梅喜平,鄭 鯤,邵碧波,袁利學(xué),馮輝斌*

(1鄂東醫(yī)療集團(tuán)黃石市中心醫(yī)院,湖北理工學(xué)院附屬醫(yī)院重癥醫(yī)學(xué)科,黃石 435000;2鄂東醫(yī)療集團(tuán)黃石市中心醫(yī)院,湖北理工學(xué)院附屬醫(yī)院腎臟疾病發(fā)生與干預(yù)湖北省重點實驗室;*通訊作者,E-mail:fhb1022hs@sina.com)

microRNA-211在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及其與臨床病理預(yù)后的關(guān)系

梅喜平1,2,鄭 鯤1,2,邵碧波1,2,袁利學(xué)1,2,馮輝斌1,2*

(1鄂東醫(yī)療集團(tuán)黃石市中心醫(yī)院,湖北理工學(xué)院附屬醫(yī)院重癥醫(yī)學(xué)科,黃石 435000;2鄂東醫(yī)療集團(tuán)黃石市中心醫(yī)院,湖北理工學(xué)院附屬醫(yī)院腎臟疾病發(fā)生與干預(yù)湖北省重點實驗室;*通訊作者,E-mail:fhb1022hs@sina.com)

目的 探討膠質(zhì)瘤組織中microRNA-211(miR-211)的表達(dá)及其在預(yù)測膠質(zhì)瘤患者預(yù)后中的價值。 方法 qRT-PCR法檢測52例神經(jīng)膠質(zhì)瘤組織以及12例正常腦組織中miR-211的表達(dá)水平,分析其與膠質(zhì)瘤患者臨床病理特征及其預(yù)后之間的關(guān)系。 結(jié)果 膠質(zhì)瘤組織中miR-211的表達(dá)水平(0.41±0.24)明顯低于正常腦組織(1.00±0.13,P<0.001),并且與WHO分級呈負(fù)相關(guān)趨勢(WHO Ⅲ-Ⅳ,0.21±0.14vsWHO Ⅰ-Ⅱ,0.60±0.18,P=0.016)。膠質(zhì)瘤組織中miR-211的表達(dá)水平與WHO分級和KPS評分密切相關(guān),而與患者年齡、性別、腫瘤位置、腫瘤直徑等均無關(guān)。miR-211高表達(dá)組患者的生存率明顯高于miR-211低表達(dá)組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.037)。膠質(zhì)瘤的WHO分級增高、KPS評分<80分及miR-211低表達(dá)均是影響膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的危險因素。 結(jié)論 miR-211在膠質(zhì)瘤組織中呈低表達(dá),與膠質(zhì)瘤患者預(yù)后顯著相關(guān),可作為預(yù)測膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的獨立因子及治療新靶點。

膠質(zhì)瘤; microRNA-211; 預(yù)后

神經(jīng)膠質(zhì)瘤大約占顱內(nèi)腫瘤的46%,發(fā)病率為(3-10)/10萬[1]。由于神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞具有無限增殖的特征以及極強的侵襲性,因而其呈浸潤性生長,很容易侵犯到周圍正常腦組織,且生長迅速,手術(shù)通常很難將其完全切除,術(shù)后復(fù)發(fā)率較高,患者的生存時間短、死亡率高、預(yù)后差。盡管目前采用手術(shù)切除聯(lián)合放療、化療的治療方式取得了一定的進(jìn)展,但治療效果遠(yuǎn)非令人滿意[2]。早期缺乏有效的診斷及治療靶點,是目前膠質(zhì)瘤診療中的難點。近年來,探索可反映膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的標(biāo)志物和有效的治療靶點是目前研究的熱點。

microRNA(miRNA)是一類為19-25個核苷酸的內(nèi)源性非編碼小RNA,廣泛存在于真核生物中。miRNA通常與靶基因mRNA的3′端非翻譯區(qū)(3′UTR)結(jié)合調(diào)控靶基因表達(dá)[3]。近年來,越來越多的研究發(fā)現(xiàn)異常表達(dá)的miRNA可影響促癌基因或抑癌基因的功能從而促進(jìn)或者抑制腫瘤的形成和進(jìn)展。先前的研究證實miR-211可抑制肝癌、黑色素瘤以及口腔癌等的發(fā)生發(fā)展[4-6]。但miR-211在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及其與患者臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系尚不清楚。本研究通過檢測miR-211在不同級別膠質(zhì)瘤組織和正常腦組織中的表達(dá),分析其與膠質(zhì)瘤患者臨床病理特征以及預(yù)后之間的關(guān)系,從而為臨床上膠質(zhì)瘤的早期診斷及治療提供新的思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究回顧性分析黃石市中心醫(yī)院2009-02～2011-12期間收治的52例神經(jīng)膠質(zhì)瘤患者的臨床資料,所有入選患者均具備完整的術(shù)后5年隨訪資料。所有病例均行手術(shù)切除腫瘤組織,且入選病例術(shù)前均未行放化療。所有切除的腫瘤組織標(biāo)本立刻儲存在-80 ℃液氮中,以備分離提取RNA。入選患者中男性31例,女性21例,年齡在26-77歲,平均56歲。根據(jù)2007年WHO中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤分類標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行組織學(xué)分級:Ⅰ級8例,Ⅱ級11例,Ⅲ級19例,Ⅳ級14例。另外12例正常腦組織標(biāo)本取自因重型顱腦損傷需行內(nèi)減壓術(shù)的患者。該研究獲得黃石市中心醫(yī)院倫理委員會同意,所有患者術(shù)前均簽署知情同意書,昏迷患者由直系親屬代簽。

1.2 膠質(zhì)瘤組織和正常腦組織中miR-211的檢測

膠質(zhì)瘤組織和正常腦組織標(biāo)本中總RNA采用Trizol法提取(Invitrogen,CA,USA),然后采用紫外分光光度計來確定其純度和濃度,測定組織標(biāo)本在波長260 nm和280 nm處的吸光度比值,并計算OD260/OD280,確保OD值在1.8-2.1。應(yīng)用qRT-PCR檢測膠質(zhì)瘤組織和正常腦組織標(biāo)本中miR-211的表達(dá)水平,以RNU6B為內(nèi)參。所有樣品至少重復(fù)3次。

1.3 隨訪

受試者從手術(shù)之日起至少每3月以門診或入院復(fù)查、電話等隨訪方式進(jìn)行患者預(yù)后隨訪,隨訪資料同時進(jìn)行更新。隨訪截止日期為2016年12月。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 miR-211在膠質(zhì)瘤組織中表達(dá)明顯降低

qRT-PCR檢測結(jié)果顯示,與正常腦組織(1.00±0.13)相比,膠質(zhì)瘤組織中miR-211表達(dá)水平(0.41±0.24)顯著下降(P<0.001)。miR-211表達(dá)水平隨著膠質(zhì)瘤WHO分級的增高而降低(WHO Ⅲ-Ⅳ0.21±0.14vsWHO Ⅰ-Ⅱ0.60±0.18,P=0.016),提示miR-211表達(dá)水平與WHO分級呈負(fù)相關(guān)趨勢。

2.2 miR-211表達(dá)與膠質(zhì)瘤臨床病理特征的關(guān)系

miR-211在所有膠質(zhì)瘤病理組織樣本中平均的表達(dá)水平為0.41±0.24,據(jù)此,將患者分為兩組:miR-211低表達(dá)組(31例,miR-211表達(dá)低于平均水平)和miR-211高表達(dá)組(21例,miR-211表達(dá)高于平均水平)。進(jìn)一步研究miR-211的表達(dá)水平與臨床病理特征的關(guān)系,結(jié)果顯示:膠質(zhì)瘤組織中低表達(dá)水平的miR-211與高組織學(xué)分級和低KPS評分密切相關(guān),而與患者年齡、性別、腫瘤位置、腫瘤直徑等均無關(guān)(見表1)。

2.3 miR-211的表達(dá)與膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的關(guān)系

Kaplan-Meier分析結(jié)果顯示,miR-211高表達(dá)組患者的生存率明顯高于miR-211低表達(dá)組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.037,見圖1)。

為了進(jìn)一步研究miR-211的表達(dá)在膠質(zhì)瘤患者中的預(yù)后價值,本研究進(jìn)行了包括年齡、性別、KPS評分、組織學(xué)分級、腫瘤直徑、腫瘤位置、miR-211表達(dá)水平等影響因素的單因素生存分析,結(jié)果顯示miR-211低表達(dá)、KPS評分<80分、高組織學(xué)分級是膠質(zhì)瘤患者預(yù)后不良的指標(biāo)(見表2)。為了研究miR-211的表達(dá)是否是膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的獨立因素,進(jìn)行多因素Cox比例風(fēng)險回歸模型,結(jié)果顯示:miR-211低表達(dá)、KPS評分<80分、高組織學(xué)分級均是影響膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的獨立危險因素(見表3)。

表 1 miR-211表達(dá)與膠質(zhì)瘤患者臨床病理特征的關(guān)系 (例)

Table 1 Relationship between the expression level of miR-211 and clinicopathological characteristics in glioma patients (cases)

臨床病理特征n高表達(dá)(n=21)低表達(dá)(n=31)χ2p年齡00270．870 <45歲23914 ≥45歲291217性別07270394 男311417 女21714組織學(xué)分級64490011? Ⅰ-Ⅱ級19127 Ⅲ-Ⅳ級33924KPS評分59640015? ≥80分241410 <80分28721腫瘤直徑03840535 <4cm271215 ≥4cm25916腫瘤位置05720903 額部19811 頂部1257 顳部15510 其他部位633

圖1 miR-211高表達(dá)組和低表達(dá)組患者生存率的比較Figure 1 Comparison of overall survival rate in glioma patients with high miR-211 expression and low miR-211 expression

3 討論

腦膠質(zhì)瘤是神經(jīng)系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤,其惡性程度高、易復(fù)發(fā)、預(yù)后較差。目前的治療方法包括手術(shù)切除、放療和化療,神經(jīng)膠質(zhì)瘤患者的預(yù)后仍然很差,尤其是高級別的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者,其生存時間僅為12-15個月[7]。目前,膠質(zhì)瘤的臨床診療中缺乏有效的可預(yù)測膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的生物學(xué)標(biāo)志物。盡管大量的研究證實膠質(zhì)瘤患者的預(yù)后與許多因素有關(guān),包括WHO分級、KPS評分等,然而患者的異質(zhì)性使得這些因素不能精確評估患者預(yù)后[8]。因此深入研究膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展的分子機制,尋找一種可靠的可準(zhǔn)確預(yù)測膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的標(biāo)志物,從而為膠質(zhì)瘤的早期診斷、治療以及評價預(yù)后提供新的思路。

表 2 膠質(zhì)瘤患者總生存期的單因素Cox分析結(jié)果

Table 2 Univariate Cox regression analysis of overall survival in glioma patients

臨床病理特征 HR95%CIP 年齡(<45歲vs≥45歲)13360721-25140384 性別(男vs女)12280686-22470526 KPS評分(<80分vs≥80分)19351126-35260026 組織學(xué)分級(Ⅰ-Ⅱ級vsⅢ-Ⅳ級)18231061-33250041 腫瘤直徑(<4cmvs≥4cm)13790829-25740352 腫瘤位置 頂部vs額部07240298-17260768 顳部vs額部06430293-15090811 其他部位vs額部14050826-25570407 miR?211表達(dá)水平(低vs高)25871436-48610005

表 3 膠質(zhì)瘤患者總生存期的多因素Cox分析結(jié)果

Table 3 Multivariate Cox regression analysis of overall survial in glioma patients

臨床病理特征 HR95%CIp 年齡(<45歲vs≥45歲)12090626-2315 0534 性別(男vs女)15120637-3434 0327 KPS評分(<80分vs≥80分)26311411-4964 0008 組織學(xué)分級(Ⅰ-Ⅱ級vsⅢ-Ⅳ級)24221323-4526 0014 腫瘤直徑(<4cmvs≥4cm)17050811-3652 0235 腫瘤位置 頂部vs額部08380371-1926 0802 顳部vs額部07660327-1783 0895 其他部位vs額部13180809-2335 0468 miR?211表達(dá)水平(低vs高)29821734-5863<0001

近年來,越來越多的研究證實miRNA可在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)目標(biāo)靶基因的表達(dá),影響腫瘤細(xì)胞的增殖、分化、遷移以及凋亡等生理過程,從而在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮促進(jìn)或者抑制作用。很多研究同時發(fā)現(xiàn)很多miRNAs在腫瘤組織中的表達(dá)水平與患者的生存率密切相關(guān),可作為評價腫瘤患者預(yù)后的指標(biāo)。例如在膠質(zhì)瘤組織中表達(dá)下調(diào)的miR-34a[9]、miR-203[10]and miR-145[11]等,以及表達(dá)上調(diào)的miR-21[12]、miR-10b[13]、miR-650[14]等均與膠質(zhì)瘤患者的不良預(yù)后密切相關(guān)。也有研究發(fā)現(xiàn)異常表達(dá)的miR-211參與了許多腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程[15,16]。Asuthkar的研究團(tuán)隊[17]證實,miR-211可抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖和侵襲性,誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的凋亡,提示miR-211未來可能作為治療膠質(zhì)瘤的新靶點。然而,miR-211評價膠質(zhì)瘤患者臨床預(yù)后的價值卻沒有報道。在這里,我們將調(diào)查miR-211的表達(dá)與膠質(zhì)瘤患者的臨床病理特征以及臨床預(yù)后之間的關(guān)系。

該研究中,我們應(yīng)用RT-PCR技術(shù)檢測miR-211在膠質(zhì)瘤組織和正常腦組織中的表達(dá),結(jié)果顯示,miR-211在膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)水平顯著低于正常腦組織。進(jìn)一步分析miR-211的表達(dá)水平與膠質(zhì)瘤患者臨床病理特征之間的關(guān)系,結(jié)果顯示:膠質(zhì)瘤組織中miR-211的表達(dá)水平與WHO分級、KPS評分密切相關(guān),而與患者年齡、性別、腫瘤位置、腫瘤直徑等均無關(guān)。最后,本研究探討了miR-211的表達(dá)與膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的關(guān)系。本研究的隨訪數(shù)據(jù)顯示,miR-211高表達(dá)組患者的5年生存率明顯高于miR-211低表達(dá)組。同時研究證實miR-211在腫瘤組織中的低表達(dá)可作為評價膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的獨立因素。

綜上,本研究證實miR-211在膠質(zhì)瘤組織中表達(dá)降低,且其表達(dá)水平與膠質(zhì)瘤患者的臨床預(yù)后有關(guān),可作為預(yù)測膠質(zhì)瘤患者臨床預(yù)后的獨立危險因素,而miR-211在膠質(zhì)瘤中的作用機制,是否還有更多的靶基因以及信號通路參與其中,將是我們團(tuán)隊下一步的研究方向。

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The expression of microRNA-211 in glioma tissues and its value in predicting prognosis

MEI Xiping1,2,ZHENG Kun1,2,SHAO Bibo1,2,YUAN Lixue1,2,FENG Huibin1,2*

(1DepartmentofIntensiveCareUnit,HuangshiCentralHospital,AffiliatedHospitalofHubeiPolytechnicUniversity,EdongHealthcareGroup,Huangshi435000,China;2HubeiKeyLaboratoryofKidneyDiseasePathogenesisandIntervention,HuangshiCentralHospital,AffiliatedHospitalofHubeiPolytechnicUniversity,EdongHealthcareGroup;*Correspondingauthor,E-mail:fhb1022hs@sina.com)

ObjectiveTo investigate the expression of microRNA-211(miR-211) in glioma tissues and assess its relationship with prognosis of glioma patients.MethodsRT-PCR was performed to examine the expression level of miR-211 in 52 glioma tissues and 12 normal brain tissues. The correlation of miR-211 with clinicopathological factors and prognosis was investigated.ResultsThe expression of miR-211 was significantly lower in glioma tissues than that in normal brain tissues(0.41±0.24vs1.00±0.13,P< 0.001), and negatively associated with advanced WHO classification(WHO Ⅲ-Ⅳ0.21±0.14vsWHO Ⅰ-Ⅱ0.60±0.18,P=0.016).The miR-211 expression level was significantly lower in patients with the advanced WHO pathological grade of glioma and low KPS. However,the miR-211 expression level was not significantly associated with age, gender, tumor location, or tumor diameter. Furthermore, the overall survival rate of glioma patients with low miR-211 expression was significantly lower than that of patients with high miR-211 expression(P=0.037).Advanced WHO grade, KPS score less than 80 scores,and low expression of miR-211 were the independent risk factors for predicting the poor prognosis of glioma patients.ConclusionThe miR-211 is down-regulated in glioma tissues and associated with the prognosis of glioma patients. The miR-211 might be an independent prognostic indicator and a potential therapeutic target for glioma patients.

glioma; microRNA-211; prognosis

梅喜平,男,1981-09生,碩士,主治醫(yī)師,E-mail:270303147@qq.com

2017-03-29

R730.264

A

1007-6611(2017)07-0711-04

10.13753/j.issn.1007-6611.2017.07.016