余曉完 高 戈 黃東紅 蔡俊峰 袁 衡 吳 翔

(福建醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院檢驗(yàn)科，福建 泉州 362000)

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老年胃癌組織中表皮生長因子受體、人類表皮生長因子受體2及基質(zhì)金屬蛋白酶7的表達(dá)及其相關(guān)性

余曉完 高 戈1黃東紅 蔡俊峰 袁 衡2吳 翔3

(福建醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院檢驗(yàn)科，福建 泉州 362000)

目的 探討老年胃癌組織中表皮生長因子受體(EGFR)、人類表皮生長因子受體(HER)2及基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)7的表達(dá)及相關(guān)性。方法 選擇行手術(shù)治療的100例胃癌患者的胃癌組織蠟塊標(biāo)本，從100例胃癌組織蠟塊標(biāo)本上隨機(jī)抽取50例，提取其癌旁組織作為癌旁對照組。比較EGFR、HER2、MMP7在胃癌組和癌旁組織的關(guān)系，并記錄其和常見臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。結(jié)果 在胃癌組織中EGFR、HER2、MMP7的陽性表達(dá)率明顯比癌旁組織高(P<0.05)；EGFR、HER2、MMP7在胃癌組織中的表達(dá)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、不同浸潤程度、不同分化程度之間具有顯著差異(P<0.05)；在胃癌組織中，EGFR、HER2、MMP7的表達(dá)均呈現(xiàn)正相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論 EGFR、HER2、MMP7和老年胃癌中許多臨床病理特征之間存在著密切的關(guān)系，且三者呈協(xié)同作用，可作為對病情的診斷、治療、預(yù)后提供參考依據(jù)。

表皮生長因子受體；人表皮生長因子受體-2；基質(zhì)金屬蛋白酶7；胃癌

胃癌具有臨床癥狀晚、進(jìn)展速度快、生存率低的特點(diǎn)。研究指出，該病在65歲后的人群中發(fā)病呈明顯升高的趨勢。胃癌在發(fā)生和發(fā)展過程中屬一個(gè)多階段、多因素的過程，其中涉及多種分子、多個(gè)基因的水平變化，而表皮生長因子受體(EGFR)、人類表皮生長因子受體(HER)2作為胃癌靶向治療的靶點(diǎn)和化療耐藥的相關(guān)基因，在臨床上較為常見〔1〕。但仍有研究提出疑問，在腫瘤的分化程度、浸潤程度、是否轉(zhuǎn)移和胃癌患者的預(yù)后是否存在著相關(guān)性，而在腫瘤和浸潤和轉(zhuǎn)移中是否會存在細(xì)胞外基質(zhì)蛋白的破壞〔2〕。近年研究發(fā)現(xiàn)，基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)在降解細(xì)胞外基質(zhì)蛋白中是最主要的蛋白水解酶〔3〕。本研究旨在探討老年胃癌組織中EGFR、HER2、MMP7的表達(dá)及其相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2014年3月至2016年3月福建醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院行手術(shù)治療的100例老年胃癌患者的胃癌組織蠟塊標(biāo)本。其中，男69例，女31例，年齡52～81〔平均(67.43±1.39)〕歲，從100例胃癌組織蠟塊標(biāo)本上隨機(jī)抽取50例，提取其癌旁組織(距癌旁組織5 cm以上)作為癌旁對照組。對照組男30例，女20例，年齡51～79〔平均(67.31±1.45)〕歲?；颊咴谑中g(shù)前均未進(jìn)行化、放療治療。

1.2 方法 試劑：鼠抗人MMP7單克隆抗體，克隆號LW29；鼠抗人EGFR單克隆抗體，克隆號31G7；鼠抗人HER2單克隆抗體，克隆號B68；所使用的試劑盒以及二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色試劑盒均購于北京中杉生物技術(shù)有限公司。

所有標(biāo)本先進(jìn)行蘇木素-伊紅(HE)染色病理形態(tài)學(xué)觀察，之后進(jìn)行病例回顧。標(biāo)本在手術(shù)切除0.5 h后進(jìn)行采集，使用10%甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，4 μm連續(xù)切片，進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，操作方式嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行，使用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對照，已知切片為陽性對照。EFGR陽性表達(dá)判定：EFGR蛋白主要定位在細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)中，顏色呈棕褐色，隨機(jī)選擇5個(gè)高倍視野(×400)計(jì)數(shù)，-表示陽性細(xì)胞<10%，+表示10%～20%，表示21%～40%，表示>40%，結(jié)果為和時(shí)則判定為陽性表達(dá)。HER2陽性表達(dá)判定：HER2主要定位在細(xì)胞膜，顏色呈棕褐色，-表示細(xì)胞膜未著色或陽性細(xì)胞數(shù)<10%，+表示細(xì)胞膜不完整且陽性細(xì)胞數(shù)≥10%，表示細(xì)胞膜完整輕至中度且陽性細(xì)胞數(shù)≥10%，表示細(xì)胞膜完整強(qiáng)染色且陽性細(xì)胞數(shù)≥10%，結(jié)果為和時(shí)則判定為陽性表達(dá)。MMP7陽性表達(dá)判定：MMP7定位在細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核中，顏色呈淡黃色至棕褐色顆粒，依照細(xì)胞染色強(qiáng)度以及陽性細(xì)胞面積判斷，細(xì)胞染色強(qiáng)度根據(jù)無著色0分、淡黃色1分、棕黃色2分、棕褐色3分，陽性細(xì)胞面積根據(jù)0%計(jì)0分、1%～25%計(jì)1分、26%～50%計(jì)2分、51%～75%計(jì)3分、76%～100%計(jì)4分，統(tǒng)計(jì)兩項(xiàng)結(jié)果。0分表示陰性-，≤3分表示陽性(+)，3～6分表示中度陽性()，≥6分表示強(qiáng)陽性()。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS18.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)、χ2檢驗(yàn)、Spearman等級相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1 胃癌組織與癌旁組織中EGFR、HER2、MMP7表達(dá)比較 在胃癌組織中EGFR、HER2、MMP7的陽性表達(dá)率〔49例(49.00%)、54例(54.00%)、73例(73.00%)〕明顯比癌旁組織〔1例(2.00%)〕、1例(2.00%)、2例(4.00%)高(χ2=33.135,38.813,76.842；均P=0.000)。

2.2 胃癌組織中EGFR、HER2、MMP7和臨床病理參數(shù)的關(guān)系 EGFR、HER2、MMP7和性別、年齡之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，在胃癌組織中的表達(dá)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、不同浸潤程度、不同分化程度之間具有顯著差異(P<0.05)。見表1。

2.3 EGFR、HER2、MMP7相關(guān)性分析 在胃癌組織中，EGFR、HER2、MMP7的表達(dá)均呈現(xiàn)正相關(guān)(rEGFR-MMP7=0.504,rHER2-MMP7=0.658,rHER2-EGFR=0.673,均P<0.01)。

表1 胃癌組織中EGFR、HER2、MMP7和臨床病理參數(shù)的關(guān)系〔n(%)〕

3 討 論

老年胃癌中，多以男性為主，其和男性長期吸煙、飲酒有關(guān)，且老年人臟器功能多呈衰退狀態(tài)，合并疾病較多，在治療上較為復(fù)雜，早期胃癌的生存率較高，可達(dá)90%，但是進(jìn)展期胃癌在5年內(nèi)的生存率卻僅有30%，甚至更低〔4〕。

EGFR是原癌基因C-erbB-1的表達(dá)產(chǎn)物，在腫瘤細(xì)胞的黏附、增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移、腫瘤細(xì)胞凋亡之間均發(fā)揮著作用，而HER2和EGFR之間存在著大約50%的同源性，均可接受EGFR樣物質(zhì)的信息，促進(jìn)細(xì)胞增殖，且具有酪氨酸激酶活性。有較多臨床報(bào)道顯示，在多種惡性腫瘤中，均發(fā)生著EGFR、HER2基因的異常擴(kuò)增，并且和不良預(yù)后之間關(guān)系密切〔5〕。Lu等〔6〕研究顯示，和鄰近的正常胃黏膜組織相比，在胃癌組織中EGFR的表達(dá)有所增加，而其主要多見在浸潤程度深、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性、未分化癌以及進(jìn)展期癌。Kanayama等〔7〕研究稱，HER2在胃癌組織中過度表達(dá)，提示患者的腫瘤惡性程度更高、侵襲、浸潤、復(fù)轉(zhuǎn)移的能力更強(qiáng)，并和腫瘤位置、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分化之間存在相關(guān)性。而組織分化、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移在胃癌侵襲轉(zhuǎn)移因素，可作為反映胃癌進(jìn)展、患者預(yù)后中的相關(guān)指標(biāo)〔8〕。而在本次研究中也支持這一論證。

腫瘤的發(fā)生和發(fā)展是一個(gè)十分復(fù)雜的過程，其最重要的生物學(xué)特征為轉(zhuǎn)移和浸潤，但其過程中的機(jī)制在臨床上尚未得到明確的闡明，MMP主要是通過在細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜中產(chǎn)生降解，從而在腫瘤的浸潤、轉(zhuǎn)移中產(chǎn)生著重要的作用〔9〕。有研究指出，在腫瘤細(xì)胞中，首先需有降解細(xì)胞外基質(zhì)、基底膜的功能，然后通過已經(jīng)存在或者重新形成的結(jié)合位點(diǎn)，和細(xì)胞外基質(zhì)相互結(jié)合，從而對細(xì)胞外基質(zhì)進(jìn)行溶解，隨后向外擴(kuò)散，在鄰近組織和遠(yuǎn)處器官發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移〔10〕。MMP7基因主要在11q21-q22存在，cDNA全場為1 094 bp，該物質(zhì)主要是通過癌細(xì)胞以無活性的形式進(jìn)行分泌〔11〕。無活性的MMP7在癌組織中，可被MMP3以及胰蛋白酶在內(nèi)的多種蛋白酶進(jìn)行有效激活，激活之后的MMP7具有較為廣泛的蛋白水解活性，MMP7的作用底物主要包括糖蛋白和蛋白多糖。本研究結(jié)果中顯示，在胃癌組織中，MMP7的陽性表達(dá)高達(dá)73.00%，顯示出其與胃癌存在著明顯的關(guān)系，而在經(jīng)過和常見臨床病理參數(shù)的進(jìn)一步分析結(jié)果中顯示出，MMP7與胃癌患者的性別、年齡之間無明顯的相關(guān)性，而和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、不同浸潤程度、不同分化程度之間存在關(guān)系，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤程度侵及漿膜層、漿膜外以及低、未分化的胃癌組織，其陽性表達(dá)率更高。通過分析可能是由于在腫瘤組織中所形成的特殊微環(huán)境，促使利于腫瘤進(jìn)展的細(xì)胞印祖、酶類發(fā)生過表達(dá)或者減少表達(dá)，例如MMPs家族、FGF、VEGF等，更利于腫瘤生成。Ye等〔12〕研究顯示，MMP7和胃癌的分化程度、臨床分期之間存在著密切的關(guān)系，在基因水平的角度證實(shí)MMP7在胃癌組織中的侵襲和轉(zhuǎn)移中有所參與。

在癌細(xì)胞的增殖過程中，存在不同生長因子的信號通路參與，對單獨(dú)一個(gè)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的觀察在分析腫瘤情況上可能只會得到片面的結(jié)論，而聯(lián)合分析具有積極的臨床意義。本研究結(jié)果表明EGFR、HER2、MMP7在胃癌的發(fā)生、發(fā)展過程中存在著相互協(xié)同的作用。通過分析可能是由于EGFR和HER2分子同是生長因子家族，兩者之間的蛋白結(jié)構(gòu)、功能相似，而EGFR、HER2和MMP7之間的關(guān)系臨床上仍需要作進(jìn)一步的研究。

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〔2017-03-15修回〕

(編輯 袁左鳴)

湖南省自然科學(xué)基金(No.2015JJ4073)

高 戈(1978-)，男，博士，副教授，主要從事臨床免疫學(xué)診斷研究。

余曉完(1984-)，女，碩士，主管檢驗(yàn)師，主要從事分子生物學(xué)研究。

R73

A

1005-9202(2017)14-3492-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.14.050

1 中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院檢驗(yàn)系

2 長沙醫(yī)學(xué)院組織學(xué)與胚胎學(xué)教研室 3 海南省中醫(yī)院檢驗(yàn)科