郝俊璽，葉妮，王建中，王海挺，曹興元*

(1.內蒙古農業(yè)大學科技園區(qū)管理辦公室，呼和浩特 010018；2.中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所 北京 100081； 3.中國農業(yè)大學動物醫(yī)學院，北京 100193；4.齊魯動物保健品有限公司，濟南 250100)

?

美洛昔康片劑在比格犬體內的藥代動力學及生物利用度研究

郝俊璽1，葉妮2，王建中3，王海挺4，曹興元3*

(1.內蒙古農業(yè)大學科技園區(qū)管理辦公室，呼和浩特 010018；2.中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所 北京 100081； 3.中國農業(yè)大學動物醫(yī)學院，北京 100193；4.齊魯動物保健品有限公司，濟南 250100)

以0.1 mg/kg體重的劑量研究美洛昔康片在比格犬中的藥代動力學和生物利用度。采用HPLC分析血漿中的藥物濃度，WinNonlin 6.4非房室模型計算藥動學參數(shù)。比格犬內服美洛昔康片后測得0～48 h美洛昔康的T1/2、Cmax、Tmax和AUC0-t分別為14.55±2.18 h、296.16±74.15 ng·mL-1、6.0±0.00 h和6356.79±1089.78 ng·h·mL-1；比格犬靜脈注射美洛昔康溶液后，測得0～48 h美洛昔康的T1/2和AUC0-t分別為11.54±4.18 h和5510.68±1075.29 ng·h·mL-1。內服美洛昔康片劑的絕對生物利用度為115.35%。美洛昔康片在比格犬體內消除速率較慢，消除半衰期較長，在體內滯留時間較長，具有絕對生物利用度高，藥物在體內作用時間較長的藥動學特征。

美洛昔康；犬；藥代動力學；生物利用度

犬常見的止痛藥包括非甾體抗炎藥、阿片類藥物和局部麻醉藥物。獸醫(yī)臨床常用非甾體抗炎藥治療肌肉骨骼和腹腔疼痛[1-2]。非甾體抗炎藥具有退熱、抗炎、鎮(zhèn)痛的作用[3]，其主要機制是通過抑制環(huán)氧化酶進而阻斷前列腺素的合成[4]。美洛昔康屬于烯醇類的非甾體抗炎藥，能有效退熱、抗炎和止痛[5]。其選擇性的抑制環(huán)氧化酶-2。而環(huán)氧化酶-2是疾病狀態(tài)誘導產生的[6]。美洛昔康已被廣泛用于人醫(yī)與獸醫(yī)臨床，治療術后及骨關節(jié)炎[5]。劉宏[7]研究報道過美洛昔康對犬骨關節(jié)炎具有良好的療效。袁震等[8]曾報道過美洛昔康口服液在犬體內的藥代動力學。Mahmood等[9]研究口服美洛昔康溶液在犬上的生物利用度。但國內有關美洛昔康片劑在犬體內的藥代動力學研究鮮有報道。本文研究美洛昔康片劑在比格犬體內的藥代動力學，以為其在臨床更好應用于治療相關疾病提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 試驗動物 比格犬12只(11～13月齡，10～12 kg，雌雄各半)，購自北京蘇家坨某比格犬試驗場。實驗動物房通風良好，裝備空調，溫度保持在16～26 ℃，濕度保持在40%～70%，明暗照明各12 h，每只比格犬均用耳部紋身標記，并在籠具上標注試藥編號與劑量。

1.2 藥品與儀器 美洛昔康片(批號：1307002，規(guī)格：2.5 mg/片)；美洛昔康注射液(批號：G 20809A-29，規(guī)格：5 mg/mL)，勃林格殷格翰公司。美洛昔康標準物質(規(guī)格：50 mg，含量≥99%)，批號100679-200401，中國食品藥品檢定研究院。乙酸乙酯、甲醇和甲酸，色譜純，F(xiàn)isher公司；其他試劑均為分析純。

高效液相色譜儀-紫外檢測器：Waters 2695-2996(Waters 公司)；電子天平(型號XP105，瑞士Mettler Toledo公司)；純水儀(型號Milli-Q，美國MilliPORE公司)；旋渦混合器(型號VX-2400，美國TROEMNER公司)；移液器(德國Eppendorf公司)；離心機(Centrifuge 5804，德國Eppendorf公司)；數(shù)控超聲清洗器(型號KQ5200DB，昆山市超聲儀器有限公司)；氮吹儀(型號：OA-SYS N-EVAP112, Organomation Associates公司)。

1.3 方法 試驗前將比格犬稱重，隨機分為兩組，每組雌雄各半。給藥前一天，比格犬禁食過夜。根據藥品說明書推薦劑量，6只比格犬以0.1 mg/kg體重劑量，經口一次性內服給予藥品美洛昔康片。給藥前及給藥后分別在0.25、0.5、1、1.5、2、2.5、3、4、5、6、8、10、12、24、36、48、60和72 h，臂頭靜脈采血2.5 mL。另外6只比格犬以0.1 mg/kg體重劑量，經臂頭靜脈一次性緩慢注射美洛昔康注射液。靜注給藥前及給藥后分別在0.083、0.25、0.5、1、1.5、2、2.5、3、4、6、8、10、12、24、36、48、60和72 h，給藥對側臂頭靜脈采血2.5 mL。血樣置于肝素抗凝的聚丙烯離心管中，3800 rpm離心10 min，吸取上層血清，-20 ℃保存待測。比格犬給藥4 h后可恢復進食，試驗過程中可自由飲水。為確保片劑完全口服，給藥后立即灌胃給予少量生理鹽水(10～20 mL)。

1.4 血漿樣品前處理 1)取1 mL犬血漿于10 mL離心管中，然后加入20 μL 5 mol/L NaOH，渦動30 s，9000 r/min，4 ℃條件下離心3 min；2)取上清，分別加入200 μL 0.1 mol/L HCl，5 mL乙酸乙酯, 渦動2 min；然后4 ℃，9000 rpm 離心3 min,轉移上清于新離心管中；3)向沉淀中加入200 μL 0.1 mol/L HCl，3 mL乙酸乙酯, 渦動2 min；然后4 ℃，9000 r/min 離心3 min，轉移上清于離心管； 4)合并兩次上清液；5)于37 ℃，氮吹至近干；6)用200 μL復溶液復溶(復溶液：甲醇-0.2%甲酸水溶液(70∶30，V/V)；7)0.22 μm濾膜過濾，取20 μL上機檢測。

1.5 血漿藥物濃度檢測 HPLC條件根據文獻報道[8]：高效液相色譜儀-紫外檢測器：Waters 2695-2996；檢測波長：355 nm；色譜柱為Symmetry C18，4.6 mm×150 mm，5 μm；流動相：甲醇：0.2%甲酸水(70∶30，V/V)；流速：1.0 mL/min；柱溫：30℃；進樣量：20 μL。洗脫條件：采集時間 6 min，70%甲醇：30%水(0.2%甲酸)。

1.6 數(shù)據分析 根據各濃度的數(shù)據，使用WinNonlin 6.4(Linear/Log Trapezoidal Method, 1/y weighting)軟件，對各試驗犬的數(shù)據進行計算相關藥動學參數(shù)。同時經公式FSC=(DoseIV/Dosepo)×(AUClastpo/AUClast IV)計算口服給藥的絕對生物利用度。

2 結 果

本試驗建立了血漿中美洛昔康的HPLC測定方法，能夠滿足測定要求。樣品測定靈敏度較高，MLX出峰時間5.13 min附近，無明顯血漿基質干擾與影響，空白血漿色譜圖見圖1，空白血漿添加美洛昔康色譜圖見圖2。在50～5000 μg/L的濃度范圍內，方法的線性關系良好，線性方程為y=72.173x-766.27，相關系數(shù)為0.9998≥0.99，標準曲線檢出限為8 ng/mL，定量限為10 ng/mL，回收率在80.7%～116.4%，日內變異系數(shù)均小于9.0%，日間變異系數(shù)均小于10.8%。檢測限與定量限優(yōu)于袁震[8]報道的檢出限為10 ng/mL，定量限為20 ng/mL。

圖1 空白血漿色譜圖Fig 1 Chromatogram of blank plasma

圖2 空白血漿添加美洛昔康色譜圖Fig 2 Chromatogram of MLX for 50 ng/mL in plasma

比格犬內服和靜脈注射給予美洛昔康后，美洛昔康的藥時曲線見圖3，藥代動力學參數(shù)見表1與表2。比格犬內服給予美洛昔康片后，測得0～48 h美洛昔康的T1/2、Cmax、Tmax和AUC0-t分別為14.55±2.18 h、296.16±74.15 ng·mL-1、6.0±0.00 h和6356.79±1089.78 ng·h·mL-1(表1)。比格犬靜脈注射給予美洛昔康溶液后，測得0～48 h美洛昔康的T1/2和AUC0-t分別為11.54±4.18 h和5510.68±1075.29 ng·h·mL-1(表2)。將內服給藥后藥-時曲線下面積(AUClast)與靜脈注射后藥-時曲線下面積(AUClast)比較，經公式F= (Dosei.v./Dosep.o.)×(AUClastp.o./ AUClasti.v.) 計算，內服美洛昔康片劑的絕對生物利用度為115.35%，說明美洛昔康片劑內服給藥吸收完全。

表1 比格犬內服美洛昔康片后美洛昔康的藥代動力學參數(shù)(0.1 mg·kg-1B.W.，P.O，n=6)Tab 1 Pharmacokinetic parameters of MLX after single oral administration in beagle dogs (0.1 mg·kg-1B.W.，P.O，n=6)

表2 比格犬靜脈注射美洛昔康溶液后美洛昔康的藥代動力學參數(shù)(0.1 mg·kg-1B.W.，I.V.，n=6)Tab 2 Pharmacokinetic parameters of MLX after single i.v. administration in beagle dogs (0.1 mg·kg-1B.W.，I.V.，n=6)

圖3 比格犬靜脈注射美洛昔康注射液(0.1 mg·kg-1B.W)和口服美洛昔康片(0.1 mg·kg-1B.W)的藥時曲線圖Fig 3 Curves of MLX concentration-time after i.v and p.o. administration to beagle dogs

3 討論與小結

本試驗中比格犬口服美洛昔康片后，測得血漿中美洛昔康在0～48 h的藥動學參數(shù)T1/2、Cmax、Tmax和AUC0-t分別為14.55±2.18 h、296.16±74.15 ng·mL-1、6.0±0.00 h和6356.79±1089.78 ng·h·mL-1，而Busch等[10]以0.2 mg/kg B.W.劑量對比格犬進行了美洛昔康內服給藥的藥動學研究，其T1/2為23.7 h(CV=30%)，MRT為40.0 h(CV=21.9%)，說明美洛昔康具有消除慢，血中半衰期長的特點，與本研究結果一致。獲得的AUCinf為22.9 mg/h/L(CV=16.0%)，約為本試驗結果(6898.34±1105.88 ng·h·mL-1)的2倍多。本試驗中Tmax為6.0 h，與Busch的研究結果比(Tmax為7.5 h，CV=110%)，說明美洛昔康片吸收速度適中，并且差異不顯著。本研究與袁震[8]報道美洛昔康口服液在0.2 mg/kg B.W犬體內的藥代動力學參數(shù)T1/2ka分別為(0.95±0.64) h、T1/2ke為(23.11±5.99) h、Tpeak為(4.32±2.15) h、Cmax為(0.77±0.25) μg/mL、AUC為(28.73±11.20) mg/h·mL-1、CL/F為(0.01±0.003) L/h、V/F為(0.25±0.09) L/kg相比，美洛昔康片劑比口服液消除速率較慢,消除半衰期較長,在體內滯留時間較長,藥物在體內作用時間較長。Mahmood等[9]研究美洛昔康口服液(0.2 mg/kg bw)的絕對生物利用度為 90.24%。本研究片劑的絕對生物利用度為115.35%，說明片劑比口服液具有更好的生物利用度。

本研究提示美洛昔康片劑在比格犬體內消除速率較慢，消除半衰期較長，在體內滯留時間較長，具有絕對生物利用度高，藥物在體內作用時間較長的藥動學特征，可為獸醫(yī)小動物臨床使用該藥提供給藥參考依據，為研究及尋找新藥，評價臨床已經使用藥物提供客觀標準。

[1] Cagnardi P, Ferraresi C, Zonca A,etal. Clinical pharmacokinetics of tramadol and main metabolites in horses undergoing orchiectomy. Veterinary Quarterly, 2014,34(3):143-151.

[2] Karademir U, Aksit D, Kum C,etal. The effect of surgery (Ovariohysterectomy) on the plasma disposition of meloxicam following intravenous administration in dogs. BMC Veterinary Research, 2016,12(1):33.

[3] Curry S L, Cogar S M, Cook J L. Nonsteroidal anti-inflammatory drugs: a review. Journal of the American Animal Hospital Association, 2005,41(5):298.

[4] Lees P, Giraudel J, Landoni M F,etal. PK-PD integration and PK-PD modelling of nonsteroidal anti-inflammatory drugs: principles and applications in veterinary pharmacology. Journal of Veterinary Pharmacology & Therapeutics, 2004,27(6):491-502.

[5] Chinnadurai S K, Messenger K M, Papich M G,etal. Meloxicam pharmacokinetics using nonlinear mixed-effects modeling in ferrets after single subcutaneous administration. Journal of Veterinary Pharmacology & Therapeutics, 2014,37(4):382-387.

[6] Engelhardt G, Homma D, Schnitzler C. Meloxicam: a potent inhibitor of adjuvant arthritis in the Lewis rat. Inflammation Research, 1995,44(12):548-555.

[7] 劉宏.美洛昔康片對犬的臨床安全性試驗及對誘導型骨關節(jié)炎的療效研究[D]. 南京農業(yè)大學, 2012.

Liu Hong. The study of meloxicam on clinical safety and curative effect of induced osteoarthritis in dogs. [D]. Nanjing agricultural University. 2011.

[8] 袁震. 美洛昔康口服液的安全性評價、藥動學及解熱鎮(zhèn)痛作用初步研究[D]. 南京農業(yè)大學, 2011.

Yuan Zheng. Study on safety evaluation, pharmacodynamics and pharmacokinetics of meloxicam oral solution [D]. Nanjing agricultural University. 2011.

[9] Mahmood K T, Ashraf M. Absolute bioavailability of oral meloxicam in healthy dogs. Japs Journal of Animal & Plant Sciences, 2010,20(3):193-196.

[10]Busch U, Schmid J, Heinzel G,etal. Pharmacokinetics of meloxicam in animals and the relevance to humans. Drug Metab Dispos, 1998,26(6):576-584.

(編輯：陳希)

Pharmacokinetics and Bioavailability of Meloxicam Tablet in Beagle Dogs

HAO Jun-xi1, YE Ni2, WANG Jian-zhong3, WANG Hai-ting4, CAO Xing-yuan3*

(1.InnerMongoliaAgriculturalUniversityScienceandTechnologyParkManagementOffice，Hohhot010018,China; 2.ChinaInstituteofVeterinaryDrugControl，Beijing100081,China; 3.CollegeofVeterinaryMedicine,ChinaAgriculturalUniversity,Beijing100193,China; 4.QiluAnimalHealthProductsCo.，Ltd，Jinan250100)

CaoXing-yuan,E-mail:cxy@cau.edu.cn

This study was designed to investigate the pharmacokinetic and bioavailability of meloxicam (MLX) tablet in beagle dogs at a dose of 0.1 mg/kg bodyweight. The drug concentrations were analyzed using high performance liquid chromatography. The main PK parameters for p.o. and i.v, groups with WinNonlin 6.4 software, respectively, were as followings: T1/2, Cmax, Tmaxand AUC0-48, 14.55±2.18 h，296.16±74.15 ng·mL-1, 6.0±0.00 h and 6356.79±1089.78 ng·h·mL-1; T1/2and AUC0-48, 11.54±4.18 h and 5510.68±1075.29 ng·h·mL-1. The absolute bioavailability of MLX via p.o. was 115.35%. The results demonstrated that MLX tablet was rapid absorption, slow elimination and high bioavailability.

meloxicam; dog; pharmacokinetic; bioavailability

國家自然科學基金(31672599)；2017年國家農產品質量安全風險評估項目(GJFP201700701)；科技部"十三五"重大專項子項目(2016YFD0501309-1) 作者簡介： 郝俊璽，講師，從事獸藥和飼料分析相關科研工作。

曹興元。 E-mail：cxy@cau.edu.cn

10.11751/ISSN.1002-1280.2017.7.09

2017-05-25

A

1002-1280 (2017) 07-0047-05

S859.79