

準(zhǔn)確稱取各批次大黃配方顆粒10 g，用50 mL 37 ℃熱水溶解，超聲處理5 min，按照劑間比08進(jìn)行稀釋，得到4個(gè)不同給藥濃度。

223供試品致瀉效價(jià)的測定

取復(fù)方地芬諾酯片60片置于研缽研為細(xì)粉，加37 ℃熱水90 mL溶解，超聲20 min，備用，給藥時(shí)搖勻。ICR雄性小鼠130只，體重（20±3）g，分為13組，每組10只，實(shí)驗(yàn)前12 h禁食不禁水。其中第1組作為正常組，不給與任何造模和給藥；第2組作為模型對照組，僅僅給與復(fù)方地酚諾酯片造成便秘模型；第3組作為陽性對照組，給與復(fù)方地酚諾酯片混懸液造成便秘模型，再給與番瀉苷A水溶液灌胃；其余10組分別對應(yīng)10批次配方顆粒水溶液給藥。先用復(fù)方地酚諾酯片混懸液（劑量60 mg·kg-1）灌胃進(jìn)行造模，造模1 h后灌胃給藥，給藥量04 mL/只，給藥后禁食不禁水，8 h后收集糞便質(zhì)量，置于干燥潔凈EP管內(nèi)，準(zhǔn)確稱定質(zhì)量。根據(jù)簡化概率

單位法原理計(jì)算致瀉效價(jià)[17]。將給藥劑量和糞便質(zhì)量輸入生物效價(jià)量反應(yīng)計(jì)算軟件，計(jì)算致瀉效價(jià)和效價(jià)的可信限率（FL），結(jié)果見表5。

測定結(jié)果顯示，10個(gè)批次大黃配方顆粒的致瀉生物效價(jià)在371～1301 U·g-1，后者是前者的35倍，表明不同批次大黃配方顆粒致瀉生物效價(jià)差異較大。

23大黃配方顆?；钛r(jià)的測定[18]

231乏血小板血漿（PPP）和富血小板血漿（PRP）的制備

取體重為240～260 g的SD雄性大鼠，先用苯巴比妥鈉（60 mg·kg-1）麻醉，再用真空采血管從腹主動(dòng)脈取血。采血管立即置于離心機(jī)內(nèi)，在轉(zhuǎn)速為800 r·min-1、溫度為20 ℃模式下離心15 min，小心吸取上清液置于潔凈的5 mL EP管內(nèi)；剩余血液重復(fù)操作1次，小心吸取上清液置于前述EP管內(nèi)，得到富血小板血漿（plateletrich plasma，PRP）；剩余血液在轉(zhuǎn)速為3 000 r·min-1、溫度為20 ℃模式下離心30 min，小心吸取上清液置于另一支5 mL EP管內(nèi)，得到乏血小板血漿（plateletpoor plasma，PPP），備用。PRP和PPP需要保持在18～25 ℃，并盡量不要擾動(dòng)。

232誘導(dǎo)劑的制備

每瓶含有200 μmol·L-1的腺苷二磷酸（ADP），準(zhǔn)確加入去離子水1 mL溶解，輕輕搖勻，作為誘導(dǎo)劑儲備液。吸取適量儲備液用生理鹽水按照1∶3的比例稀釋儲備液，作為誘導(dǎo)劑工作液。復(fù)溶后的儲備液保存在2～6 ℃可穩(wěn)定一周或在-80 ℃下可保存3個(gè)月。工作液應(yīng)在制備后2 h內(nèi)使用。

233對照品溶液和供試品溶液的制備

準(zhǔn)確稱取編號為yp8的大黃配方顆粒10 g，分別用50 mL 37 ℃熱水溶解，超聲處理5 min，作為對照品溶液備用。同法制備其他批次的溶液，作為供試品溶液備用。

234血小板聚集率的測定

大黃配方顆粒對照品溶液和供試品溶液按劑間比08用空白PPP進(jìn)行稀釋，得到4個(gè)不同給藥濃度。按照（4，4）法分別測定對照品組和供試品組的血小板最大聚集率（Max），每組平行測定2次。具體操作如下：血小板聚集儀提前開機(jī)預(yù)熱30 min，待預(yù)熱完成后，先用PPP樣本400 μL進(jìn)行透光度調(diào)零，每根玻璃比色管分別加入PRP 125 μL和含藥PPP 100 μL混勻（空白組加入不含藥的PPP），加入一粒攪拌子，把比色管放入預(yù)熱通道內(nèi)37 ℃環(huán)境下預(yù)熱3 min，再將玻璃比色管放入經(jīng)過調(diào)零后的檢測通道內(nèi)，準(zhǔn)確加入ADP誘導(dǎo)劑工作液25 μL，迅速按下檢測按鈕進(jìn)行檢測，記錄聚集波形和最大聚集率。檢測時(shí)限應(yīng)在血液采集后2 h內(nèi)完成，檢測室溫環(huán)境應(yīng)保持在18～25 ℃。

235大黃配方顆?；钛r(jià)的計(jì)算

由于有拮抗血小板聚集的藥物存在，相對于空白組而言，含藥組血小板最大聚集率會降低，由此可以計(jì)算得到測試藥物對血小板聚集過程的最大抑制程度，即抑制率。抑制率=（空白組最大聚集率-給藥組最大聚集率）/空白組最大聚集率×100%。

根據(jù)簡化概率單位法原理計(jì)算活血效價(jià)[17]。由于目前尚無用于活血生物效價(jià)檢測的大黃配方顆粒對照品，實(shí)驗(yàn)中對大黃配方顆粒標(biāo)準(zhǔn)參照物（yp1）進(jìn)行原始效價(jià)賦值，定義其效價(jià)為1萬 U·g-1，計(jì)算不同批次大黃配方顆粒的活血效價(jià)和效價(jià)的可信限率（FL），結(jié)果見表6。

測定結(jié)果顯示，10個(gè)批次大黃配方顆粒的活血生物效價(jià)在6 329～13 928 U·g-1，后者是前者的22倍，表明不同批次間大黃配方顆粒的活血生物效價(jià)存在一定的差異。

24相關(guān)性分析

為了探究大黃配方顆粒中10個(gè)蒽醌類化學(xué)成分與實(shí)際測得瀉下、活血效價(jià)強(qiáng)弱的相關(guān)性，采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 220對測得的10個(gè)化學(xué)成分含量和大黃配方顆粒的實(shí)際測得瀉下、活血效價(jià)作相關(guān)性分析，以相關(guān)系數(shù)（r）作為評價(jià)指標(biāo)，相關(guān)性分析結(jié)果見圖2。

相關(guān)性分析結(jié)果顯示，大黃配方顆粒中的結(jié)合型蒽醌糖苷的含量多寡與瀉下生物效價(jià)的高低具有較好的相關(guān)性（r=083），而總游離蒽醌的含量與瀉下生物效價(jià)的高低幾乎沒有相關(guān)性（r=007）；與之相反，大黃配方顆粒中游離蒽醌的含量多寡與活血生物效價(jià)的高低具有較好的相關(guān)性（r=078），而總蒽醌糖苷的含量與活血生物效價(jià)高低的相關(guān)性較小（r=018）。結(jié)果表明了結(jié)合型蒽醌糖苷類成分對大黃配方顆粒的瀉下通便作用貢獻(xiàn)較大，而游離蒽醌類成分對活血化瘀作用的貢獻(xiàn)較大，這與課題組前期研究結(jié)果相符合[18]。相關(guān)性分析結(jié)果提示，利用多指標(biāo)化學(xué)表征方法評控大黃配方顆粒的質(zhì)量，應(yīng)選擇與功效相關(guān)（以臨床功效為導(dǎo)向）的藥效物質(zhì)作為評價(jià)指標(biāo)。

3討論

現(xiàn)代研究表明，活血化瘀中藥主要通過抑制血栓形成、改善血流動(dòng)力學(xué)、血液流變學(xué)等過程發(fā)揮其活血化瘀作用[19]。不可否認(rèn)，拮抗血小板聚集只是藥物發(fā)揮活血化瘀功效的一部分作用機(jī)制，不能完全代表活血化瘀的整體作用，但血小板聚集功能是線性擬合曲線；95%置信區(qū)間；預(yù)測區(qū)間。

影響機(jī)體止血/活血過程的重要因素之一，而血小板聚集性是反應(yīng)血小板功能的重要指標(biāo)。比濁法作為一種體外評價(jià)血小板聚集功能的檢測方法，已經(jīng)廣泛應(yīng)用于臨床檢驗(yàn)，被認(rèn)可為檢測血小板聚集作用的“金標(biāo)準(zhǔn)”[2021]。利用體外抗血小板聚集已經(jīng)應(yīng)用于川芎、赤芍、三七、舒絡(luò)膠囊等中藥及中藥復(fù)方制劑的活血化瘀作用的評價(jià)[2223]。本實(shí)驗(yàn)在體外抗血小板聚集的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步引入質(zhì)反應(yīng)計(jì)算軟件，定量計(jì)算拮抗活血效價(jià)值，可更加直觀的表征不同藥物拮抗血小板聚集作用的強(qiáng)弱。

由于大黃配方顆粒的原材料來源各異，對其進(jìn)行質(zhì)量一致性評價(jià)對于臨床用藥的療效一致性和有效性具有重要意義。在本實(shí)驗(yàn)中，從多組分化學(xué)定量測定結(jié)果來看，化學(xué)表征存在一定的差異性；從生物效價(jià)測定結(jié)果來看，不同批次間大黃配方顆粒的致瀉生物效價(jià)和活血生物效價(jià)也存在較大的差異。這就表明了，化學(xué)定量測定僅僅只是對大黃配方顆粒在某一特定紫外吸收波段下的化學(xué)表征，并不能全面表征其質(zhì)量差異，而致瀉生物效價(jià)和活血生物效價(jià)從2個(gè)不同的功效作用強(qiáng)度反映其質(zhì)量差異，是對大黃配方顆粒質(zhì)量直接關(guān)聯(lián)臨床功效的整體表征。從相關(guān)性分析結(jié)果來看，致瀉生物效價(jià)的強(qiáng)弱和大黃配方顆粒中的結(jié)合型蒽醌糖苷的含量多寡具有顯著相關(guān)性（P<001），而活血生物效價(jià)的強(qiáng)弱和游離型蒽醌的含量多寡有顯著相關(guān)性（P<001），這表明了在現(xiàn)階段以化學(xué)成分定量測定為主要評控手段和模式下，盡可能多的定量測定配方顆粒中關(guān)聯(lián)功效的活性成分對其質(zhì)量一致性控制具有重要意義。

中藥配方顆粒由于已經(jīng)經(jīng)過提取、濃縮、制粒、干燥等加工工藝，其本身與原藥材已有很大差異，傳統(tǒng)的顯微鑒別、性狀鑒別等質(zhì)量評控方法已經(jīng)無法對其進(jìn)行質(zhì)量評控。化學(xué)指紋圖譜分析方法在一定程度上可以表征質(zhì)量的波動(dòng)，但這也僅僅是在某一紫外吸收波段下的化學(xué)表征，具有模糊性和不確定性的劣勢，也不能直接、客觀量化的表征其整體質(zhì)量。生物活性評價(jià)方法既能關(guān)聯(lián)臨床功效，又具有實(shí)際可操作性，在中藥配方顆粒的質(zhì)量評控中具有獨(dú)特的優(yōu)勢。2015年12月24日國家食品藥品監(jiān)督管理總局發(fā)布的《中藥配方顆粒管理辦法（征求意見稿）》第十四條中明確指出“中藥配方顆粒藥品標(biāo)準(zhǔn)的制定，加強(qiáng)專屬性鑒別和多成份、整體質(zhì)量控制，充分反映現(xiàn)階段藥品質(zhì)量控制的先進(jìn)水平和質(zhì)量源于設(shè)計(jì)的理念”。本文首次嘗試將多指標(biāo)化學(xué)成分定量測定和關(guān)聯(lián)臨床功效的生物效價(jià)檢測聯(lián)用模式應(yīng)用于中藥配方顆粒的質(zhì)量評價(jià)，并以大黃配方顆粒為模式藥進(jìn)行了示范性研究，對其他中藥配方顆粒的質(zhì)量評控具有一定的參考價(jià)值。

[參考文獻(xiàn)]

[1]孫源源，施萍借助中藥配方顆粒推進(jìn)中藥國際化的對策研究[J] 中草藥，2013，44 （8）：929

[2]李松林，宋景政，徐宏喜 中藥配方顆粒研究淺析[J] 中草藥，2009，40 （增刊）：1

[3]鹿巖，李妮，宋毅斐 2010—2013 年357 種中藥配方顆粒的臨床使用分析[J] 現(xiàn)代藥物與臨床，2014，29 （9）：1050

[4]劉暉暉，詹若挺，陳蔚文，等 中藥配方顆拉發(fā)展現(xiàn)狀與臨床推廣應(yīng)用面臨的主要問題分析[J] 世界科學(xué)技術(shù)——中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2011，13 （1）：9

[5]涂瑤生，畢曉黎，羅文匯 中藥配方顆拉的質(zhì)量控制研究[J]. 世界科學(xué)技術(shù)——中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2011，13 （1）：41

[6]張彥東，盧瑩瑩，鄭曉英，等 羅漢果配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J] 中藥新藥與臨床藥理，2015，26 （5）：695

[7]鄭江萍，梁俊，黃良永甘草配方顆粒HPLC指紋圖譜研究[J] 中國藥師，2015，18 （12）：2053

[8]US Department of Health and Human Services， Food and Drug Administration Center for Drug Evaluation and Research （CDER）.Botanical drug development guidance for industry （draft guidance） [S] 2015

[9]肖小河 中醫(yī)藥轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)中的關(guān)鍵科學(xué)問題：中藥質(zhì)量生物評價(jià)與控制[J] 中藥與臨床，2010，1 （4）：1

[10]肖小河，王伽伯，鄢丹 生物評價(jià)在中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化中的研究與應(yīng)用[J] 世界科學(xué)技術(shù)——中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2014，16 （3）：514

[11]中國藥典一部 [S] 2015：23

[12]王伽伯 中藥品質(zhì)生物評價(jià)與控制的示例（大黃）研究[D] 成都：成都中醫(yī)藥大學(xué)，2008

[13]譚鵬 基于效應(yīng)成分指數(shù)的中藥質(zhì)量評價(jià)模式和方法研究：以大黃為例[D] 成都：成都中醫(yī)藥大學(xué)，2016

[14]Tan P， Xiao X H， Wang J B， et al A practical method for the simultaneous quantitative determination of twelve anthraquinone derivatives in rhubarb by a singlemarkerbased on ultraperformance liquidchromatography and chemometric analysis[J] Anal Method， 2016， 8：3927

[15]中國藥典四部[S]2015：374

[16]ICH Topic Q2B Validation of analytical procedures： methodology （CPMP/ICH/281/95） Step4 Consensus guideline[S] Geneva： the European agency for the evaluation of medicinal products， 1996

[17]周海鈞藥品生物檢定[M] 北京：人民衛(wèi)生出版社，2005：127

[18]張海珠，譚鵬，肖小河，等基于活血生物效價(jià)和化學(xué)指紋圖譜的大黃品質(zhì)評價(jià)研究[J] 藥學(xué)學(xué)報(bào)，2017，52 （3）： 436

[19]劉杰文，齊淑玲血瘀證實(shí)質(zhì)和活血化瘀藥物作用機(jī)理的研究[J] 中醫(yī)藥通報(bào)，2003，2 （1）：2

[20]Gurbel P A， Becker R C， Mann K G， et al Platelet function monitoring in patients with coronary artery disease[J] J Am Coll Cardiol，2007， 50（19）：1822

[21]Harrison P Platelet function analysis[J] Blood Rev， 2005， 19（2）： 111

[22]項(xiàng)耀祖，商洪才，張伯禮 抗血小板中藥研究進(jìn)展[J] 中草藥，2008，39（2）：290

[23]王鳳琴，陳岑，夏之寧，等 血小板在活血化瘀中藥研究中的應(yīng)用[J] 中國中藥雜志，2014，39（16）：290

[責(zé)任編輯孔晶晶]