楊立勇

云南省曲靖市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，云南 曲靖 655000

?

HPLC法測(cè)定貞芪扶正膠囊中特女貞苷的含量

楊立勇

云南省曲靖市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，云南 曲靖 655000

目的：建立高效液相色譜法測(cè)定貞芪扶正膠囊中特女貞苷含量的方法。方法:色譜柱為T(mén)hermo SCIENTIFIC Hypersil GOLD C18柱(4.6mm×250mm，5μm)，柱溫為25℃；流動(dòng)相為甲醇-水(36∶64)；流速為1.0mL/min； 檢測(cè)波長(zhǎng)為224nm。結(jié)果: 特女貞苷的進(jìn)樣量在0.328 3～4.924 4μg范圍內(nèi)與對(duì)應(yīng)峰面積呈良好的線(xiàn)性關(guān)系(r=1.0000,n=8)；精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性的RSD均<1.0%；平均加樣回收率100.8%，RSD=0.67%(n=6)。結(jié)論:本方法專(zhuān)屬性強(qiáng)、精密度高、分離度好,可用于測(cè)定貞芪扶正膠囊中特女貞苷的含量。

HPLC法；貞芪扶正膠囊；特女貞苷；含量測(cè)定

貞芪扶正膠囊是由女貞子、黃芪等藥經(jīng)加工而制成的膠囊劑，具有補(bǔ)氣養(yǎng)陰之功效，用于久病虛損、氣陰不足。女貞子為木犀科植物女貞LigustrumlucidumAit 的干燥成熟果實(shí)，具有扶正固本、滋補(bǔ)肝腎、明目烏發(fā)的功效。藥理研究表明，女貞子有保肝[1-4]、免疫調(diào)節(jié)[5-6]、抗氧化抗衰老[7]、降血糖降血脂[1,8-10]、抗癌[1,5,11-13]、抗炎抑[5,14-15]等作用。貞芪扶正膠囊現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[16]為原衛(wèi)生部頒標(biāo)準(zhǔn)(中藥成方制劑第十七冊(cè))，其標(biāo)準(zhǔn)只對(duì)黃芪進(jìn)行質(zhì)控，由于中成藥組方復(fù)雜，不能只控制其中一味藥的質(zhì)量，有必要對(duì)其它藥物進(jìn)行質(zhì)量控制，才能發(fā)揮其應(yīng)有療效。筆者參照中國(guó)藥典[17]及文獻(xiàn)[18-23]，建立了HPLC法測(cè)定貞芪扶正膠囊中特女貞苷的含量的方法，為提升貞芪扶正膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器 島津LC-20A型高效液相色譜儀(真空在線(xiàn)脫氣機(jī)，四元泵，自動(dòng)進(jìn)樣器，柱溫箱， VCD檢測(cè)器，Chemstation化學(xué)工作站)；METTLER TOLEDO MS205DU型電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)。

1.2 材料 特女貞苷對(duì)照品(批號(hào):111926-201404，購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院，含量：97.3%)，貞芪扶正膠囊(批號(hào): 141036，150806，160422，甘肅扶正藥業(yè)科技股份有限公司)。乙腈為色譜純，水為雙蒸水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Thermo SCIENTIFIC Hypersil GOLD C18柱(4.6mm×250mm，5μm)，柱溫為25℃；流動(dòng)相：甲醇-水(36∶64)；流速為1.0mL·min-1； 檢測(cè)波長(zhǎng)為224nm；進(jìn)樣量：10μL。

2.2 樣品制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取特女貞苷對(duì)照品33.74mg，置100mL容量瓶中，加50%乙醇使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液儲(chǔ)備液(質(zhì)量濃度:0.3283mg/mL)，精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液5mL，置10mL容量瓶中，加50%乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品使用液(質(zhì)量濃度:0.1642mg/mL) 。

2.2.2 供試品溶液的制備 取貞芪扶正膠囊10粒，混勻，稱(chēng)取約0.5g(相當(dāng)于1.5粒的樣品)，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%乙醇50mL，密塞，稱(chēng)定重量，加熱回流1h，放冷，再稱(chēng)定重量，用50%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，即得供試品溶液。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備 按處方比例及制法，制得除女貞子的陰性樣品。按2.2.2項(xiàng)下方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 線(xiàn)性關(guān)系考察 取2.2.1項(xiàng)下的對(duì)照品使用液, 用0.45μm的微孔濾膜濾過(guò)。分別精密吸取濾液2、4、6、8、10、15、20、30μL進(jìn)樣，記錄峰面積。以特女貞苷的進(jìn)樣量(x)為橫坐標(biāo)，峰面積(y)為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線(xiàn)性回歸，回歸方程為y=1524503.7x-38125.1，r=1.0000(n=8)。結(jié)果表明，特女貞苷的進(jìn)樣量在0.3283～4.9244μg的范圍內(nèi)與對(duì)應(yīng)峰面積呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。特女貞苷對(duì)照品、供試品及陰性對(duì)照的色譜圖見(jiàn)圖1。

2.3.2 精密度考察 精密吸取2.2.1項(xiàng)下經(jīng)0.45 μm的微孔濾膜濾過(guò)的對(duì)照品溶液10μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果，RSD為0.68%(n=6)。表明儀器精密度良好。

2.3.3 專(zhuān)屬性考察 吸取2.2.3項(xiàng)下的陰性樣品溶液，用0.45μm的微孔濾膜濾過(guò)，精密吸取10 μL，注入液相色譜儀，結(jié)果陰性對(duì)照在與對(duì)照品保留時(shí)間相應(yīng)位置上，沒(méi)有相應(yīng)的色譜峰，表明陰性對(duì)照不干擾測(cè)定。

2.3.4 重復(fù)性考察 取同一批樣品(批號(hào)：160422)6份，按2.2.2項(xiàng)下制備，測(cè)定特女貞苷的含量，其含量的RSD為0.53%。

2.3.5 穩(wěn)定性考察 取2.2.2項(xiàng)下制備的同一樣品,分別在0、2、4、8、16、24、36h時(shí)進(jìn)樣10 μL，記錄峰面積。結(jié)果，RSD為0.83%(n=7)。表明樣品36h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.6 加樣回收率考察 取已測(cè)定含量的貞芪扶正膠囊 (批號(hào)：160422)6份，每份約0.25g，精密稱(chēng)定，精密加入特女貞苷對(duì)照品儲(chǔ)備液10mL，再精密加入50%乙醇40mL，按2.2.2項(xiàng)下操作。測(cè)得特女貞苷的加樣回收率見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果 (n=6)

2.3.7 樣品測(cè)定結(jié)果 取3批貞芪扶正膠囊，按2.2.2項(xiàng)下的方法操作，測(cè)定含量。結(jié)果見(jiàn)表2。

3 討論

3.1 樣品提取方法的選擇 參考中國(guó)藥典[17]及相關(guān)文獻(xiàn)[18-23]，對(duì)用不同濃度的甲醇(50%、75%、100%)和乙醇(50%、75%、100%)作為提取溶劑，超聲和回流兩種提取方法，以及在以上基礎(chǔ)上提取時(shí)間(30、45min，1、2h)上進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)用50%的乙醇回流提取1h效果最好。從而確定用50%的乙醇回流提取1h為本試驗(yàn)的提取方法。

3.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 取特女貞苷對(duì)照品溶液在200～500nm范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描，特女貞苷在224nm處有最大吸收。并考照中國(guó)藥典[17]及文獻(xiàn)[19-23]，將檢測(cè)波長(zhǎng)定為224nm。

3.3 流動(dòng)相的選擇 參考中國(guó)藥典[17]及文獻(xiàn)[19-21]，把流動(dòng)相初步定為甲醇-水(40∶60)，但分離效果一般，對(duì)流動(dòng)相比例進(jìn)行反復(fù)調(diào)整，當(dāng)流動(dòng)相比例為甲醇-水(36∶64)時(shí)，分離良好，所以本實(shí)驗(yàn)的流動(dòng)相最終為甲醇-水(36∶64)。

綜上，該方法專(zhuān)屬性強(qiáng)、精密度高、分離度好，可用于測(cè)定貞芪扶正膠囊中特女貞苷的含量。

[1]李建芬.中藥女貞子研究進(jìn)展[J].內(nèi)蒙古中醫(yī)藥,2012,31(16):45.

[2]呂娟濤,湯浩.女貞子多糖對(duì)肝損傷保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志,2010,30(12):1024-1025.

[3]黃曉君,殷志琦,葉文才,等.女貞子的化學(xué)成分研究[J].中國(guó)中藥雜志,2010,35(7):861-864.

[4]張明發(fā),沈雅琴.女貞子及其有效成分的保肝作用研究進(jìn)展[J].藥物評(píng)價(jià)研究,2016,27(3):280-284.

[5]張明發(fā),沈雅琴.女貞子抗炎、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)作用的研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代藥物與臨床,2012,27(5):536-542.

[6]車(chē)德亞,陳林.女貞子化學(xué)成分及其藥理研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué),2009,35(5):323.

[7]馬莉,蔡?hào)|聯(lián)，黎懷星,等.紅景天苷對(duì)疲勞小鼠氧化損傷的保護(hù)作用[J].中西醫(yī)結(jié)合學(xué)報(bào),2009,7(3):237-241.

[8]高大威,李青旺,劉志偉,等.女貞子中齊墩果酸抗糖尿病效果研究[J].中成藥,2009,31(10):1619-1621.

[9]孫雅文,張明發(fā),沈雅琴.女貞子及其活性成分降血糖、調(diào)血脂、抗肥胖作用研究進(jìn)展[J].藥物評(píng)價(jià)研究,2016,39(6):1086-1090.

[10]程敏,胡正海.女貞子的生物學(xué)和化學(xué)成分研究進(jìn)展[J].中草藥,2010,41(7):1219-1221.

[11]吳林蔚,蒲薔,陳曉珍,等.齊墩果酸對(duì)卵巢癌細(xì)胞IGROV1和乳腺癌細(xì)胞 MDA-MB-231生長(zhǎng)的抑制作用[J].應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報(bào),2010,16( 2):202.

[12]王陽(yáng)陽(yáng),馮清清,武蓉,等.女貞子多糖的提取工藝及其體外抗氧化活性研究[J].農(nóng)產(chǎn)品加工,2012,4(9):41-44.

[13]李璘,邱蓉麗,樂(lè)巍,等.女貞子多糖對(duì)淋巴瘤細(xì)胞膜抗原性的影響[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào),2010,26(10):1350 -1353.

[14]駱蓉芳,高昂,鞏江,等.女貞子抑菌活性研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2011,39(11):6386-6387.

[15]張明發(fā),沈雅琴.齊墩果酸和熊果酸的抗炎及其抗變態(tài)反應(yīng)[J].抗感染藥學(xué),2011,8(4):235.

[16]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn):中藥成方制劑第十七冊(cè)[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，1998:111.

[17]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[S].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2015:45-46.

[18]郭宇潔,任燁,葛爭(zhēng)艷,等.正交試驗(yàn)法比較女貞子中齊墩果酸與特女貞苷的乙醇提取工藝[J].中成藥,2013,35(2):137-141．

[19]劉宏明,劉昱霞,徐楠楠．HPLC測(cè)定六味五靈片中特女貞苷的含量[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2013,19(5):147-148．

[20]林偉鑫,李勇,吉國(guó)輝,等.HPLC 法測(cè)定調(diào)脂膠囊中特女貞苷的含量[J].中國(guó)腫瘤生物治療雜志,2015,42(3):564-565．

[21]劉俊有,慕楊娜,季雪,等.高效液相色譜法測(cè)定貞芪扶正顆粒特女貞苷含量[J].實(shí)用中醫(yī)內(nèi)科雜志,2015,29(3):135-136．

[22]商桂春,袁大鵬,劉海濱.HPLC測(cè)定女珍顆粒中特女貞苷的含量[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2013,19(4):153-155.

[23]崔恩忠,唐安福,劉文雅,等.高效液相色譜法測(cè)定益腎丸中特女貞苷的含量[J].醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào),2015,28(1):79-81．

Determination of Specnuezhenide in Zhenqifuzheng Capsule by HPLC

YANG Liyong

Qujing Center for Food and Drug Control of Yunnan，Qujing 655000，China

Objective To develop a High Performance liquid chromatography (HPLC) method for the determination of Specnuezhenide in Zhenqifuzheng capsule. MethodS Separation was performed at 25°C on a Thermo SCIENTIFIC Hypersil GOLD C18column (4.6mm×250mm, 5μm) using methanol and water (36∶64) as mobile phase which was delivered at 1.0 mL·min-1. Ultraviolet detection was performed at 224nm. Results The linear range of Specnuezhenide were 0.328 3～4.924 4μg(r=1.0000,n=8)with an average recoveryof 100.8%(RSD=0.67%，n=6). TheRSDof precision， stability and reproducibility tests were lower than 1.0%. Conclusion The method was strong specificity, high precision and with good separation which can be applied in content determination for Specnuezhenide of Zhenqifuzheng capsule.

HPLC；Zhenqifuzheng Capsule；Specnuezhenide；Determination

楊立勇(1974-)，男，本科，主管藥師，研究方向?yàn)槭称匪幤窓z驗(yàn)檢測(cè)、食品安全項(xiàng)目管理。E-mail:2443390891@qq.com

R282

A

1007-8517(2017)14-0044-03

2017-05-18 編輯：程鵬飛)