張子榮，馬長賓，崔 蕾，魯立柱

（1.新疆建設(shè)兵團第六師五家渠市畜牧獸醫(yī)工作站，五家渠 831300；2.天康生物股份有限責(zé)任公司，新疆 烏魯木齊 830032）

羔羊小反芻獸疫母源抗體消長規(guī)律

張子榮1，馬長賓1，崔 蕾1，魯立柱2

（1.新疆建設(shè)兵團第六師五家渠市畜牧獸醫(yī)工作站，五家渠 831300；2.天康生物股份有限責(zé)任公司，新疆 烏魯木齊 830032）

為合理制定羔羊小反芻獸疫（PPR）的免疫程序，采用中和試驗研究了羔羊母源抗體消長規(guī)律。結(jié)果表明：羔羊出生后7～45 d血清抗體水平較高（抗體效價≥1∶40血清比例均大于80%），抗體保護率達90%以上，其中7～14 d血清抗體水平最高（抗體效價≥1∶40血清比例均大于90%），抗體保護率達100%。14 d以后血清抗體水平開始降低，90 d時血清抗體保護率降到了60%。對于經(jīng)免場PPR的最佳免疫時間應(yīng)選擇在斷奶后30日齡左右，即60日齡斷奶，90日齡免疫；90日齡斷奶，120日齡免疫。

羔羊；PPR；母源抗體；消長規(guī)律

小反芻獸疫（PPR），又稱羊瘟，是由PPR病毒（PPRV）引起的山羊、綿羊、野生小反芻獸的高度接觸性傳染病，以發(fā)熱、口炎、腹瀉、肺炎為特征［1］。易感羊群發(fā)病率可高達90%～100%，在嚴(yán)重情況下病死率高達100%［2］。目前，PPR無特效治療藥物，疫苗免疫接種是最有效的防控措施［3］。羔羊出生后通過吮吸母乳可以獲得母源抗體。母源抗體的存在，可使羔羊在一定時間內(nèi)被動地得到保護，但又給免疫接種帶來影響。羔羊母源抗體水平過高，接種PPR疫苗，則疫苗會被母源抗體所中和，使羔羊不產(chǎn)生抗體或產(chǎn)生的抗體水平較低，得不到應(yīng)有的保護；母源抗體過低時接種疫苗，則羔羊在免疫空白期易受環(huán)境中PPRV的侵襲。因此，研究羔羊小反芻獸疫母源抗體消長規(guī)律就顯得很有必要。鑒此，本研究通過中和試驗對羔羊血清PPR抗體水平進行了監(jiān)測，分析羔羊PPRV母源抗體消長規(guī)律，以確定最佳首免時機，為合理制訂小反芻獸疫免疫程序提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試羊 供試羊為第六師102團某羊場同期分娩的20只經(jīng)產(chǎn)湖羊（配種前皮下注射1頭份小反芻獸疫活疫苗）所產(chǎn)的22只羔羊，在48 d時，由于2只羔羊出現(xiàn)腹瀉癥狀，將其移出試驗羊群。

1.1.2 檢測試劑 檢驗用抗原（抗原批號：20161000）由天康生物股份有限責(zé)任公司生產(chǎn)部生產(chǎn)，質(zhì)檢部標(biāo)定；檢驗用陰、陽性標(biāo)準(zhǔn)血清由質(zhì)檢部制作、標(biāo)定；Vero傳代細胞，購自中國獸藥監(jiān)察所，由質(zhì)檢部保存。

1.2 方法

（1）將小反芻獸疫Clone9株病毒液用無血清MEM細胞培養(yǎng)液稀釋成102.0 TCID50/0.1mL。

（2）將被檢羊血清、陽性對照血清、陰性對照血清在56℃水浴滅能30min。

（3）將陰性血清用無血清MEM細胞培養(yǎng)液進行1∶2、1∶4、1∶8稀釋，將被檢羊血清和陽性對照血清先進行1∶5稀釋，再進行2倍系列稀釋，將各稀釋度被檢血清及陽性和陰性對照血清分別加入96孔細胞培養(yǎng)板，每個稀釋度接種5孔，每孔0.1mL。

（4）同時設(shè)立病毒回歸對照，即將100 TCID50/0.1mL病毒工作液用無血清MEM細胞培養(yǎng)液10倍系列稀釋成10TCID50/0.1mL、1TCID50/0.1mL、0.1TCID50/0.1mL，取病毒工作液和3個稀釋度病毒液，每個病毒液接種5孔，每孔0.1mL。

（5）向所有血清孔加入100 TCID50/0.1mL病毒工作液0.1mL，向細胞對照孔加入0.2mL無血清MEM細胞培養(yǎng)液，向病毒對照孔中加入0.1mL無血清MEM細胞培養(yǎng)液，37℃作用1 h。

（6）向所有孔加入濃度為20萬～30萬/mL的Vero細胞懸液0.1mL，置37℃、5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)6 d，期間每日觀察細胞病變。

（7）試驗結(jié)果判定：10 TCID50以上病毒對照及陰性血清對照孔均應(yīng)出現(xiàn)小反芻獸疫病毒特有的細胞融合等細胞病變，1 TCID50病毒對照部分孔出現(xiàn)細胞病變，0.1 TCID50病毒對照、陽性血清對照1∶160稀釋度以下細胞孔和細胞對照孔應(yīng)不出現(xiàn)細胞病變。記錄被檢血清各稀釋度細胞病變孔數(shù)，以5個試驗孔均未出現(xiàn)細胞病變的血清最高稀釋度為中和抗體效價。血清效價≥1∶10，判為抗體陽性。

2 結(jié)果與分析

2.1 羔羊小反芻獸疫母源抗體效價檢測結(jié)果

從表1可以看出，羔羊出生后7～45 d血清抗體水平較高（抗體效價≥1∶40血清比例均大于80%），抗體保護率達90%以上，其中7～14 d血清抗體水平最高（抗體效價≥1∶40血清比例均大于90%），抗體保護率達100%。14 d以后血清抗體水平開始降低，90 d時血清抗體保護率降到了60%，特別是60 d后羔羊血清抗體水平下降較快，可能與該羊場羔羊在60日齡斷奶有關(guān)。

表1 羔羊中和試驗血清檢測結(jié)果

2.2 羔羊小反芻獸疫母源抗體水平動態(tài)變化

如圖1所示，羔羊吮乳后母源抗體平均效價逐漸升高，在14日齡時達到高峰，以后逐漸下降。如圖2所示，羔羊母源抗體保護率7日齡時達到峰值（100%），14日齡以后開始緩慢下降，60日齡以后下降幅度較大，90日齡時已降至60%。

圖1 羔羊小反芻獸疫母源抗體平均效價變化圖

圖2 羔羊小反芻獸疫母源抗體保護率變化圖

3 討論

OIE將PPR列為法定報告動物疫病，我國將其列為一類動物疫病，《國家中長期動物疫病防治規(guī)劃（2012—2020年）》將其列為重點防范的13種外來動物疫病之一。PPR作為一種重大動物疫病，嚴(yán)重威脅我國的動物衛(wèi)生安全和畜牧業(yè)的發(fā)展，為了有效預(yù)防、控制和消滅PPR，我國采用了大規(guī)模的免疫策略，而免疫方案及免疫評估的完善則是當(dāng)前防控PPR的重要手段。

首免日齡的選擇對免疫效果有著重要影響。徐雅萍等［4］的研究結(jié)果表明，湖羊在90日齡以后免疫PPR的效果明顯優(yōu)于90日齡之前。本研究結(jié)果顯示，60日齡（斷奶）后羔羊血清母源抗體水平下降較快，90日齡時血清抗體保護率降到了60%，說明斷奶時間與母源抗體水平下降快慢有關(guān)。國內(nèi)外相關(guān)報道顯示，PPR母源抗體在羔羊3～4月齡下降到保護水平以下［5-6］。因此，本試驗分析認(rèn)為90日齡以前羔羊受母源抗體影響，母源抗體對疫苗抗原有部分中和作用，如果在羔羊PPR母源抗體水平較高的時候接種活疫苗，不但不能激發(fā)機體產(chǎn)生保護抗體，反而會使機體內(nèi)抗體水平更低。所以，對于經(jīng)免場PPR的最佳免疫時間應(yīng)選擇在斷奶后30日齡（60日齡斷奶，90日齡免疫；90日齡斷奶，120日齡免疫）左右，過早很有可能會造成免疫失敗，過晚則抗體空檔期太長，增加感染風(fēng)險。

評價PPR抗體保護力分群體和個體，群體用抗體保護率（≥70%）表示，個體用抗體效價（≥1∶10）表示。本試驗結(jié)果表明，羔羊出生后7～45 d血清抗體水平較高（抗體效價≥1∶40血清比例均大于80%），抗體保護率達90%以上；羔羊出生后60 d時，抗體效價≥1∶40血清比例僅為50%（10/20），抗體保護率85%；羔羊出生后90 d時，抗體效價≤1∶10血清比例上升為40%（8/20），而抗體效價≥1∶40血清比例降為0%，抗體保護率降至60%。說明中和試驗抗體效價高低與群體抗體保護率呈正比。

綜上所述，羔羊PPR免疫日齡應(yīng)根據(jù)羔羊母源抗體的消長規(guī)律及抗體監(jiān)測結(jié)果確定。在羔羊母源抗體降低到保護的最低臨界值（抗體效價在1∶10時;群體保護率在70%以下）時進行首免是合理的，這樣，既能避免母源抗體的干擾，又能避免出現(xiàn)免疫空白期。

［1］ 李景玉，高玉竹，李元果，等.小反芻獸疫研究進展［J］.中國畜牧獸醫(yī)，2014，41（10）：274-279.

［2］ 宋建德，袁麗萍，劉陸世，等.全球小反芻獸疫流行狀況和防控策略［J］.中國動物檢疫，2015，32（7）：8-12.

［3］ 信愛國，楊仁標(biāo)，向文彬.小反芻獸疫研究進展［J］.中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報，2003，25（2）：152-154.

［4］ 徐雅萍，邱寒峰，俞乾挺，等.小反芻獸疫疫苗對不同日齡湖羊的免疫效果研究［J］.中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報，2016，38（8）：646-648.

［5］ Bodjo SC，Couacyhymann E，KoffiM Y，et al.Assessmentof the duration ofmaternal antibodies specific to the homologous peste des petits ruminant vaccine“Nigeria 75/1”in Djallonkélambs［J］. Biokemistri，2006，18（2）：99-103.

［6］ Balamurugan V，Sen A，Venkatesan G，etal.Study on passive immunity：Time of vaccination in kids born to goats vaccinated against Peste despetits ruminants［J］.Virol Sin，2012，27（4）：228-233.

S826.7

A

2095-3887（2017）04-0043-03

10.3969/j.issn.2095-3887.2017.04.012

2017-04-19

2015年農(nóng)六師五家渠市科技計劃和重大科技專項計劃項目（1515號）

張子榮（1980-），男，獸醫(yī)師，本科，主要從事動物疫病監(jiān)測與防治研究。

馬長賓（1982-），男，獸醫(yī)師，碩士，主要從事動物疫病監(jiān)測與防治研究。