楊學(xué)芬 陸曉珊

云南省迪慶州食品藥品檢驗(yàn)所，云南 香格里拉 674499

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HPLC法測(cè)定三九胃泰顆粒中氯化兩面針堿的含量

楊學(xué)芬 陸曉珊

云南省迪慶州食品藥品檢驗(yàn)所，云南 香格里拉 674499

目的：建立高效液相色譜法測(cè)定三九胃泰顆粒中氯化兩面針的含量的方法。方法：采用 Agilent 5 TC-C18(4.6mm×250.0mm)色譜柱為分析柱；采用流動(dòng)相A:乙睛；B:0.2%的甲酸-三乙胺溶液(25∶75)，進(jìn)行洗脫；流速為1 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為271nm；柱溫25 ℃；采用70%甲醇超聲提取。結(jié)果：氯化兩面針堿回歸方程：Y=1316.9176X-0.5712，r=0.9999，在 0.0600～0.5997μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均回收率為99.88%，RSD=0.50%。結(jié)論：該方法簡(jiǎn)單準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于三九胃泰顆粒中氯化兩面針堿的含量測(cè)定。

高效液相色譜法；三九胃泰顆粒；氯化兩面針堿

三九胃泰顆粒其主要由三叉苦、九里香、黃芩、兩面針、木香、茯苓、白芍、地黃等藥物[1]組成，具有清熱燥濕、行氣活血、柔肝止痛的功效。臨床主要用于濕熱內(nèi)蘊(yùn)、氣滯血瘀所致的胃痛，癥見脘腹隱痛、飽脹反酸、惡心嘔吐、嘈雜納減；淺表性胃炎、糜爛性胃炎、萎縮性胃炎等見上述癥候者[2]。兩面針為三九胃泰制劑的主要原料，其性平，味苦、辛，有小毒，歸肝、胃經(jīng)，具有活血化瘀、行氣止痛、祛風(fēng)通絡(luò)、解毒消腫等功能，用于跌打損傷，胃痛，牙痛，風(fēng)濕痹痛，蛇毒咬傷[3-4]；外治燒燙傷。藥理研究證實(shí)[3]，兩面針?biāo)幚碜饔脧V泛，具有鎮(zhèn)痛、抗炎、鎮(zhèn)靜、抗氧化、抗癌、抗菌、抗胃潰瘍、對(duì)心肌缺血再灌注的保護(hù)等作用。而氯化兩面針堿是兩面針的主要有效成分之一[5-6]，其具有很好的抗腫瘤活性，在體外能顯著抑制鼻咽癌、口腔鱗癌、肺癌等細(xì)胞的增殖[5]，通常作為兩面針的質(zhì)量控制指標(biāo)。2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》一部對(duì)三九胃泰顆粒中兩面針采用的是薄層色譜法對(duì)其進(jìn)行定性鑒別[2]。筆者采用高效液相色譜法測(cè)定三九胃泰顆粒中氯化兩面針堿的含量，以此控制該制劑中氯化兩面針堿的含量，并對(duì)該方法進(jìn)行了驗(yàn)證。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent1260高效液相色譜儀(美國(guó)安捷倫公司)；UV-2250紫外-可見分光光度計(jì)(日本島津)；T-214 電子天平(美國(guó)，賽多利斯)；SB-5200 DTD 超聲波清洗機(jī)(賽飛中國(guó)，Biosafer)；GM-0.33A隔膜真空泵(天津津騰)。

1.2 試藥 氯化兩面針堿對(duì)照品(批號(hào)：B20783-20，上海源葉生物科技有限公司)；甲醇、乙腈、磷酸、三乙胺均為色譜純(美國(guó)TEDIA)，水為娃哈哈純化水。三九胃泰顆粒某醫(yī)藥公司生產(chǎn)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Agilent 5 TC-C18(250mm×4.6mm)； 以乙腈為流動(dòng)相A，以0.2%甲酸-三乙胺為流動(dòng)相B(25∶75)進(jìn)行洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)271nm；流速1mL/min；柱溫25℃；進(jìn)樣量10μL。

2.2 對(duì)照品溶液制備 精密稱取氯化兩面針堿對(duì)照品15.30mg，置50mL量瓶中，加甲醇適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備溶液(含氯化兩面針堿299.88μg·mL-1)，精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備溶液3mL，置50mL量瓶中，加70%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得(每1mL含氯化兩面針堿17.99μg)。

2.3 供試品溶液的制備 取裝量差異項(xiàng)下內(nèi)容物混勻、研細(xì)，精密稱取0.3g，置50mL量瓶中，加70%甲醇適量，超聲處理(功率250W，頻率40kHz)30min，放冷，加70%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 陰性樣品溶液制備 取處方中除兩面針?biāo)幉耐獾脑o料，按處方劑量、制法和工藝要求制備缺兩面針?biāo)幉牡目瞻讟悠罚凑?.3供試品溶液的制備方法進(jìn)行處理即得陰性樣品溶液。

2.5 專屬性試驗(yàn) 按上述色譜條件，分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液各10μL，注入液相色譜儀測(cè)定，結(jié)果供試品色譜圖中呈現(xiàn)與對(duì)照品保留時(shí)間一致的色譜峰，陰性樣品在與氯化兩面針堿對(duì)照品相同的保留時(shí)間處未顯色譜峰。可見其他原輔料對(duì)氯化兩面針堿峰無干擾。對(duì)照品、樣品與陰性樣品色譜圖見圖1～3。

2.6 線性關(guān)系考察 分別精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備溶液1.0、2.0、3.0、4.0、6.0、8.0、10.0mL置50mL量瓶中，加70%甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為6.00、12.00、17.99、23.99、35.99、47.98、59.97μg·mL-1的溶液，作為對(duì)照品系列溶液。按上述色譜條件，分別吸取10μL注入液相色譜儀中進(jìn)行測(cè)定，以對(duì)照品進(jìn)樣量μg為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行線性回歸，其回歸方程為：Y=1316.9176X-0.5712,r=0.9999。結(jié)果表明對(duì)照品進(jìn)樣量在 0.0600～0.5997μg·mL-1范圍內(nèi)呈現(xiàn)線性關(guān)系良好。結(jié)果見表1。

表1 線性關(guān)系考察

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品(批號(hào)1601039F)溶液6份，按上述色譜條件，分別于室溫放置0、2、4、6、8、12h后測(cè)定其峰面積分別為225.55、224.60、221.08、222.52、226.65、223.48，平均峰面積為223.98，在0～12h氯化兩面針堿的峰面積的RSD為0.91% 表明供試品溶液于室溫放置12h內(nèi)穩(wěn)定性較好。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)的樣品(批號(hào)：1603056F)，按含量測(cè)定方法，分別制備6份供試品溶液，測(cè)得氯化兩面針堿平均含量為2.92mg/g，RSD=0.77%，結(jié)果表明此方法重復(fù)性良好。結(jié)果見表2。

表2 氯化兩面針堿重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

2.9 精密度試驗(yàn) 精密吸取濃度為17.99μg/mL的氯化兩面針堿對(duì)照品溶液10μL，按上述色譜條件，連續(xù)測(cè)定5次，測(cè)得氯化兩面針堿峰面積積分值分別為235.44、235.51、234.92、235.09、235.10，平均峰面積235.21，RSD=0.11%，說明儀器精密度良好。

2.10 回收率試驗(yàn) 精密稱取6份供試品(批號(hào)：1603056F，已測(cè)氯化兩面針堿含量為2.92mg/g)，每份約0.15g，按1∶1比例加入對(duì)照品儲(chǔ)備溶液(含氯化兩面針堿299.88μg/mL)1.5mL，揮去溶劑。然后按供試品溶液處理方法同法處理，將處理好的供試品溶液按含量測(cè)定方法同法測(cè)定，計(jì)算平均回收率為99.88%，RSD為0.50%。表明回收率較好，該方法準(zhǔn)確度較高。結(jié)果見表3。

表3 回收率試驗(yàn)結(jié)果 (n=6)

2.11 樣品含量測(cè)定 取3個(gè)批號(hào)的三九胃泰顆粒樣品(每批精密稱定0.3g，各兩份)，依法制備供試品溶液，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，按外標(biāo)法分別計(jì)算含量，3批樣品中氯化兩面針堿的平均含量為3.01mg/g。結(jié)果見表4。

表4 樣品含量結(jié)果

3 討論

3.1 供試品溶液的提取方法的選擇 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)采用70%甲醇超聲法[2]、80%乙醇回流法[7]、索式提取法[10]三種方法對(duì)三九胃泰顆粒中氯化兩面針堿進(jìn)行提取，通過回收率實(shí)驗(yàn)確定采用70%甲醇超聲法回收率最高。

3.2 流動(dòng)相的選擇 實(shí)驗(yàn)中采用了三種流動(dòng)相對(duì)氯化兩面針堿對(duì)照品溶液進(jìn)行高效液相色譜法檢測(cè)，采用0.2%的磷酸二氫鉀溶液-乙腈(55∶45)加磷酸調(diào)pH值至3.0作為流動(dòng)相[7]，其峰保留時(shí)間較短，會(huì)受樣品雜質(zhì)峰影響；采用乙腈-水-磷酸-三乙胺(75∶25∶1∶1)作為流動(dòng)相[8-9]，其峰形較差，保留時(shí)間長(zhǎng)；采用流動(dòng)相A:乙睛；B:0.2%的甲酸-三乙胺溶液，進(jìn)行洗脫(25∶75)[2]，能夠有效進(jìn)行分離，峰形較好。

3.3 柱溫的選擇 在實(shí)驗(yàn)中采用25℃、30℃、40℃的柱溫及室溫下進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)不同的柱溫對(duì)試驗(yàn)無明顯影響，故本實(shí)驗(yàn)采用25℃柱溫進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

綜上，該方法具有良好的精密度和準(zhǔn)確性，回收率較好，同時(shí)操作簡(jiǎn)便，重復(fù)性好，可以對(duì)三九胃泰顆粒進(jìn)行更好的質(zhì)量控制。

[1]張震.三九胃泰顆粒治療功能性消化不良的臨床觀察[D].武漢:湖北中醫(yī)藥大學(xué),2014.

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Using HPLC Method to Determine the Content of the Two Side of Choride in the Tri-ninth Gastric Granules

YANG Xuefen LU Xiaoshan

The Food and Drug Tests of Diqing Tibetan Autonomous Prefecture,Shangrila 674499,China

Objective To establish the method of HPLC determination for nitidine chloride in Sanjiuweitai granules.Methods Chromatograhy separation was carried out on an Eclipse plus C18(4.6mm×250.0mm),using mobile phase A:acetonitrile; B:0.2% formic acid-captured the (25∶75), triethylamine solution for elution; online.And an UV detection wavelength of 271nm at a flow rate of 1.0mL·min-1at maintaining column temperature at 25℃.The extracted with 70% ethanol reflux method.Results The calibration of nitidine chloride was linear between 0.0600～0.5997μg·mL-1,the linear regression equation wasY=1316.9176X-0.5712,r=0.9999.The average recovery rate was 99.88% andRSDwas0.50%.Conclusion It is simple and accurate with a reproducibility to used the method of High performance liquid chromatography determination for nitidine chloride in Sanjiuweitai granules.

High Performance Liquid Chromatography (HPLC); Sanjiuweitai Granules; Nitidine Chloride

楊學(xué)芬(1971-)，女，納西族，本科，主管藥師，研究方向?yàn)樗帉W(xué)。E-mail:895803766@qq.com

R284

A

1007-8517(2017)13-0025-03

2017-04-27 編輯：穆麗華)